NF-κB活化受體因子在胃癌中的表達(dá)及臨床意義

李冬陽(yáng)，李智，曲晶磊，曲秀娟，劉云鵬

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，沈陽(yáng) 110001）

胃癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，臨床病例多以進(jìn)展期為主［1］，局部及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是胃癌患者生存率低的主要原因。胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)涉及腫瘤生物學(xué)行為、轉(zhuǎn)移途徑、轉(zhuǎn)移器官特征等多重因素的復(fù)雜過(guò)程。

NF-κB活化受體因子 （receptor activator of NF-κB，RANK） 是腫瘤壞死因子受體超家族 （tumor necrosis factor receptor superfamily，TNFRS） 的成員。RANK最初從樹(shù)突狀細(xì)胞中克隆出來(lái)，被發(fā)現(xiàn)和證實(shí)在溶骨過(guò)程以及淋巴結(jié)發(fā)育中有重要作用，屬于Ⅰ類跨膜蛋白［2-3］。既往研究［4-5］證明，RANK在乳腺癌、肺癌、前列腺癌、惡性黑色素瘤、腎癌等腫瘤細(xì)胞表面均有表達(dá)。

RANK主要通過(guò)RANK/RANKL/OPG通路發(fā)揮作用。近年來(lái)的研究［6-9］發(fā)現(xiàn)，此通路可誘導(dǎo)RANK陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的遷移轉(zhuǎn)移。而RANK在胃癌細(xì)胞的表達(dá)以及RANK/RANKL/OPG通路能否誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞遷移在國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少。

本研究應(yīng)用免疫組化S-P法，檢測(cè)RANK蛋白在胃癌中的表達(dá)情況，并分析其與胃癌臨床病理特征的關(guān)系以及對(duì)生存的影響，旨在探討RANK在胃癌中的表達(dá)及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2006年4月至2011年12月手術(shù)切除的胃癌組織標(biāo)本232例，術(shù)前均未行放療、化療及免疫治療。其中，男166例，女66例。年齡29～80歲，中位年齡60歲。組織學(xué)類型均為腺癌，按分化程度分為：中高分化癌110例，低分化癌100例 （將印戒細(xì)胞癌、黏液細(xì)胞癌劃入低分化腺癌組） ，混合型22例。其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者180例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者52例。浸潤(rùn)深度根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì) （AJCC） 第7版胃癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)分期，T12例，T218例，T338例，T4174例。232例患者全部完成隨訪。中位隨訪時(shí)間為2年。

1.2 試劑

鼠抗人RANK單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)R&D systems公司；S-P檢測(cè)試劑盒及DAB顯色液均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

1.3 檢測(cè)方法

免疫組化染色采用鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶 （S-P） 法，操作方法按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。均經(jīng)DAB顯色，蘇木素復(fù)染。用已知陽(yáng)性對(duì)照片作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 免疫組化檢測(cè)結(jié)果判定

RANK均以胞膜和（或）胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性染色，于400倍視野下隨機(jī)選取5個(gè)不同視野，每個(gè)視野得分由陽(yáng)性細(xì)胞比例和顯色強(qiáng)度決定。陽(yáng)性細(xì)胞比例：≤5%為0分、＞5%～25%為1分，＞25%～50%為2分，＞50%～75%為3分，＞75%為4分；顯色強(qiáng)度：未著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。2項(xiàng)分?jǐn)?shù)乘積為該視野得分，5個(gè)視野分?jǐn)?shù)的平均值為最后得分。最后按得分劃分等級(jí)：0～1分 （-） ，2～4分 （+） ，5～7分 （++） ，≥8分（+++） 。 （-） 和 （+） 為陰性， （++） 和 （+++） 為陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，RANK的表達(dá)與臨床病理因素之間的關(guān)系采用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析；RANK的表達(dá)與生存時(shí)間的關(guān)系采用Kaplan-Meier生存曲線及l(fā)og-rank檢驗(yàn)。P ＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RANK在胃癌組織中的表達(dá)

RANK的陽(yáng)性染色位于細(xì)胞質(zhì)和（或）胞膜，為均勻一致的棕黃色顆粒。在232例胃癌標(biāo)本中有123例RANK高表達(dá)，陽(yáng)性率為53%；亞組分析中，胃癌腸型患者91例標(biāo)本中有64例RANK高表達(dá)，陽(yáng)性率為70.3%。見(jiàn)圖1。

2.2 RANK的表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

RANK的表達(dá)與性別、年齡、分化程度、浸潤(rùn)深度、臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理因素?zé)o顯著相關(guān)性 （P ＞ 0.05），Lauren分型相關(guān) （P = 0.000 1） ，見(jiàn)表1。

圖1 RANK在胃癌組織中的表達(dá) ×100Tab.1 RANK expression in gastric carcinoma original magnification ×100

在亞組分析中，胃癌腸型91例中，RANK的表達(dá)與性別、年齡、浸潤(rùn)深度、臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理因素?zé)o顯著相關(guān)性 （P ＞ 0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移度相關(guān) （P = 0.032） ，見(jiàn)表2。

表1 胃癌組織中RANK的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系Fig.1 The relationship of RANK expression in gastric cancer with clinicopathological characteristics

