羊角槭愈傷組織誘導(dǎo)、增殖與分化

胡佳卉，王小德

（浙江農(nóng)林大學(xué) 風(fēng)景園林與建筑學(xué)院，浙江 杭州311300）

羊角槭Acer yangjuechi是槭樹科Aceraceae槭屬Acer落葉喬木。該種僅分布于浙江西天目山狹窄的范圍，生長于海拔700 m的疏林中［1］，為浙江省特有種，其數(shù)量極少，長勢衰退。羊角槭種子繁殖能力低，天然更新能力較弱，已經(jīng)陷入滅絕的險境，是中國僅存10株以下的珍稀植物之一［2］，被列為國家二級保護植物。羊角槭系古老的殘遺種，與產(chǎn)自日本的日本羊角槭Acer myabei關(guān)系密切，對研究東亞植物區(qū)系的起源、演化以及古氣候、古地理變遷具有重要價值。植物組織培養(yǎng)技術(shù)對物種種質(zhì)保存、植物育種等方面具有促進作用。目前，國內(nèi)對羊角槭的研究主要包括種子生物學(xué)特征的測定以研究種子深度休眠的原因［3］、 光能和水分利用效率［4］、 基因組DNA提?。?］及葉綠素?zé)晒馓匦匝芯浚?］等方面， 而以羊角槭外植體為材料進行愈傷組織誘導(dǎo)及植株再生方面的研究還未見報道。為解決羊角槭繁殖系數(shù)低、繁殖速度慢，優(yōu)良品種的推廣與培育受到限制，無法滿足大規(guī)模生產(chǎn)需要的問題，以羊角槭的嫩莖和葉片為外植體材料，研究了不同消毒方法、不同基本培養(yǎng)基及不同植物生長調(diào)節(jié)劑組合對羊角槭愈傷組織的誘導(dǎo)、增殖及分化的影響，篩選出最適宜誘導(dǎo)愈傷組織的外植體及培養(yǎng)基配比，為建立羊角槭高效的快繁技術(shù)體系奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

以5～6年生羊角槭當年生幼嫩莖段和葉片為外植體。試驗在浙江農(nóng)林大學(xué)園林學(xué)院組培室進行，樣品于2017年4－6月采自浙江農(nóng)林大學(xué)珍稀植物園。

1.2 方法

1.2.1 外植體處理及消毒 天氣晴朗的清晨，剪取生長狀況良好、無病蟲害的羊角槭當年生幼嫩莖段和葉片，裝袋帶回實驗室備用。用流水輕輕洗凈表面污漬，后用洗潔精溶液浸泡5 min，漂凈后用流水沖洗2 h，瀝干水后置于超凈工作臺，用體積分數(shù)為75%的乙醇消毒30 s，無菌水沖洗3～5遍，后再用1.0 g·kg－1的氯化汞（HgCl2）浸泡消毒，葉片消毒8 min，莖段消毒10 min，無菌水沖洗3～5遍，消毒完后用無菌濾紙吸干表面水分，在超凈工作臺上將葉片切成0.5 cm×0.5 cm大小的方塊，莖段切成0.5～1.0 cm的小段待接種。

1.2.2 外植體取樣時間選擇 分別于4月（處理1）和6月（處理2）剪取生長狀況良好、無病蟲害的羊角槭幼嫩莖段和葉片，處理消毒后接種于木本植物培養(yǎng)基（WPM培養(yǎng)基）+0.5 mg·L－16-芐氨基腺嘌呤（6-BA）+0.3 mg·L－1萘乙酸（NAA）的培養(yǎng)基中， 接種 15 瓶·處理－1， 接種外植體 2 個·瓶－1， 重復(fù) 3 次， 7 d 后統(tǒng)計不同月份取樣的存活率、污染率。

1.2.3 外植體消毒方法選擇 為確定外植體最佳消毒方法，選擇乙醇30 s+氯化汞8 min（處理1），乙醇30 s+氯化汞10 min（處理2），乙醇30 s+氯化汞12 min（處理3）3種消毒方法對羊角槭外植體進行表面消毒，消毒完后接種于 WPM+0.5 mg·L－16-BA+0.3 mg·L－1NAA 的培養(yǎng)基中， 接種 15瓶·處理－1，接種外植體2個·瓶－1，重復(fù)3次，7 d后統(tǒng)計污染率,30 d后統(tǒng)計誘導(dǎo)率。

