C反應(yīng)蛋白基因多態(tài)性T-757C與高血壓病的相關(guān)性研究

戚 猛

（無(wú)錫市第二中醫(yī)醫(yī)院心內(nèi)科，江蘇 無(wú)錫 214121）

高血壓病是指以體循環(huán)動(dòng)脈血壓增高為主要表現(xiàn)，可伴有心、腦、腎等器官功能或器質(zhì)性病變的臨床綜合癥，是我國(guó)最常見的慢性疾病之一，同時(shí)其也是心腦血管病最主要的危險(xiǎn)因素[1]。多項(xiàng)研究顯示高血壓患者血管壁長(zhǎng)有炎癥反應(yīng)，這種炎癥反應(yīng)在高血壓的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用。C反應(yīng)蛋白（C Reactive Protein，CRP）主要由白介素-6通過(guò)劑量以來(lái)的方式刺激肝細(xì)胞及活化巨噬細(xì)胞合成，對(duì)于血管內(nèi)皮細(xì)胞增生、遷移、動(dòng)脈內(nèi)膜增厚等均具有較強(qiáng)的促進(jìn)作用。研究顯示CRP基因變異對(duì)于體內(nèi)血清CRP水平基因多態(tài)性與高血壓病相關(guān)性方面尚存在爭(zhēng)議[2]，因此本文開展相關(guān)研究旨在探討C反應(yīng)蛋白基因多態(tài)性T-757C與高血壓病的相關(guān)性，為該病的臨床診治提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月～12月在我院就診的原發(fā)性高血壓病患者160例（觀察組）與同期健康體檢血壓正常者160例（對(duì)照組）進(jìn)行研究。納入標(biāo)準(zhǔn)：①觀察組患者符合美國(guó)《2017年成人高血壓預(yù)防、診斷。評(píng)估和管理指南》[3]中的相關(guān)診斷；②受試者者智力正常，可與醫(yī)護(hù)人員進(jìn)行正常交流；③受試者已獲知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①繼發(fā)性高血壓患者；②冠心病史、高膽固醇的患者；③惡性腫瘤的患者；④感染性疾病的患者；⑤結(jié)締組織疾病的患者；⑥肝腎功能異常者。其中，對(duì)照組年齡36～59歲，平均（41.83±9.28）歲，男95例，女65例，BMI指數(shù)19～23 kg/m2，平均（21.09±1.27）kg/m2；對(duì)照組年齡34～58歲，平均（42.09±9.33）歲，男92例，女68例，BMI指數(shù)20～24 kg/m2，平均（21.09±1.27）kg/m2。兩組患者性別、年齡、BMI指數(shù)等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

①DNA提?。簝山M受試者均在禁食10h后抽取空腹外周靜脈血5 mL，置含抗凝劑PU管中，以3000 r/min轉(zhuǎn)速離心15min分離血漿及白細(xì)胞，以酚-氯仿法抽取外周血白細(xì)胞基因組DNA。②目標(biāo)DNA的PCR擴(kuò)增：采用金斯瑞公司生產(chǎn)合成的引物，上游引物為5’-GTAGTAAGATTGACAGCAAG-3’，下游引物為5’-TTCTCATTGTTCAATTCCCA-3’。PCR反應(yīng)體系：總體積50 μL，其中包括5 μL的10×反應(yīng)緩沖液，鎂離子終濃度為2.0 mmol/L，4中脫氧核糖核酸苷酸終濃度為0.2 mmol/L，上下游引物各20 pmol，DNA聚合酶1.25U與末班DNA100ng。PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min，接著同樣溫度下變性1min，53℃退火48s，72℃延伸48 s，共35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸 5min。反應(yīng)完成后將產(chǎn)物置1%瓊脂糖凝膠電泳后分析PCR擴(kuò)增效果。③多態(tài)性測(cè)定：取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物4 μL，限制性內(nèi)切酶Mfe I 2U，10×酶切緩沖液2 μL，滅菌超存水補(bǔ)足體積值20 μL，混勻在37℃下溫育11h。酶切產(chǎn)物置3%瓊脂糖凝膠中電泳，成像后判斷其基因型。取部分PCR擴(kuò)增無(wú)進(jìn)一步測(cè)序。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 CRP基因T-757C多態(tài)性分析及PCR測(cè)序產(chǎn)物

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為314 bp特異性片段，本研究檢測(cè)到3中基因型分別是CC型（314 bp）、TC型（314 bp，234 bp，80 bp）及TT型（234 bp，80 bp）。

2.2 CRP基因T-757C多態(tài)性分布特點(diǎn)

兩組基因型對(duì)比具有顯著性差異，觀察組TC基因型比例明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），兩組TT基因型、CC基因型及等位基因，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 CRP基因T-757C多態(tài)性分布特點(diǎn)

