西藏部分地區(qū)羔羊球蟲感染現(xiàn)狀調(diào)查

夏晨陽，劉建枝，宋天增，翁浩博，卓 嘎，單曲拉姆，石 斌，唐文強(qiáng)

（1.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，拉薩 850009；2.西藏那曲地區(qū)畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣總站，那曲 852000；3.西藏日喀則動物疫病預(yù)防控制中心，日喀則 857000）

羊球蟲病（coccidiosis）是由孢子蟲綱（Sporozoasida）真球蟲目（Eucoccidiorida）艾美耳科（Eimeriidae）艾美爾屬（Eimeria）的多種球蟲寄生于山羊或綿羊腸黏膜上皮細(xì)胞內(nèi)引起的一種常見的原蟲性疾?。?］。球蟲呈世界性分布［2］，羔羊主要表現(xiàn)為下痢、消瘦、貧血、發(fā)育不良為特征的疾病，綿羊球蟲病病原共有16種［3］。青年羊和成年羊多為亞臨床感染，不表現(xiàn)臨床癥狀，但會導(dǎo)致生長發(fā)育遲緩和繁殖性能下降，羊肉、羊奶、羊毛（絨）、羊腸衣及皮革的產(chǎn)量和品質(zhì)均降低，給養(yǎng)羊業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重阻礙了小反芻動物養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。西藏是我國五大牧區(qū)之一，羔羊球蟲病危害嚴(yán)重，為了解球蟲感染狀況，筆者等于2016年6—9月對西藏日喀則白朗縣、康馬縣、亞東縣，那曲地區(qū)那曲縣，山南地區(qū)乃東縣及阿里地區(qū)日土縣的綿山羊球蟲種類及感染現(xiàn)狀進(jìn)行了調(diào)查，以便為更好地控制該病提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 糞樣

共隨機(jī)采集西藏日喀則白朗縣44只、康馬縣50只、亞東縣50只，那曲地區(qū)那曲縣31只，山南地區(qū)乃東縣40只，共計(jì)215只綿羊的糞便。采集阿里地區(qū)日土縣48只白絨山羊糞便。每只約10 g，密封于塑料袋中，置4℃冰箱內(nèi)待檢。

1.2 卵囊的分離與培養(yǎng)

每份糞樣取1 g，用飽和食鹽水漂浮法鏡檢。將有球蟲卵囊的陽性糞樣每份再取5 g，置干凈的燒杯內(nèi)加少許飽和食鹽水，用玻璃棒搗碎，將糞便轉(zhuǎn)入燒杯中，加入自來水并不斷攪拌至糊狀，靜置10 min再次攪拌，倒入20目篩子中（如果糞樣較多，可分多次過濾），不斷攪拌使濾液依次通過50目、100目糞篩，20目篩子中要間隔加入300 mL自來水，50目、100目糞篩分別加200 mL和100 mL，最后收集濾液。分裝于50 mL帶蓋離心管，3 000 r/min離心10 min；取沉淀加50 mL飽和食鹽水?dāng)嚢杈鶆颍? 500 r/min離心10 min；取上清5倍體積稀釋，分裝于50 mL帶蓋離心管內(nèi)，3 000 r/min離心10 min；取沉淀鏡檢，2.5%重鉻酸鉀28℃培養(yǎng)48～72 h，每隔3～5小時(shí)吹打1次。

卵囊孢子化完成的時(shí)間、內(nèi)外殘?bào)w的有無，參照文獻(xiàn)［4］、圖譜作出種類鑒定，并記數(shù)球蟲數(shù)量，計(jì)算感染率。

1.3 球蟲形態(tài)學(xué)鑒定

于光學(xué)顯微鏡下觀察孢子化卵囊大小、顏色、形態(tài)結(jié)構(gòu)等特征，根據(jù)Eckert J等［4］介紹的方法進(jìn)行球蟲種類鑒定。

2 結(jié)果

2.1 球蟲感染情況

2.1.1 綿羊球蟲感染情況 經(jīng)飽和鹽溶液漂浮法檢查，215份糞便樣本中185份發(fā)現(xiàn)有球蟲卵囊，總感染率86.05%，各縣球蟲感染率分別為乃東縣87.50%（35/40）、那曲縣 87.10%（27/31）、白朗縣 81.82%（36/44）、康馬縣88.00%（44/50）、亞東縣 86.00%（43/50）。

2.1.2 山羊球蟲感染情況 經(jīng)飽和鹽溶液漂浮法檢查，日土縣48份糞便樣本中40份發(fā)現(xiàn)有球蟲卵囊，羊球蟲感染率 83.33%（40/48）。