1.2.4 外植體類型對誘導(dǎo)的影響 分別以羊角槭的嫩莖（處理1）和嫩葉（處理2）為外植體，消毒處理后接種于 WPM+0.5 mg·L－16-BA+0.3 mg·L－1NAA 的培養(yǎng)基中， 接種 15 瓶·處理－1， 接種外植體 2 個·瓶－1，重復(fù)3次，30 d統(tǒng)計愈傷組織誘導(dǎo)情況。

1.2.5 愈傷組織誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基篩選 以1/2MS，MS和WPM為基本培養(yǎng)基，植物生長調(diào)節(jié)劑選擇NAA（0.1， 0.2， 0.3 mg·L－1）， 激動素（KT）（0， 0.5， 1.0 mg·L－1）， 6-BA（0.5， 1.0， 1.5 mg·L－1）， 根據(jù)L9（3）4設(shè)計四因素三水平正交試驗表，共配置9組培養(yǎng)基，另配置3組只添加基本培養(yǎng)基不添加任何植物生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基作為對照（表1），接種15瓶·處理－1，接種外植體2個·瓶－1，重復(fù)3次，30 d后統(tǒng)計愈傷組織誘導(dǎo)情況。愈傷組織誘導(dǎo)率=產(chǎn)生愈傷組織的外植體數(shù)/接種的外植體總數(shù)×100%。

1.2.6 愈傷組織增殖最佳培養(yǎng)基篩選 根據(jù)愈傷組織誘導(dǎo)結(jié)果，選取WPM+1.0 mg·L－16-BA為培養(yǎng)基固定成分，分別添加0，0.05，0.10，0.15 mg·L－1的NAA，將誘導(dǎo)出的生長較好的愈傷組織切成大小相近的顆粒，接種到增殖培養(yǎng)基中，30 d后測定愈傷組織的鮮質(zhì)量增量，統(tǒng)計增殖倍數(shù)。愈傷組織增殖倍數(shù)=培養(yǎng)后愈傷組織質(zhì)量/接入時愈傷組織質(zhì)量。

1.2.7 愈傷組織分化最佳培養(yǎng)基篩選 以WPM為基本培養(yǎng)基， 1.0 mg·L－16-BA+0.1 mg·L－1NAA 為固定植物生長調(diào)節(jié)劑成分，分別添加0.5，1.0，1.5，2.0 mg·L－1的TDZ，將誘導(dǎo)及增殖出的生長較好的愈傷組織切成大小相近的顆粒，接種到分化培養(yǎng)基中，30 d后統(tǒng)計出芽數(shù)及分化率。愈傷組織分化率=分化出芽的愈傷組織數(shù)/接種的愈傷組織總數(shù)×100%。

表1 誘導(dǎo)培養(yǎng)各因素質(zhì)量濃度設(shè)置Table 1 Concentration of various factors about induction

1.3 培養(yǎng)條件

所有培養(yǎng)基均添加蔗糖 30 g·L－1， 瓊脂粉 7 g·L－1， 調(diào)節(jié) pH 值至 pH 5.8， 并在 121 ℃，1.1 kg·cm－2壓力下高溫高壓滅菌 20 min待用。培養(yǎng)基接種外植體2個·瓶－1，接種15瓶·處理－1，3次重復(fù)。接種后的材料在光照強度2 000 lx，光照12 h·d－1，溫度（25±2）℃的培養(yǎng)室中進行培養(yǎng)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0進行方差及極差分析［7］，對于差異顯著者采用Tukey多重比較，字母法標記；作圖在Excel軟件下完成。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體取樣時間選擇

處理1的外植體污染率為11.5%，處理2同樣消毒方法處理的外植體接種后污染率為61.7%（表 2），顯著（P＜0.05）高于處理 1， 且處理1的愈傷組織膨大早、生長速度較快，而處理2的愈傷組織生長較為緩慢，說明4月為羊角槭嫩莖嫩葉采樣的最佳時期。