2.3 CRP基因T-757C多態(tài)性TC基因型與高血壓的關(guān)系

單因素分析結(jié)果顯示TC基因型、Glu、HDL及吸煙與高血壓的發(fā)生有關(guān)（P＜0.05），多因素分析結(jié)果顯示在調(diào)整上述因素后CRP基因T-757多態(tài)性TC基因型、HDL與高血壓病的發(fā)生仍具顯著相關(guān)性（P＜0.05）。見表2、3。

表2 CRP基因T-757C多態(tài)性TC基因型與高血壓的關(guān)系單因素分析

表3 CRP基因T-757C多態(tài)性TC基因型與高血壓的關(guān)系多因素分析

3 討 論

CRP為一種炎癥時(shí)相非特異性反應(yīng)蛋白，可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生、遷移及動(dòng)脈內(nèi)膜增厚，對(duì)單核細(xì)胞聚集有明顯的調(diào)節(jié)作用，還可與膜攻擊復(fù)合物共同存在于早期動(dòng)脈粥樣硬化病種[4]；對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞有明顯的刺激作用，可引起細(xì)胞間黏附因子-1的分泌，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞致炎因子的表達(dá)，并可對(duì)巨噬細(xì)胞攝取低密度脂蛋白進(jìn)行調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)為泡沫細(xì)胞，可見CRP與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。有研究顯示高血壓湍流增多和剪切應(yīng)力增高可引起動(dòng)脈內(nèi)膜損傷，動(dòng)脈壁損傷、修復(fù)和動(dòng)脈硬化均伴有炎癥反應(yīng)，CRP與加劇動(dòng)脈粥樣硬化和嚴(yán)重心血管病發(fā)作具顯著的相關(guān)性，可引起血管壁重構(gòu)而使阻力增加，從而引起血壓的升高[5]。

CRP基因在人類染色體1q13.2區(qū)域，全長(zhǎng)約6.8 kb，含有2個(gè)外顯子中間被1內(nèi)含子隔開。關(guān)于CRP基因多天線與心血管疾病日益受到研究者所重視，但其與高血壓病之間的相關(guān)性研究較少[6]。本研究結(jié)果顯示兩組基因型對(duì)比具有顯著性差異，觀察組TC基因型比例明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），兩組TT基因型、CC基因型及等位基因，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示CRP基因多態(tài)性T-757C與高血壓病顯著相關(guān)，大量研究證實(shí)遺傳因素對(duì)血清CRP、白細(xì)胞及白蛋白均有重要的作用，位于啟動(dòng)序列的CRP基因-286C＞T＞A屬于功能性多肽性位點(diǎn)，其可通過(guò)影響逆轉(zhuǎn)錄機(jī)制而影響CRP水平，CRP基因T-757C同樣屬于啟動(dòng)子區(qū)，是DNA分子上能與RNA聚合酶結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄其實(shí)復(fù)合體的區(qū)域，對(duì)于轉(zhuǎn)錄有較強(qiáng)的調(diào)節(jié)作用，但T-757C與-286C＞T＞A存在強(qiáng)連鎖不平衡，因此認(rèn)為T-757C可通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄影響前提mRNA生成而影響翻譯及血清CRP水平，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)行導(dǎo)致血管彈性下降進(jìn)而引起高血壓病的發(fā)生[7]。單因素分析結(jié)果顯示TC基因型、Glu、HDL及吸煙與高血壓的發(fā)生有關(guān)（P＜0.05），多因素分析結(jié)果顯示在調(diào)整上述因素后CRP基因T-757多態(tài)性TC基因型、HDL與高血壓病的發(fā)生仍具顯著相關(guān)性（P＜0.05）。高血壓患者CRP濃度上升可能與血管內(nèi)皮損傷及免疫反應(yīng)有關(guān)，血管內(nèi)皮功能障礙被認(rèn)為是動(dòng)脈粥樣硬化初期最重要的病理改變，高血壓患者血管內(nèi)皮受損可能與長(zhǎng)期血壓較高導(dǎo)致血管內(nèi)皮長(zhǎng)期受壓和受到血流的異常沖擊有關(guān)，損傷的內(nèi)皮可致炎性細(xì)胞粘附、激活單核巨噬細(xì)胞，促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞等進(jìn)入受損細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生IL-1、TNF-α等細(xì)胞因子而刺激細(xì)胞合成CRP[8]。

綜上所述，C反應(yīng)蛋白基因多態(tài)性T-757C與高血壓病的發(fā)病密切相關(guān)，TC基因型可能為高血壓病遺傳易感性基因標(biāo)記之一。因本研究為單中心研究，樣本量較小，取得的結(jié)果可能有一定的偏差，下步將擴(kuò)大樣本量進(jìn)行進(jìn)一步深入研究。