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    赤霉素拉穗處理對(duì)西拉葡萄果實(shí)酚類物質(zhì)的影響

    2018-09-26 09:38:18劉迪迪劉美迎張振文
    食品科學(xué) 2018年17期
    關(guān)鍵詞:赤霉素總酸酚類

    劉迪迪,劉美迎,王 珍,謝 沙,梁 攀,張振文,2,*

    酚類物質(zhì)是苯環(huán)上連有一個(gè)或多個(gè)羥基的小分子有機(jī)物,廣泛分布于植物體的各個(gè)器官中。葡萄果實(shí)中酚類物質(zhì)主要集中在葡萄果皮和葡萄籽中,分為花色苷和非花色苷兩類,其中花色苷類物質(zhì)包括花青素、花翠素、甲基花青素、甲基花翠素、二甲花翠素及其衍生物等,而非花色苷類物質(zhì)是指除花色苷以外的酚類,主要包括酚酸類(苯甲酸類、肉桂酸類)、黃酮類(黃烷酮類、黃酮醇類)、黃烷-3-醇類以及一些特殊的酚類物質(zhì)如白藜蘆醇等[1-4]。葡萄中酚類物質(zhì)通過浸漬作用進(jìn)入到葡萄酒中,是葡萄酒的重要組成成分,其含量和比例對(duì)葡萄酒的感官品質(zhì),尤其是對(duì)葡萄酒的顏色、收斂性[5-7]、澄清度和穩(wěn)定性等有著重要的作用[8-9]。此外,酚類物質(zhì)是葡萄酒發(fā)揮保健功效的重要成分,葡萄酒中的多酚物質(zhì)能夠消除人體內(nèi)自由基,降低心腦血管疾病的發(fā)生率,具有抗氧化、抗衰老的功效[10-13]。

    影響葡萄果實(shí)酚類物質(zhì)合成的因素可以分為內(nèi)部因素和外部因素,內(nèi)部因素包括品種、成熟度、樹齡、內(nèi)源激素等[14-15],外部因素則包括光照、溫度、土壤、栽培技術(shù)、外源激素等[16-17];其中外源激素中的赤霉素作為植物生長發(fā)育的重要激素之一,能調(diào)控植物的生長發(fā)育過程,能夠打破種子休眠,促進(jìn)莖的伸展、葉片生長、芽的萌發(fā)、果實(shí)發(fā)育,防止落花落果,進(jìn)行果粒膨大等[18-19]。研究發(fā)現(xiàn),通過一定濃度的赤霉素蘸穗處理可以拉長果穗長度、疏松果穗[20]。山西臨汾地區(qū)西拉葡萄果穗過于緊密,果穗內(nèi)部果粒顏色較淺或青綠,酚類物質(zhì)含量低,而赤霉素拉穗處理能有效改善葡萄果穗過于緊密的缺陷。由于國內(nèi)外關(guān)于赤霉素處理對(duì)葡萄果實(shí)酚類物質(zhì)影響的報(bào)道并不多見,本實(shí)驗(yàn)在不同時(shí)期,以不同質(zhì)量濃度的赤霉素蘸穗處理葡萄果實(shí),研究赤霉素拉穗處理對(duì)釀酒葡萄酚類物質(zhì)組分和含量的影響,以期總結(jié)提升葡萄果實(shí)酚類物質(zhì)含量的適宜赤霉素處理方法,從而為提高釀酒葡萄果實(shí)品質(zhì)提供理論依據(jù),也對(duì)赤霉素處理在釀酒葡萄上的應(yīng)用可行性進(jìn)行驗(yàn)證。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    本實(shí)驗(yàn)在山西省臨汾市堯京酒莊進(jìn)行,選用歐亞種釀酒葡萄西拉(Vitis vinifera L. cv. Syrah)。2012年定植,東西行向,斜拉“廠”字型單籬架,株行距1 m×3 m,嫁接砧木為5BB,半機(jī)械化管理。

    花色苷、非花色苷單體酚類物質(zhì)(簡(jiǎn)稱單體酚)標(biāo)準(zhǔn)品(均為色譜純) 美國Sigma公司;乙腈、甲醇(均為色譜純) 上海陸忠化學(xué)試劑廠。

    1.2 儀器與設(shè)備

    1200系列液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、1100 KC/MSD離子阱高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、Zorbax SB C18色譜柱美國Agilent公司;FD5-2.5冷凍干燥機(jī) 美國GOLD-SIM公司;CentriVap 78100-40離心濃縮系統(tǒng) 美國LABCONCO公司;5804R低溫冷凍離心機(jī) 德國Eppendorf公司。