表2 不同取樣時間的污染率Table 2 Contamination rate at different sampling times

2.2 外植體消毒方法選擇

3種處理污染率存在顯著差異（P＜0.05），從高到底依次為處理1，處理2和處理3，污染率分別為25.0%，20.6%和4.7%，而3種處理的誘導(dǎo)率也存在顯著差異（P＜0.05），從高到低依次是處理2，處理3和處理1，誘導(dǎo)率分別為79.1%，68.3%和67.8%（表3）。隨著氯化汞消毒時間的增加，污染率依次降低，誘導(dǎo)率先升高后降低，說明適當時間的氯化汞消毒有利于防治外植體污染，但消毒時間過長可能導(dǎo)致外植體失去生活力從而抑制誘導(dǎo)。綜合污染率和誘導(dǎo)率來看，羊角槭外植體最適合的消毒方法為體積分數(shù)為75%的乙醇30 s+1.0 g·kg－1氯化汞10 min。

表3 不同消毒方法的污染率和誘導(dǎo)率Table 3 Contamination rate and Induction rate by different disinfection methods

2.3 外植體類型對誘導(dǎo)的影響

不同的羊角槭外植體接種到相同的培養(yǎng)基上，第7天后莖段開始膨大，從切口處慢慢開始出現(xiàn)瘤狀物，葉片在第5天后開始卷曲，在第18天后切口靠近葉脈處開始出現(xiàn)顆粒狀物，且極為細小。30 d后統(tǒng)計結(jié)果如表4所示:莖段和葉片的誘導(dǎo)率存在顯著差異（P＜0.05），莖段的誘導(dǎo)率為54.7%，葉片的誘導(dǎo)率為34.0%，莖段愈傷組織顆粒大、愈傷量多，葉片雖也有一定程度的愈傷量，但愈傷組織顆粒小、不能成塊。由此可見，莖段是羊角槭愈傷組織誘導(dǎo)的最佳外植體。

表4 不同外植體的出愈數(shù)與誘導(dǎo)率Table 4 Amount of callus and induction rate of different explants

2.4 愈傷組織誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基篩選

不同基本培養(yǎng)基［8］和植物生長調(diào)節(jié)劑組合均對羊角槭愈傷組織的誘導(dǎo)有不同程度的促進作用。從不同外植體來看，莖段愈傷組織誘導(dǎo)率高于葉片愈傷組織，莖段膨大產(chǎn)生顆粒較大的淡黃色或略偏紅色的或緊致或疏松的愈傷組織，葉片蜷縮，且僅在靠近葉柄的位置長出淡青色的顆粒極小的愈傷組織，均不利于繼代增殖。莖段在添加了植物生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基中均誘導(dǎo)出愈傷組織，愈傷誘導(dǎo)率為21.17%～62.90%，愈傷組織的數(shù)量及形態(tài)方面存在差異。1～3號誘導(dǎo)出的愈傷組織偏紅色，呈小顆粒狀，愈傷發(fā)生量較少，4～6號誘導(dǎo)出的愈傷組織呈白淡黃色，質(zhì)地松軟，顆粒較大，7～9號誘導(dǎo)出的愈傷組織呈淡黃色淡綠色，大顆粒狀，有致密有松軟。

表5顯示：基本培養(yǎng)基對愈傷組織誘導(dǎo)率有顯著影響（P＜0.05），NAA，KT和6-BA對愈傷組織誘導(dǎo)率的影響不顯著，但影響程度略有差異，從高到低依次為6-BA，NAA和KT。綜合表5數(shù)據(jù)可得，最適宜于羊角槭愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為 WPM+0.3 mg·L－1NAA+0.5 mg·L－1KT+0.5 mg·L－16-BA。

表5 愈傷組織誘導(dǎo)正交試驗結(jié)果Table 5 Orthogonal design and results for callus induction

2.5 愈傷組織增殖最佳培養(yǎng)基篩選

由表6可知：植物生長調(diào)節(jié)劑對愈傷組織的增殖有促進作用。當6-BA質(zhì)量濃度不變時，愈傷組織的增殖倍數(shù)隨著NAA質(zhì)量濃度的增加先變大后減小，不添加NAA的處理組增殖不明顯，4個處理之間增殖倍數(shù)差異不顯著（P＞0.05），添加0.1 mg·L－1NAA的處理3增殖倍數(shù)最大，為2.40，增殖效果最佳，愈傷組織膨大最明顯，新產(chǎn)生呈淡綠色的愈傷組織。由此可見，最適宜于羊角槭愈傷組織增殖的培養(yǎng)基為WPM+1.0 mg·L－16-BA+0.1 mg·L－1NAA。