2.3 RANK的表達(dá)與胃癌患者生存期的關(guān)系

RANK陽(yáng)性組患者生存率為52.8%，陰性組患者生存率為58.7%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P = 0.306） ，見(jiàn)圖2。亞組分析中，腸型胃癌RANK陽(yáng)性組患者生存率高于陰性組，分別為46.9%和74.1%，兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P = 0.016） ，見(jiàn)圖3。彌漫型胃癌RANK陽(yáng)性組與陰性組生存率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P = 0.664） ，見(jiàn)圖4。

3 討論

胃癌中腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)涉及多因素的復(fù)雜過(guò)程，多種基因在此過(guò)程中起重要作用。

RANK是TNFRS的成員。RANK最初被發(fā)現(xiàn)在溶骨過(guò)程以及淋巴結(jié)發(fā)育中有重要作用［10］。既往研究表明，RANK在腫瘤組織中高表達(dá)，如骨肉瘤［11-12］、軟骨肉瘤［13］、乳腺癌［14］、前列腺癌［15-16］、腎癌［17］、口腔鱗癌［18］、肺癌［8］、甲狀腺癌［19］以及黑色素瘤［20］等。本研究結(jié)果顯示，胃癌中RANK高表達(dá)，在細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)均有表達(dá)，陽(yáng)性率為53%，腸型胃癌中陽(yáng)性率為71.7%。

RANK與Lauren分型相關(guān) （P = 0.001） ，提示RANK在腸型及彌漫型胃癌中存在差異性表達(dá)。國(guó)內(nèi)外無(wú)類似報(bào)道。相關(guān)研究提示，腸型胃癌起源于胃黏膜的腸上皮化生，彌漫型胃癌起源于胃固有黏膜，與腸化生無(wú)關(guān)。RANK是否能影響腫瘤細(xì)胞發(fā)生過(guò)程中進(jìn)一步向腸型分化，需要進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

表2 腸型胃癌組織中RANK的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系Fig.2 The relationship of RANK expression in intestinal-type gastric cancer with clinicopathological characteristics

圖2 胃癌組織中RANK的表達(dá)與患者生存期之間的關(guān)系Fig.2 The relationship of the RANK expression in gastric cancer with overall survival

圖3 腸型胃癌組織中RANK的表達(dá)與患者生存期之間的關(guān)系Fig.3 The relationship of the RANK expression in intestinal-type gastric cancer with overall survival

RANK/RANKL/OPG是近年來(lái)研究較多的信號(hào)通路，RANKL和RANK結(jié)合后，可誘導(dǎo)RANK陽(yáng)性的胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移，在乳腺癌，前列腺癌中也有類似報(bào)道［21-23］?？紤]RANK可能是腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移通路的重要受體。此外，在乳腺癌和前列腺癌和肺癌的研究［24］中，研究者提示RANK/RANKL/OPG系統(tǒng)有可引起腫瘤細(xì)胞定向骨轉(zhuǎn)移，在胃癌中相關(guān)研究較少，有文獻(xiàn)［25］報(bào)道，胃癌骨轉(zhuǎn)移不依靠RANK/RANKL/OPG通路。本研究結(jié)果顯示，RANK通路在腸型胃癌高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移度相關(guān) （P = 0.032） 。由此推測(cè)，RANK在腸型胃癌中對(duì)腫瘤細(xì)胞的遷移可能與局部侵襲及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。JONES等［6］在乳腺癌患者轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中發(fā)現(xiàn)RANK表達(dá)。DANIELE等［26］在對(duì)93例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌及小葉乳腺癌研究發(fā)現(xiàn)，RANK與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān) （P ＜ 0.05）。在既往胃癌中研究［27］中存在類似報(bào)道，提示RANK通路在胃癌腫瘤的發(fā)生及誘導(dǎo)淋巴結(jié)和臟器轉(zhuǎn)移中起一定作用。

圖4 彌漫型胃癌組織中RANK的表達(dá)與患者生存之間的關(guān)系Fig.4 The relationship of the RANK expression in diffuse-type gastric cancer with overall survival

RANK高表達(dá)對(duì)患者生存的影響既往研究例數(shù)較少，DANIELE等［26］對(duì)93例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌及小葉乳腺癌的研究發(fā)現(xiàn)，RANK陽(yáng)性的患者存在生存劣勢(shì)，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P = 0.034） 。本研究中，RANK在彌漫型胃癌中與總生存無(wú)關(guān)，而在腸型胃癌中RANK陽(yáng)性的患者存在生存劣勢(shì) （P = 0.016） ?？紤]腸型胃癌中對(duì)生存的影響可能與RANK陽(yáng)性引起腫瘤細(xì)胞局部及淋巴結(jié)侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)。

綜上所述，RANK在胃癌中與Lauren 分型相關(guān)，且在亞組分析中，腸型胃癌患者的RANK表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及生存預(yù)后相關(guān)。RANK可能是一個(gè)胃癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的有價(jià)值的分子標(biāo)記物，可以成為腸型胃癌診斷和治療的一個(gè)新的作用靶點(diǎn)，其具體機(jī)制需要進(jìn)一步研究證實(shí)。