2.2 球蟲種類及各種球蟲感染率

2.2.1 綿羊球蟲種類、感染率及其分布 對185份陽性樣品采用Eckert J等［4］方法進(jìn)行球蟲卵囊收集與培養(yǎng)，鑒定綿羊球蟲8種，具體種類、感染率及其分布見表1。致病性最強(qiáng)的阿撒他艾美耳球蟲（E.ahsata）感染率達(dá)30.23%，且各地均有分布。

2.2.2 山羊球蟲種類、感染率及其分布 對40份陽性糞便樣品采用Eckert等［4］方法進(jìn)行球蟲卵囊收集與培養(yǎng)，鑒定山羊球蟲7種，具體種類、感染率見表2。致病性最強(qiáng)的雅氏艾美爾球蟲（E.ninakohlyakimovae）感染率達(dá)27.08%，潛在危害嚴(yán)重。

2.3 球蟲混合感染情況

2.3.1 綿羊混合感染情況 鑒定的185份陽性糞便樣本中有185份感染2種以上球蟲，混合感染率100.00%，最多可混合感染7種球蟲，多數(shù)為3～5種；感染3種、4種和5種球蟲的羊占球蟲陽性羊的比例分別為24.32%（45/185）、48.65%（90/185）和 19.46%（36/185）；感染 6種和7種球蟲的羊占球蟲陽性羊的比例分別為5.95%（11/185）和 1.62%（3/185）。

表1 綿羊球蟲種類、感染率及其分布

表2 山羊球蟲種類、感染率及其分布

2.3.2 山羊混合感染情況 鑒定的40份陽性糞便樣本中有40份感染2種以上球蟲，混合感染率100.00%，最多可混合感染6種球蟲，多數(shù)為3～5種；感染3種、4種和5種球蟲的羊占球蟲陽性羊的比例分別為10.00%（4/40）、27.50%（11/40）和 57.50%（23/40）；感染 6 種球蟲的羊占球蟲陽性羊的比例為5.00%（2/40）。

2.4 球蟲的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征

2.4.1 綿羊球蟲形態(tài)特征 顆粒艾美耳球蟲（E.granulosa）：壇狀，后部寬大，有較大的極帽、卵膜孔，黃棕色，有卵囊殘?bào)w、孢子囊殘?bào)w，22～35 μm×17～25 μm，孢子化時(shí)間 3～4 d。

綿羊艾美耳球蟲（E.ovinoidalis）：橢圓形，卵膜孔不明顯，白色或淺黃色，無卵囊殘?bào)w，有孢子囊殘?bào)w，17～25 μm×13～20 μm，孢子化時(shí)間 1～3 d。

小艾美耳球蟲（E.parva）：球形或亞球形，無極帽、卵膜孔，無色，無卵囊殘?bào)w，孢子囊殘?bào)w附著一些沉著顆粒，13～22 μm×11～13 μm，孢子化時(shí)間 1～3 d。

阿撒他艾美耳球蟲（E.ahsata）：卵圓形，極帽明顯，黃棕色，無卵囊殘?bào)w，有孢子囊殘?bào)w，29～37μm×17～28μm，孢子化時(shí)間2～3 d。

溫布里吉艾美耳球蟲（E.weybridgensis）：寬橢圓形或亞圓形，卵膜孔有或無極帽，無卵囊殘?bào)w或孢子囊殘?bào)w，17～30 μm×14～19 μm，孢子化時(shí)間 1～3 d。

浮氏艾美爾球蟲（E.faurei）：卵形，淡黃棕色，無卵囊殘?bào)w或孢子囊殘?bào)w，28～37 μm×21～27 μm，孢子化時(shí)間 1～3 d。

2.4.2 山羊球蟲形態(tài)特征 艾麗艾美耳球蟲（E.alijevi）：卵形或橢圓形，無色或淡黃色，卵膜孔模糊，無卵囊殘?bào)w，有孢子囊殘?bào)w，15～23 μm×12～22 μm，孢子化時(shí)間1～5 d。

阿氏艾美耳球蟲（E.arloingi）：橢圓形，胞壁厚，無卵囊殘?bào)w，有孢子囊殘?bào)w，17～42 μm×13～27 μm，孢子化時(shí)間 1～2 d。

約奇艾美耳球蟲（E.jolchijevi）：卵形或橢圓形，淡黃色，無卵囊殘?bào)w，有孢子囊殘?bào)w，26～37 μm×18～26 μm，孢子化時(shí)間2～4 d。

柯氏艾美耳球蟲（E.christenseni）：卵形，胞壁厚，無色或淡黃色，無卵囊殘?bào)w，有孢子囊殘?bào)w，34～41 μm×23～28 μm，孢子化時(shí)間 6 d。

山羊艾美耳球蟲（E.caprina）：橢圓形，深褐色至褐黃色，無卵囊殘?bào)w，有孢子囊殘?bào)w，27～40 μm×19～26 μm，孢子化時(shí)間2～3 d。