    1.3 方法

    1.3.1 赤霉素處理

    實(shí)驗(yàn)于2015、2016年分別進(jìn)行,兩年處理方式一致,分別設(shè)置6 個(gè)處理組,1 個(gè)對(duì)照(CK)組。處理組即于當(dāng)年葡萄開花期(2015年葡萄開花期為5月15日,2016年葡萄開花期為5月18日)前20 d和前15 d分別進(jìn)行赤霉素蘸穗處理,赤霉素質(zhì)量濃度分別為3、5、7 mg/L,處理編號(hào)分別為15CK、15LS203、15LS205、15LS207、15LS153、15LS155、15LS157和16CK、16LS203、16LS205、16LS207、16LS153、16LS155、16LS157。以編號(hào)15LS203為例:15表示為2015年,LS表示拉穗處理,20為開花前20 d,3為赤霉素質(zhì)量濃度為3 mg/L,即編號(hào)為15LS203的處理組表示2015年葡萄開花前20 d用3 mg/L的赤霉素處理葡萄果穗;CK組未用赤霉素處理葡萄果穗。

    處理時(shí)將葡萄花序迅速全部浸入赤霉素溶液中,計(jì)時(shí)2 s快速拿出,每個(gè)處理組150 穗(設(shè)3 個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)50 穗),共計(jì)900 穗,葡萄成熟后每個(gè)處理組隨機(jī)采樣30 穗,迅速用冰盒帶回實(shí)驗(yàn)室,-80 ℃冰箱保存。

    1.3.2 不同指標(biāo)測(cè)定

    1.3.2.1 果穗長度

    果穗長度采用刻度尺測(cè)量,葡萄平放于白紙上,拉直后記錄果穗最上端和最下端距離作為葡萄果穗長度,每個(gè)處理組包含3 個(gè)平行,每個(gè)平行測(cè)10 穗果穗長度。

    1.3.2.2 葡萄果實(shí)還原糖、總酸質(zhì)量濃度的測(cè)定

    葡萄果實(shí)擠破揉碎后,取上清液測(cè)還原糖和總酸的質(zhì)量濃度。還原糖質(zhì)量濃度的測(cè)定采用菲林A、B滴定法??偹豳|(zhì)量濃度的測(cè)定采用酸堿滴定法,以酒石酸計(jì)[21]。葡萄成熟度為還原糖和總酸質(zhì)量濃度的比值。

    1.3.2.3 葡萄果皮花色苷單體酚類物質(zhì)的測(cè)定

    葡萄果皮干粉制備:隨機(jī)選取200 粒葡萄,冷凍狀態(tài)下迅速將果皮與果肉分離,葡萄果皮液氮冷凍打粉,置于冷凍干燥機(jī)凍干24 h后備用。葡萄果皮干粉稱樣0.5 g,放于離心管中,加入10 mL甲酸-甲醇(甲酸體積分?jǐn)?shù)2%)溶液,超聲提取10 min(溫度30 ℃、功率40 Hz),25 ℃下?lián)u床(150 r/min)避光提取30 min,然后以8 000 r/min低溫離心10 min,收集上清液于50 mL離心管,重復(fù)以上提取操作3 次,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸干(30 ℃),再用流動(dòng)相(A相為V(水)∶V(甲酸)∶V(乙腈)=92∶2∶6,B相為V(水)∶V(甲酸)∶V(乙腈)=44∶2∶54)按A、B相體積比9∶1定容至10 mL,-80 ℃下保存待測(cè)。

    采用配有二極管陣列檢測(cè)器的液相色譜離子阱質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行花色苷含量的檢測(cè),配備電噴霧離子源和離子阱質(zhì)譜檢測(cè)器,所有部件均由Agilent v.5.2化學(xué)工作站控制。色譜條件如下:色譜柱采用Zorbax Eclipse SB C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)柱。洗脫程序:0~18 min,10%~25% B;18~20 min,25% B;20~30 min,25%~40% B;30~35 min,40%~70% B;35~40 min,70%~100% B;流速1.0 mL/min,柱溫50 ℃,檢測(cè)波長525 nm,波長掃描范圍200~900 nm,進(jìn)樣量30 μL。質(zhì)譜采用電噴霧離子源,正離子模式,離子掃描范圍m/z 100~1 500,霧化器壓力0.24 MPa,干燥氣流速10 L/min,干燥氣溫度350 ℃。對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間進(jìn)行定性,外標(biāo)法定量。

