黃花石蒜中的生物堿類成分研究

李正輝，楊會(huì)祥，李 薇，艾洪蓮，何 雋

(中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，武漢430074)

石蒜科石蒜屬植物黃花石蒜(Lycorisaurea)又名忽地笑，生長(zhǎng)在陰暗潮濕的斜坡和石縫中[1]，為多年生草本植物，主要分布在日本、緬甸以及中國(guó)的湖北、湖南、廣西、云南、廣東、福建、四川等地海拔600～2300 m的地區(qū). 黃花石蒜為傳統(tǒng)外用良藥，其鱗莖具有清熱解毒、散結(jié)消腫等功效，可用于治療腫毒疔瘡、毒蛇咬傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等癥. 目前對(duì)黃花石蒜化學(xué)成分的研究，主要集中在生物堿方面. 文獻(xiàn)資料顯示，黃花石蒜中含有多種類型的生物堿[2，3]，其中石蒜堿(lycorine)為重要的抗癌成分，對(duì)多種癌細(xì)胞具有較好的抑制作用[4-6]. 為進(jìn)一步探究黃花石蒜鱗莖的化學(xué)成分，本研究利用現(xiàn)代天然藥物化學(xué)手段，對(duì)產(chǎn)于湖北的黃花石蒜鱗莖進(jìn)行生物堿類成分研究.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 樣品、試劑和儀器

黃花石蒜(L.aurea)的鱗莖于2017年8月采自湖北省大洪山，由中南民族大學(xué)藥學(xué)院艾洪蓮博士鑒定，標(biāo)本存放于中南民族大學(xué)藥學(xué)院.

熔點(diǎn)由四川大學(xué)科儀廠生產(chǎn)的XPC-1 型顯微熔點(diǎn)儀測(cè)定，溫度未校正，旋光在 Horiba SEPA-300上測(cè)定，紅外由Bruker Tensor 27測(cè)定，核磁共振由Bruker AM-400或DRX-500測(cè)定，內(nèi)標(biāo)為TMS，化學(xué)位移(δ)的單位是ppm，偶合常數(shù)(J)的單位為Hz，EI-MS由Thermo Finnigan Trace DSQ 質(zhì)譜儀測(cè)定，HR-FAB-MS 由VG Autospec-3000質(zhì)譜儀測(cè)定.

柱層析硅膠 (200～300 目)、薄層層析硅膠(GF254)和硅膠H由青島海洋化工廠生產(chǎn)，Saphadex LH-20為Pharmcia公司產(chǎn)品，反相硅膠RP-18由Merck公司生產(chǎn)，顯色方法為254及365 nm紫外熒光，10%硫酸乙醇溶液或Dragendorff試劑處理加熱顯色.

1.2 提取和分離

黃花石蒜鱗莖樣品8 kg經(jīng)自然干燥后粉碎，用工業(yè)乙醇室溫提取(3次，每次24 h)后過(guò)濾. 濃縮濾液至無(wú)醇?xì)埩艉蠹尤?%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值為3，加水定容至3 L. 用乙酸乙酯等體積萃取兩次、分餾，水層用10%氨水調(diào)節(jié)pH值為9，再用等體積乙酸乙酯萃取兩次、分餾，回收乙酸乙酯層后濃縮得生物堿提取物總浸膏48 g. 用60 g硅膠拌樣以1.5 kg硅膠柱層析，氯仿-丙酮梯度洗脫，用TLC進(jìn)行檢測(cè)，合并相同餾分，得到4個(gè)餾分.

第1餾分，15 g硅膠拌樣后以500 g硅膠柱層析，石油醚∶丙酮(15∶1～5∶1)洗脫，經(jīng)反復(fù)純化，得到化合物4(7 mg)和5(11 mg).

第2餾分，15 g硅膠拌樣后以400 g硅膠柱層析，氯仿∶丙酮(12∶1～5∶1)洗脫，此后進(jìn)行硅膠常壓柱層析，以石油醚/丙酮，氯仿/丙酮以及氯仿/甲醇等洗脫系統(tǒng)反復(fù)純化，得到化合物1(12 mg)和2(8 mg).

第3餾分，20 g硅膠拌樣后以600 g硅膠柱層析，氯仿∶甲醇(10∶1～5∶1)洗脫，此后進(jìn)行硅膠常壓及中壓柱層析，以氯仿/丙酮、氯仿/甲醇以及甲醇/水等洗脫系統(tǒng)反復(fù)純化，得到化合物3(12 mg).

