上海市甜菜夜蛾對蟲螨腈的抗藥性及風(fēng)險評價

王 欣，高聰芬，何翠娟，楊銀娟，黃 儉，李雅珍

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院農(nóng)藥科學(xué)系/農(nóng)業(yè)部作物病蟲害監(jiān)測與防控重點開放實驗室，江蘇南京210095;2.上海農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，上海201103;3.上海市奉賢區(qū)蔬菜技術(shù)推廣站，上海201499;4.上海市金山區(qū)蔬菜技術(shù)推廣中心，上海201599;5.上海市寶山區(qū)蔬菜科學(xué)技術(shù)推廣站，上海200433)

甜菜夜蛾Spodoptera.exigua Hübner屬鱗翅目，夜蛾科，是一種廣泛性分布的多食性重要農(nóng)業(yè)害蟲，在我國南北各地均有發(fā)生，以幼蟲為害［1，2］。蟲螨腈是由美國氰胺公司上世紀(jì)80年代后期開發(fā)的一種新型殺蟲劑，對作物安全，有效施用量低。該農(nóng)藥可防治包括鱗翅目、鞘翅目、半翅目和雙翅目在內(nèi)的多種害蟲，還可防治多種害螨 (包括葉螨)，所以它被廣泛使用在蔬菜、水果及作物上［3］。隨著蟲螨腈連續(xù)多年的使用，并且由于其使用范圍比較廣，其抗性的發(fā)展也成為人們逐漸關(guān)注的問題［4－7］。2010年前由于上海地區(qū)大量使用蟲螨腈防治甜菜夜蛾，導(dǎo)致本地區(qū)甜菜夜蛾田間種群對蟲螨腈的抗藥性顯著升高，田間防效差，因此自2010年之后逐漸停用，取而代之使用氯蟲苯甲酰胺、甲氨基阿維菌素等藥劑。但自2015年起部分地區(qū)在田間使用蟲螨腈時發(fā)現(xiàn)其田間的防效又可達90%以上，故為進一步摸清上海地區(qū)甜菜夜蛾對蟲螨腈的抗藥性水平，為蟲螨腈的合理使用和甜菜夜蛾的抗藥性治理提供依據(jù)。本研究通過浸葉法監(jiān)測了上海4個地區(qū) (崇明、松江、奉賢及浦東新區(qū))甜菜夜蛾對蟲螨腈的抗藥性并進行了蟲螨腈防治甜菜夜蛾的大田藥效試驗。在室內(nèi)抗性篩選的基礎(chǔ)上，研究了上海甜菜夜蛾田間種群對蟲螨腈的抗性現(xiàn)實遺傳力。

1 材料與方法

1.1 供試甜菜夜蛾 田間監(jiān)測種群:2016或2017年采自上海崇明、松江、奉賢及浦東新區(qū)，在室內(nèi)用人工飼料飼養(yǎng)至3齡中期時供測定。

室內(nèi)篩選起始種群:2015年8月采自上海的甜菜夜蛾田間種群在室內(nèi)飼養(yǎng)9代后，采用人工飼料感染法在室內(nèi)用蟲螨腈對其進行抗性篩選。

1.2 供試藥劑 94.5%蟲螨腈原藥，由巴斯夫歐洲公司提供;10%蟲螨腈懸浮劑，巴斯夫歐洲公司生產(chǎn)，市售

1.3 室內(nèi)毒力測定 采用中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗準(zhǔn)則殺蟲劑第14部分:浸葉法》［8］進行室內(nèi)毒力測定，根據(jù)藥劑的作用特點，蟲螨腈處理48 h后檢查死蟲數(shù)，計算死亡率。

1.4 田間藥效試驗 按照農(nóng)藥田間試驗準(zhǔn)則(GB/T17980.13－2000)進行田間試驗。試驗作物為甘藍，制劑用量為50g/667m2，以低齡幼蟲為主時進行噴霧防治，采用定點定株法，施藥前調(diào)查蟲口基數(shù)，施藥后3 d和7 d查殘蟲數(shù)。

1.5 抗性篩選方法 甜菜夜蛾對蟲螨腈的抗性篩選采用人工飼料感染法，以初孵幼蟲測定的LC50值為參考，設(shè)定一定的篩選濃度，該濃度使甜菜夜蛾初孵幼蟲48h后的死亡率保持在60%～70%左右。每個指形管內(nèi)置混藥飼料接初孵幼蟲5～8頭，每代的篩選量為800～1 000頭左右 (根據(jù)蟲量情況而定)。48h后將存活幼蟲挑出轉(zhuǎn)入到裝有正常人工飼料的試管內(nèi)繼續(xù)飼養(yǎng)，直到化蛹。

1.6 抗性風(fēng)險評估 根據(jù)閾值分析法［9］，抗性現(xiàn)實遺傳力 (h2)可用公式h2=R/S計算:

式 (1)中R為選擇反應(yīng)(response to selection)，終LC50值為篩選n代后下一代的LC50值，始LC50值為篩選前親代的LC50值;

式 (2)中σp為表現(xiàn)型標(biāo)準(zhǔn)差 (phenotypic standard deviation)，是由篩選各代毒力回歸線的斜率值bi求得。