    1.3.2.4 葡萄皮單體酚含量測(cè)定

    稱取1.3.2.3節(jié)制得的葡萄干粉2 g,加入5 mL蒸餾水和45 mL乙酸乙酯于錐形瓶中,25 ℃下?lián)u床(150 r/min)避光提取30 min,轉(zhuǎn)移上清液于250 mL圓底燒瓶,重復(fù)4 次,離心、蒸干(溫度33 ℃),用甲醇定容至2 mL,-80 ℃下保存待測(cè)。

    采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析標(biāo)準(zhǔn)品和葡萄皮提取物中的單體酚。色譜條件:色譜柱為Zorbax SB C18(50 mm×3 mm,5 μm)柱;柱溫25 ℃;進(jìn)樣量10 μL,檢測(cè)波長280 nm。流動(dòng)相A:1.0%(體積分?jǐn)?shù),下同)的醋酸-水溶液;流動(dòng)相B:1.0%醋酸-甲醇溶液,流速1.0 mL/min。梯度洗脫:0~15 min,l0%~26% B;30~50 min,40%~65% B;50~60 min,65%~95% B;60~63 min,95%~10% B;63~66 min,10% B。電噴霧離子源,負(fù)離子模式;霧化器壓力0.21 MPa;干燥氣流速為10 mL/min;干燥氣溫度325 ℃;離子掃描范圍為m/z 100~1 500;誘導(dǎo)碰撞電壓1.0 V。通過對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品離子碎片、保留時(shí)間進(jìn)行定性,采用外標(biāo)法定量。

    1.4 數(shù)據(jù)處理分析

    利用Excel 2016軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理;數(shù)據(jù)處理采用SPSS 20.0軟件,利用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)在P<0.05水平下,采用Duncan新復(fù)極差法進(jìn)行顯著性分析;利用Origin 2016軟件進(jìn)行圖表繪制。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 赤霉素處理對(duì)葡萄果穗長度的影響

    果穗拉長可疏松葡萄果穗,增加果穗內(nèi)部果粒的光照,有利于葡萄著色和酚類物質(zhì)的生成[22-23]。如圖1所示,赤霉素蘸穗對(duì)葡萄果穗的伸長具有顯著的促進(jìn)作用。2015年葡萄果穗長度平均增加8.57%,其中15LS207與對(duì)照組相比果穗長度增加16.09%,拉長效果為當(dāng)年最好;2016年葡萄果穗長度平均增加達(dá)6.63%,其中16LS157果穗拉長效果最好,與對(duì)照組相比果穗長度增加14.20%。

    圖1 不同赤霉素處理葡萄果穗長度的變化Fig. 1 Change in grape cluster length in different gibberellin treatments

    2.2 赤霉素處理對(duì)葡萄還原糖、總酸質(zhì)量濃度的影響

    圖2 不同赤霉素處理對(duì)葡萄還原糖、總酸質(zhì)量濃度的影響Fig. 2 Effects of different gibberellin treatments on reducing sugar and total acid contents in grapes

    如圖2所示,赤霉素拉穗處理可提升葡萄果實(shí)還原糖質(zhì)量濃度、降低總酸質(zhì)量濃度,葡萄成熟度都有提升。2015年和2016年赤霉素處理組的平均還原糖質(zhì)量濃度分別為225.90 g/L和236.95 g/L,與對(duì)照組相比分別提升了5.63%、11.27%,其中還原糖質(zhì)量濃度最高的處理組分別為2015年的15LS155(231.84 g/L)、2016年的16LS157(244.14 g/L),分別較當(dāng)年對(duì)照組提高了8.39%和14.62%。赤霉素處理能降低葡萄果實(shí)的總酸質(zhì)量濃度,兩年赤霉素處理組平均總酸質(zhì)量濃度分別為5.96 g/L和5.46 g/L,與對(duì)照組相比總酸質(zhì)量濃度分別降低了8.45%、14.55%,兩年總酸質(zhì)量濃度最低的處理組分別為2015年的15LS155(5.69 g/L)、2016年的16LS157(5.21 g/L),分別較當(dāng)年對(duì)照組降低了12.60%和18.46%。

    2.3 赤霉素處理對(duì)葡萄皮單體花色苷含量的影響

    表1 2015年不同赤霉素處理對(duì)葡萄皮單體花色苷含量的影響Table 1 Effects of different gibberellin treatments on anthocyanin contents in grapes grown in 2015 μg/g

    表2 2016年不同赤霉素處理對(duì)葡萄皮單體花色苷含量的影響Table 2 Effects of different gibberellin treatments on anthocyanin contents in grapes grown in 2016 μg/g