2.6 愈傷組織分化最佳TDZ質(zhì)量濃度篩選

將生長良好的愈傷組織分別接種到TDZ質(zhì)量濃度不同的4種處理培養(yǎng)基中誘導(dǎo)不定芽，培養(yǎng)30 d后，4種處理培養(yǎng)基中均無明顯的不定芽產(chǎn)生，但其生長情況有所不同。4種處理中愈傷組織均有增殖膨大，表面有顆粒狀突起，產(chǎn)生或淺綠色或白綠色的芽點，處理2新增愈傷組織呈深紅褐色，處理3呈淺綠色。4種處理中，隨著TDZ質(zhì)量濃度的增加，產(chǎn)生的芽點數(shù)量也隨之增加，說明TDZ質(zhì)量濃度對愈傷組織的分化有一定影響，較高質(zhì)量濃度的TDZ能促進愈傷組織產(chǎn)生較多不定芽芽點，對愈傷組織分化有促進作用。

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié)論

本研究分別在4和6月進行羊角槭愈傷組織誘導(dǎo)。結(jié)果表明：4月愈傷組織生長快、出愈率大、污染率低。4月正值羊角槭生長季節(jié)，較6月更適宜做愈傷組織誘導(dǎo)試驗。在外植體消毒試驗中，選用了乙醇與氯化汞不同消毒時間的組合。根據(jù)培養(yǎng)后外植體的污染率和誘導(dǎo)率，得出羊角槭外植體最佳消毒方法為體積分數(shù)為75%乙醇消毒30 s+1.0 g·kg－1氯化汞消毒10 min。根據(jù)培養(yǎng)后愈傷組織生長情況可知，最適宜于羊角槭愈傷組織誘導(dǎo)的外植體是其嫩莖，嫩莖愈傷組織誘導(dǎo)率高、誘導(dǎo)出的愈傷組織量大， 利于繼代培養(yǎng)。 羊角槭愈傷組織誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基為 WPM+0.3 mg·L－1NAA+0.5 mg·L－1KT+0.5 mg·L－16-BA，增殖最佳培養(yǎng)基為WPM+1.0 mg·L－16-BA+0.1 mg·L－1NAA，TDZ質(zhì)量濃度的增加有利于羊角槭愈傷組織產(chǎn)生更多不定芽芽點，但誘導(dǎo)其愈傷組織分化出明顯不定芽的培養(yǎng)基配比還有待進一步研究。

表6 植物生長調(diào)節(jié)劑對愈傷組織增殖的影響Table 6 Effect of different plant hormones on callus proliferation

表7 植物生長調(diào)節(jié)劑對愈傷組織分化的影響Table 7 Effect of different plant hormones on callus differentiation

3.2 討論

4月取材的羊角槭外植體較之6月取材的外植體污染率低，且萌動早、生長速度快，出愈率高，更適宜于做初代培養(yǎng)。4月羊角槭處于葉芽萌動、展葉時期，此時植株長速快，新生幼嫩莖葉易于滅菌。6月取材的羊角槭外植體污染率較高，提高氯化汞滅菌時間也難以降低其污染率，且出愈率較低，可能因為其莖葉生長成熟，菌類等污染物侵入木質(zhì)部等細胞組織，表面消毒難以達到消毒目的。組培所選外植體若為莖段，應(yīng)選中度木質(zhì)化的材料。不同樹種的采條最佳時間不同，不同的發(fā)生途徑對最佳外植體有一定的要求，因此，外植體選擇與發(fā)生途徑應(yīng)同時考慮，將兩者有機結(jié)合起來［9］。