式 (3)中S為選擇差異 (selection differential)，i為選擇強度 (intensity of selection)，i可根據(jù)公式i﹦1.583–0.019 333 6P+0.000 042 8P2+3.651 94/P(10＜P＜80)(P=100－平均校正死亡率)計算求得。

2 結(jié)果與分析

2.1 甜菜夜蛾對蟲螨腈的抗藥性 用浸葉法監(jiān)測了上海崇明、松江、奉賢及浦東新區(qū)4個地區(qū)甜菜夜蛾對蟲螨腈的抗藥性，結(jié)果表明:各種群對蟲螨腈的抗性倍數(shù)為0.9～5.2，處于敏感至低水平抗性 (表1)。

表1 甜菜夜蛾對蟲螨腈的抗藥性監(jiān)測

防治甜菜夜蛾田間效果表明 (表2)，蟲螨腈對甜菜夜蛾具有良好的防治效果，2016年(2017年)藥后3d的防效為80.1% ～100.0%(85.4% ～94.3%)，藥后7d的防效為89.9% ～100.0%(90.2% ～95.3%)。

2.2 甜菜夜蛾對蟲螨腈的抗性篩選 2015年8月采自上海的甜菜夜蛾田間種群在室內(nèi)飼養(yǎng)9代后，用蟲螨腈在室內(nèi)連續(xù)篩選10代。在開始篩選的前4代，抗性水平呈下降趨勢，F(xiàn)5代后抗性水平開始上升，至F8代時抗性倍數(shù)上升0.4倍，但由于F9代測定時天氣突然變冷，并且有一部分感染病毒，導(dǎo)致活力下降，試蟲受藥劑影響的敏感性上升，抗性水平又有所回落。LC50值由篩選前的18.823 mg/L下降到篩選后的12.965 mg/L，篩選后抗性下降了30%，與敏感種群相比的抗性倍數(shù)為2.1倍，為敏感性水平(表3)。

表2 蟲螨腈防治甜菜夜蛾的田間試驗結(jié)果

表3 上海甜菜夜蛾種群對蟲螨腈的室內(nèi)抗性篩選

2.3 甜菜夜蛾對蟲螨腈抗性現(xiàn)實遺傳力估算 經(jīng)過連續(xù)10代的抗性篩選，甜菜夜蛾對蟲螨腈的抗性現(xiàn)實遺傳力 (h2)為－0.041 4。由此推斷連續(xù)篩選或田間連續(xù)幾代用蟲螨腈防治甜菜夜蛾，蟲螨腈抗性發(fā)展緩慢，甜菜夜蛾對蟲螨腈具有較低的抗性風(fēng)險 (表4)。

表4 甜菜夜蛾室內(nèi)篩選種群對蟲螨腈的現(xiàn)實遺傳力估算

3 討論

從室內(nèi)抗藥性監(jiān)測結(jié)果看，各監(jiān)測地區(qū)甜菜夜蛾對蟲螨腈的抗性倍數(shù)為0.9～5.2，處于敏感至低水平抗性。在田間推薦用藥量50 g/667m2下，藥后7d的防效也達到85%以上。其原因可能為近8年來上海市幾乎停用蟲螨腈防治甜菜夜蛾，使得甜菜夜蛾田間種群對蟲螨腈的抗性下降所致。

從室內(nèi)抗性風(fēng)險評估結(jié)果來看，上海甜菜夜蛾種群對蟲螨腈的抗性現(xiàn)實遺傳力為－0.041 4，由此可見，甜菜夜蛾對蟲螨腈具有較低的抗性風(fēng)險，這與張文成研究結(jié)果一致［3］。綜合以上結(jié)果可知，蟲螨腈目前可作為上海地區(qū)防治甜菜夜蛾的優(yōu)選藥劑之一。

抗性風(fēng)險評估一般用于特定環(huán)境中藥劑使用后出現(xiàn)抗性可能性的預(yù)測，就是害蟲對某一殺蟲劑的產(chǎn)生抗性的能力作評估［11］。室內(nèi)抗性篩選的結(jié)果用來評價田間的抗性風(fēng)險具有一定局限性。一方面，為使篩選能夠進行，室內(nèi)篩選死亡率一般控制較低，并且室內(nèi)僅限于3齡幼蟲，每代次僅被篩選1次。而田間防效一般在90%左右，并且種群被施藥時齡期并不一致，且被受藥的次數(shù)因防效影響可能會增加，因此田間的h2可能更大［12］。另一方面，由于室內(nèi)溫度、濕度及光照周期等是相對穩(wěn)定和可控的，而田間環(huán)境具有多樣性，所以室內(nèi)的遺傳方差和環(huán)境方差相對田間的較小。同時，由于田間條件下敏感個體的遷入和抗性個體的遷出以及環(huán)境和選擇壓力、交替或輪換用藥、基因突變等因素的影響，表現(xiàn)型變異的遺傳方差和環(huán)境方差波動較大。因此，室內(nèi)估算的h2值會偏高［13，14］。雖然室內(nèi)研究結(jié)果不能直接用于田間，但此結(jié)果可以預(yù)示甜菜夜蛾對蟲螨腈抗性發(fā)展的趨勢，仍可作為田間防治的參考。