    如表1、2所示,共檢測(cè)到9 種單體花色苷,包括5 種基本花色苷(非?;ㄉ眨┖? 種?;ㄉ?,其中二甲花翠素-3-葡萄糖苷及其乙酰化合物、二甲花翠素-3-香豆?;?葡萄糖苷占比較大。兩年數(shù)據(jù)顯示赤霉素處理對(duì)葡萄皮單體花色苷總量有較大的提升作用。2015年和2016年赤霉素處理組葡萄皮單體花色苷平均總量分別提高了23.44%和41.28%,兩年均為LS207處理組的效果最明顯,分別提升38.39%和66.29%。此外,兩年中均以LS207、LS205、LS157 3 個(gè)處理組對(duì)葡萄皮二甲花翠素類花色苷含量的提高效果顯著。綜合來看,赤霉素處理能夠提高葡萄皮的花色苷含量,質(zhì)量濃度在3~7 mg/L的范圍內(nèi)隨著赤霉素使用量的增加花色苷的含量也隨之增大,且開花前20 d處理組單體花色苷提升量較開花前15 d處理組提升量高。

    圖3為赤霉素處理對(duì)葡萄皮單體花色苷含量和比例的影響。2015年數(shù)據(jù)顯示葡萄皮基本花色苷含量增加幅度較大,?;ㄉ蘸坑行》忍嵘?,赤霉素處理組酰化花色苷比例有較大幅度降低。2016年各處理組之間差異較顯著:開花前15 d處理組酰化花色苷含量有所提升,但所占比例有所降低;開花前20 d處理組?;ㄉ蘸刻嵘容^大,?;ㄉ毡壤采杂刑嵘?。

    圖3 不同赤霉素處理對(duì)葡萄皮單體花色苷含量及組分比例的影響Fig. 3 Effects of different gibberellin treatments on the contents and composition of anthocyanins in grapes

    2.4 赤霉素處理對(duì)葡萄皮單體酚含量的影響

    表3 2015年不同赤霉素處理對(duì)葡萄皮單體酚含量的影響Table 3 Effects of different gibberellin treatments on the contents of phenols in grapes grown in 2015 μg/g

    續(xù)表3

    表4 2016年不同赤霉素處理對(duì)葡萄皮單體酚含量的影響Table 4 Effects of different gibberellin treatments on the contents of phenols in grapes grown in 2016 μg/g

    如表3、4所示,2015年共檢測(cè)到25 種單體酚,其中黃烷-3-醇類6 種、羥基苯甲酸類3 種、黃酮醇類16 種。數(shù)據(jù)結(jié)果顯示:?jiǎn)误w酚總量隨著赤霉素質(zhì)量濃度的增加而增加,開花前20 d赤霉素處理效果好于開花前15 d處理組;所有單體酚中,楊梅酮-葡萄糖苷、槲皮素-葡萄糖苷、鼠李素-3-O-葡萄糖苷含量較多,均在100 μg/g以上,15LS207、15LS205兩個(gè)處理組中以上物質(zhì)含量均具有較大提升,15LS157中槲皮素-葡萄糖苷、鼠李素-3-O-葡萄糖苷含量也有較大提升。2016年檢測(cè)到25 種單體酚,其中黃烷-3-醇類7 種、羥基苯甲酸類2 種、黃酮醇類16 種,較2015年多檢測(cè)到了表兒茶素、二氫槲皮素,未檢測(cè)到香草酸、丁香亭-3-O-葡萄糖苷。2016年葡萄皮單體酚總量較2015年有較大程度提升,且不同赤霉素處理組單體酚總量均高于對(duì)照組;其中槲皮素-葡萄糖苷、鼠李素-3-O-葡萄糖苷含量較多,與2015年一致;16LS153、16LS155、16LS203中以上物質(zhì)含量均具有較大提升,其余處理組以上單體酚含量提升較小。單體酚總量隨著赤霉素質(zhì)量濃度的增加而降低,這與2015年結(jié)果不一致,造成實(shí)驗(yàn)差距的原因可能是葡萄成熟度存在差異。

    圖4 不同赤霉素處理對(duì)葡萄單體酚含量及組分比例的影響Fig. 4 Effects of different gibberellin treatments on the contents and composition of phenols in grapes