植物生長調(diào)節(jié)劑是植物組織培養(yǎng)中的關(guān)鍵物質(zhì)。外植體的誘導(dǎo)和增殖不僅與植物生長調(diào)節(jié)劑的種類有關(guān)，還與其質(zhì)量濃度及配比有關(guān)［10-11］。植物生長調(diào)節(jié)劑在植物不同的發(fā)育階段起決定性作用，其作用和效果也與外植體及愈傷組織本身內(nèi)源激素的種類和質(zhì)量濃度有重要關(guān)系。在植物組織培養(yǎng)過程中，適宜質(zhì)量濃度的細胞分裂素6-BA可以有效地誘導(dǎo)芽的萌發(fā)與不定增殖，而適宜質(zhì)量濃度的生長素可以促進莖的伸長［12］；2,4-D，KT，NAA等植物生長調(diào)節(jié)劑的配比使用有利于外植體愈傷組織的形成，且NAA質(zhì)量濃度越高，形成的愈傷組織質(zhì)地越好［13］。本研究結(jié)果表明：基本培養(yǎng)基類型，6-BA，NAA和KT等植物生長調(diào)節(jié)劑的質(zhì)量濃度配比都能促進羊角槭愈傷組織誘導(dǎo)，但愈傷組織的誘導(dǎo)率、生長狀態(tài)存在一定差異。木本植物培養(yǎng)基（WPM）較之MS和1/2MS對愈傷組織誘導(dǎo)有更好的效果。在3種植物生長調(diào)節(jié)劑中，6-BA處理對羊角槭愈傷組織誘導(dǎo)的效果最明顯。愈傷組織在培養(yǎng)基上生長一段時間后，營養(yǎng)物枯竭，水分散失，并已經(jīng)積累了一些可能對愈傷組織產(chǎn)生有害影響的代謝產(chǎn)物，此時需要將這些組織轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上［14］。在愈傷組織增殖階段，愈傷組織的增殖倍數(shù)隨著NAA質(zhì)量濃度的增加先上升后下降，NAA質(zhì)量濃度為0.1 mg·L－1時，增殖倍數(shù)最大為2.40，說明NAA對愈傷組織增殖有促進作用，但NAA質(zhì)量濃度過高會抑制愈傷組織的發(fā)生，NAA與6-BA的質(zhì)量濃度配比為1∶10時增殖效果最佳。這與劉艷麗等［15］誘導(dǎo)盾葉薯蕷Dioscorea zingibernsis愈傷組織的結(jié)果相似。愈傷組織誘導(dǎo)不定芽分化的試驗中，植物生長調(diào)節(jié)劑的種類比例對分化的影響十分重要。本研究愈傷組織分化階段，添加TDZ有利于羊角槭愈傷組織產(chǎn)生更多不定芽芽點，說明TDZ是誘導(dǎo)不定芽分化的重要生長調(diào)節(jié)劑。這與白芨Bletilla striata［16］愈傷組織分化成不定芽的試驗結(jié)果相似。但本研究中愈傷組織只分化出芽點，并未分化出明顯不定芽，這可能是試驗方案中6-BA，NAA與TDZ的植物生長調(diào)節(jié)劑組合對羊角槭愈傷組織分化出芽的影響不明顯，促使其分化成芽的植物生長調(diào)節(jié)劑組合配比還有待進一步的研究。

4 參考文獻

［1］ 方文培，包士英.中國植物志：第46卷［M］.北京：科學(xué)出版社,1981.

［2］ 張若蕙．浙江珍稀瀕危植物［M］．杭州：浙江科學(xué)技術(shù)出版社，1994．

［3］ 許小連，金荷仙，陳香波，等.瀕危樹種羊角槭種子基本生物學(xué)特征［J］.林業(yè)科技開發(fā)，2012，26（3）：46－49.XU Xiaolian,JIN Hexian,CHEN Xiangbo,et al.Biological characteristics of the seed inAcer yanjuechi,an endangered species ［J］.For Sci Technol,2012,26（3）:46 － 49.

［4］ 王曉燕，楊淑貞，趙明水，等.瀕危植物天目鐵木和羊角槭的光合及蒸騰特性日動態(tài)比較［J］.華東師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）， 2015（2）： 113 － 121.WANG Xiaoyan,YANG Shuzhen,ZHAO Mingshui,et al.Comparative diurnal variations in photosynthesis and transpiration of endangered plant species,Ostrya rehderianaandAcer yangjuechi［J］.J East China Norm Univ Nat Sci,2015（2）:113 － 121.