第4餾分，10 g硅膠拌樣后以300 g硅膠柱層析，氯仿∶甲醇(8∶1～2∶1)洗脫，此后進(jìn)行硅膠常壓、硅膠中壓以及凝膠柱層析，以氯仿/丙酮、氯仿/甲醇以及甲醇/水等洗脫系統(tǒng)反復(fù)純化，得到化合物6(48 mg).

2 結(jié)果與討論

經(jīng)鑒定，化合物1～6分別為： 2,3,9,12-tetramethoxyberbine(1)、tetrahydropalmatine (2)、isocorypalmine (3)、trisphaeridine (4)，4,5-dehydroanhydroly- corine(5)、lycorine(6). 化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示.

圖1 化合物1～6的結(jié)構(gòu)Fig.1 Structures of compounds 1-6

2,3,9,12-Tetramethoxyberbine(1):C21H25NO4; 無(wú)色油狀;1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ:6.88(1H, s, H-4), 6.82(2H, overlap, H-10 and H-11, each 1H),6.67(1H,s,H-1),3.81(3H,s,OMe),3.78(6H,s,OMe × 2),3.76(3H,s,OMe); ESI-MSm/z:356 [M + H]+. 以上波譜數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[7]一致.

Tetrahydropalmatine(2):C21H25NO4; 白色粉末;1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ:6.87(1H,d,J=8.0 Hz,H-12),6.78(1H,d,J= 8.0 Hz,H-11),4.23(1H,d,J= 15.5 Hz,H-8b),3.89(3H,s,OMe),3.87(3H,s,OMe),3.85(6H,s,OMe × 2); ESI-MSm/z356 [M + H]+. 以上波譜數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[8]一致.

Isocorypalmine(3):C20H23NO4; 白色粉末;1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:6.79(1H,d,J= 8.0 Hz,H-11),6.72(1H,d,J= 8.0 Hz,H-12),6.72(1H,s,H-1),6.62(1H,s,H-4),3.89(3H,s,OMe),3.87(3H,s,OMe),3.80(3H,s,OMe);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:147.4(s),146.4(s),146.4(s),143.2(s),129.4(s),127.8(s),127.0(s),126.5(s),124.7(d),114.3(d),111.1(d),108.3(d),60.5(q),59.3(d),56.0(q),55.7(q),53.8(t) 51.5(t),36.1(t),28.9(t). 以上波譜數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[8]一致.

Trisphaeridine(4):C14H9NO2; 無(wú)色晶體(Me2CO);1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ:9.10(1H,s,H-6),8.37(1H,d,J= 8.0 Hz,H-1),8.15(1H,d,J= 8.0 Hz,H-4),7.91(1H,s,H-7),7.69(1H,t,J= 8.0 Hz,H-3),7.63(1H,t,J= 8.0 Hz,H-2),7.34(1H,s,H-10),6.18(2H,s,OCH2O); ESI-MSm/z:224 [M + H]+. 以上波譜數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[9]一致.

4,5-Dehydroanhydrolycorine(5):C16H11NO2; 白色粉末;1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:8.02(1H,d,J= 3.6 Hz,H-12),7.97(1H,s,H-7),7.90(1H,d,J= 8.0 Hz,H-1),7.73(1H,d,J= 8.0 Hz,H-3),7.65(1H,s,H-10),7.44(1H,t,J= 8.0 Hz,H-2),6.88(1H,d,J= 3.6 Hz,H-11),6.15(2H,s,OCH2O),1.22(2H,br s,H-6); ESI-MSm/z:250 [M + H]+. 以上波譜數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[10]一致.

Lycorine(6):C16H17NO4; 無(wú)色晶體(MeOH);1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ:6.79(1H,s,H-10),6.66(1H,s,H-7),5.94 and 5.92(each 1H,s,OCH2O),5.35(1H,br s,H-3);13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ:145.7(s,C-8),145.2(s,C-9),141.7(s,C-4),129.7(s,C-6a),129.6(s,C-10a),118.5(d,C-3),107.0(d,C-10),105.1(d,C-7),100.6(t,OCH2O),71.7(d,C-1),70.2(d,C-2),60.8(d,C-4a),56.7(t,C-6),53.3(t,C-12),40.2(d,C-10b),28.1(t,C-11); ESI-MSm/z:288 [M + H]+. 以上波譜數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[11]一致.