    如圖4所示,黃烷-3-醇類物質(zhì)含量占單體酚總量的2%~10%左右,羥基苯甲酸類所占比例不超過0.3%,黃酮醇類所占比例在90%以上。2015年15LS207、15LS205、15LS157和15LS155中葡萄皮黃酮醇類含量提升較大,其組分所占比例也較高;15LS153、15LS203、15LS205黃烷-3-醇含量提升較大,其組分所占比例也顯著提高;羥基苯甲酸類物質(zhì)含量較低,處理組間效果差異不顯著。2016年開花前15 d 3 個(gè)赤霉素處理組黃烷-3-醇類含量較2015年有較大提升,但較對(duì)照組明顯降低;開花前20 d赤霉素處理組黃烷-3-醇類含量隨著赤霉素質(zhì)量濃度的增加而降低,但與對(duì)照組相比差異不大;黃酮醇類含量較2015年提升明顯,其中16LS153、16LS155處理組黃酮醇類含量較高。

    3 討 論

    還原糖、總酸質(zhì)量濃度對(duì)葡萄成熟和葡萄酒釀造有較大影響。成熟度一般表示為還原糖與總酸質(zhì)量濃度的比值,釀造優(yōu)質(zhì)葡萄酒要求成熟度控制在35~45之間[24],本實(shí)驗(yàn)中對(duì)照組葡萄成熟度均在35以下,赤霉素處理組中除2016年16LS157成熟度大于45外,其余處理組均在35~45之間,赤霉素處理提升了葡萄的成熟度。

    花色苷是花色素的糖苷結(jié)合形式,是葡萄酒重要的保健成分之一[25-26],對(duì)葡萄酒口感和貯存都有較大影響[27]。赤霉素拉穗處理拉長了果穗長度、提升了葡萄成熟度,對(duì)花色苷含量有較大的提升作用,這與Oren-Shamir等[28]的研究結(jié)果一致,他認(rèn)為葡萄花色苷含量的增加可能是因?yàn)楣雰?nèi)部果?;ㄉ沾罅吭黾右?。Alonso等[29]認(rèn)為適當(dāng)增強(qiáng)光照能提升葡萄花色素含量,本實(shí)驗(yàn)中赤霉素處理疏松了果穗,增加了內(nèi)部果粒的見光量,使葡萄內(nèi)部果?;ㄉ蘸坑休^大提升。甲基化花色苷含量越多,葡萄的紅色色調(diào)越明顯[30],二甲花翠素類花色苷含有兩個(gè)甲基,同時(shí)在花色苷中占比較大,對(duì)葡萄和葡萄酒顏色影響也較大;?;ㄉ漳苎泳徠咸丫祁伾南耍黾宇伾€(wěn)定性[31]。兩年赤霉素處理組均提升了二甲花翠素類花色苷和?;ㄉ盏暮浚貏e是2016年提升量較大,因此赤霉素處理可以提升葡萄與葡萄酒顏色的深度和穩(wěn)定性,更利于葡萄酒的長期貯存。

    單體酚類物質(zhì)是葡萄酒中主要的營養(yǎng)成分,決定著葡萄酒的苦味和澀味,影響著葡萄酒的色澤和穩(wěn)定性[32]。紅色葡萄酒口感平衡,追求乙醇體積分?jǐn)?shù)、澀度和酸度的平衡,本實(shí)驗(yàn)中兩年數(shù)據(jù)都顯示赤霉素處理同時(shí)提升了葡萄的還原糖質(zhì)量濃度和單體酚總量,與Fan Shutian[33]的結(jié)果一致。不同之處在于2016年赤霉素處理組葡萄皮單體酚總量存在隨赤霉素質(zhì)量濃度的增加而降低的趨勢(shì)。相關(guān)研究證明葡萄酚類物質(zhì)含量在成熟過程中并非一直增加,而是不斷波動(dòng)的[34],葡萄成熟后酚類物質(zhì)含量出現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)[15],因此2016年單體酚含量出現(xiàn)的降低現(xiàn)象可能是因?yàn)槠咸堰^度成熟而造成酚類物質(zhì)減少。

    赤霉素拉穗處理能有效拉長葡萄果穗,并且能夠提高葡萄果實(shí)的還原糖質(zhì)量濃度、降低總酸質(zhì)量濃度,對(duì)葡萄皮的酚類物含量有顯著提升作用,其中高質(zhì)量濃度處理組(5、7 mg/L)效果總體優(yōu)于低質(zhì)量濃度處理組(3 mg/L),開花前20 d處理組優(yōu)于開花前15 d處理組。所有處理組中以16LS207酚類物質(zhì)含量提升量最高,該處理組能提高大部分單體花色苷和單體酚的含量,并顯著促進(jìn)葡萄酰基化花色苷和黃酮醇類物質(zhì)的形成,有利于增加葡萄酒顏色的深度和穩(wěn)定性,提高葡萄酒的結(jié)構(gòu)層次感,利于葡萄酒的貯存。

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