［5］ 李倩中，劉曉宏，蘇家樂，等.羊角槭基因組DNA提取及SRAP-PCR體系優(yōu)化［J］.江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報，2009，25（3）： 538 － 541.LI Qianzhong,LIU Xiaohong,SU Jiale,et al.Extraction of genomic DNA fromAcer yangjuechiand system optimization of SRAP-PCR ［J］.J Jiangsu Agric Sci,2009,25（3）:538 － 541.

［6］ 鐘泰林，李根有，石柏林.3種浙江特產(chǎn)瀕危植物氣體交換特征和葉綠素?zé)晒馓匦匝芯浚跩］.上海交通大學(xué)學(xué)報（農(nóng)業(yè)科學(xué)版）， 2009， 27（2）： 149 － 152， 176.ZHONG Tailin,LI Genyou,SHI Bailin.Comparison of gas exchange and chlorophyll fluorescence parameters in three endangered species of Zhejiang Province ［J］.J Shanghai Jiaotong Univ Agric Sci,2009,27（2）:149 － 152,176.

［7］ 李洪成，姜宏華.SPSS數(shù)據(jù)分析教程［M］.北京：人民郵電出版社，2012.

［8］ ABOBKAR I M,AHMED M,ABOBKAR I M,et al.Plant tissue culture media ［C］//LEVA A,RINALDI L M R.Recent Advances in Plant in Vitro Culture.Rijeka:Janeza Trdine,2012:30－40.

［9］ 黃烈健，王鴻.林木植物組織培養(yǎng)及存在問題的研究進展［J］.林業(yè)科學(xué)研究，2016，29（3）：464－470.HUANG Liejian,WANG Hong.Advances in tissue culture techniques of trees and the problems existed ［J］.For Res,2016,29（3）:464 － 470.

［10］ 韓登媛,李旦,趙健,等.華北落葉松胚性愈傷組織誘導(dǎo)影響因子的研究［J］.林業(yè)科學(xué)研究，2013，26（4）：454－458.HAN Dengyuan,LI Dan,ZHAO Jian,et al.Factors affecting induction of embryogenic callus ofLarix principis-rupprechtii［J］.For Res,2013,26（4）:454 － 458.

［11］ CAI Xiaodong,WANG Guiyuan,CAO Wenjuan.In vitro induction and proliferation of callus from immature cotyledons and embryos ofJuglans regiacv. ‘Xiangling’ ［J］.Not Bot Horti Agrobot,2013,41（2）:378 － 384.

［12］ 陳菊，陳國惠．6-BA與NAA濃度配比對何首烏不定芽增殖的影響［J］.中國農(nóng)學(xué)通報，2006，22（11）：173－175．CHEN Ju,CHEN Guohui.Study of the concentration of 6-BA and NAA in the rapid propagation ofPolygonum multiflorumThunb.［J］.Chin Agric Sci Bull,2006,22（11）:173 － 175.

［13］ 何詩虹，王躍華，唐旭，等.羌活植物離體培養(yǎng)及植株再生研究［J］.中藥材，2017，40（7）：1525－1528．HE Shihong,WANG Yuehua,TANG Xu,et al.Study on vitro culture and plant regeneration ofNotopterygium incisumTing ex H.T.Chang ［J］.J Chin Med Mat,2017,40（7）:1525 － 1528.

［14］ AHMAD I,HUSSAIN T,ASHRAF I,et al.Lethal effects of secondary metabolites on plant tissue culture ［J］.Agric Environ Sci,2013,13（4）:539 － 547.

［15］ 劉艷麗，姚家玲，張友德.盾葉薯蕷愈傷組織誘導(dǎo)研究［J］.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2004，23（4）：389－392.LIU Yanli,YAO Jialing,ZHANG Youde.Study on callus inducement fromDioscorea zingibernsisWright ［J］.J Huazhong Agric Univ,2004,23（4）:389 － 392.

［16］ 石云平，趙志國，唐鳳鸞，等.白芨愈傷組織誘導(dǎo)、增殖與分化研究［J］.中草藥，2013，44（3）：349－353.SHI Yunping,ZHAO Zhiguo,TANG Fengluan.Induction,proliferation,and differentiation ofBletilla striatacallus［J］.Chin Trad Herbal Drugs,2013,44（3）:349 － 353.