雅氏艾美耳球蟲（E.ninakohlyakimovae）：橢圓形，胞壁薄，無色，無卵膜孔或卵膜孔模糊，無卵囊殘?bào)w，有孢子囊殘?bào)w，20～22 μm×14～16 μm，孢子化時(shí)間 1～4 d。

家山羊艾美耳球蟲（E.hirci）：略卵圓形，淺黃色，無卵囊殘?bào)w，孢子囊卵圓形，有孢子囊殘?bào)w，18～23 μm×14～19 μm，孢子化時(shí)間 2～3 d。

3 討論

衛(wèi)九健等［5］報(bào)道，河南及重慶、安徽部分地區(qū)山羊共鑒定出12種艾美耳球蟲，優(yōu)勢蟲種為阿氏、艾麗、家山羊克氏艾美耳；鮑鳴等［6］報(bào)道，安徽鳳臺縣山羊鑒定出10種艾美耳球蟲，優(yōu)勢蟲種為雅氏、阿氏、浮氏和小型艾美耳球蟲；汪明等［7］報(bào)道，北京、河北地區(qū)綿羊球蟲總感染率87.8%，共鑒定出10種球蟲，主要流行的蟲種為小型艾美耳球蟲（58.65%）、艾美耳球蟲（53.5%）、阿撒他艾美耳球蟲（50.65%）和巴庫艾美耳球蟲（49.65%），混合蟲種感染為普遍現(xiàn)象；史萬貴等［8］對甘肅30個縣1 476只綿羊球蟲感染情況進(jìn)行了調(diào)查，總感染率90.31%，共發(fā)現(xiàn)艾美爾屬球蟲9種；李春花等［9］對青海祁連縣默勒鎮(zhèn)96只綿羊進(jìn)行了球蟲感染情況和種類調(diào)查研究，結(jié)果顯示總感染率70.8%，其中1歲羊感染率83.3%，2歲羊感染率76.7%，成年羊感染率46.7%，多為 2～5 種球蟲混和感染；閻曉菲等［10］對新疆烏魯木齊綿羊球蟲感染季節(jié)動態(tài)變化進(jìn)行了調(diào)查，結(jié)果表明，綿羊全年總感染率71.38%，其中夏季感染率65.28%，秋季感染率78.24%，冬季感染率62.18%，春季感染率81.58%，羔羊感染率最高，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定共發(fā)現(xiàn)7種綿羊球蟲。Balicka等［11］調(diào)查波蘭110只山羊群球蟲感染情況，結(jié)果共檢出9種艾美耳球蟲，羔羊和成年羊球蟲感染率分別為100%和81%，有50%羔羊出現(xiàn)臨床癥狀。王利明等［12］調(diào)查發(fā)現(xiàn)，新疆庫車縣綿羊球蟲總感染率100%，共鑒定出5種球蟲。蔣維東等［13］調(diào)查發(fā)現(xiàn)，新疆和田某規(guī)?；B(yǎng)殖場和田羊和策勒黑羊球蟲的總感染率50.90%。此結(jié)果與王利明等［12］在庫車縣調(diào)查結(jié)果相差較大，說明不同地區(qū)，羊球蟲感染情況存在較大差異。有關(guān)西藏地區(qū)球蟲研究較少。夏晨陽等［14］2013年5月—2014年4月對西藏尼木縣山羊球蟲進(jìn)行了系統(tǒng)研究，研究結(jié)果顯示，山羊球蟲年平均感染率91.16%，感染率存在季節(jié)性，夏季感染率低（70.00%～86.67%），春秋冬季感染率高（90.00%～100%），在山羊體內(nèi)發(fā)現(xiàn)感染有致病性強(qiáng)的球蟲9種。

本次調(diào)查結(jié)果顯示，西藏上述地區(qū)綿羊球蟲平均感染率86.05%，阿里地區(qū)日土縣山羊球蟲感染率83.33%，總體平均感染率85.55%，各地均有綿山羊感染致病力強(qiáng)的球蟲蟲種。本次調(diào)查主要集中于6—9月份，綿、山羊球蟲感染率與劉建枝等［14］調(diào)查尼木縣夏季期間山羊球蟲感染率結(jié)果基本一致。全國各地不同地區(qū)的綿、山羊球蟲感染率不盡相同，感染種類也不盡相同，可能與各地自然生態(tài)環(huán)境等諸多因素相關(guān)，本文報(bào)道的綿羊羔羊球蟲感染情況與李春花等［9］的報(bào)道相近。

筆者調(diào)查走訪了西藏各地農(nóng)牧民及基層獸防組織，發(fā)現(xiàn)截至目前項(xiàng)目區(qū)內(nèi)綿、山羊從未做過任何球蟲防治工作，因此，致病力強(qiáng)的球蟲種類在西藏項(xiàng)目區(qū)內(nèi)春季產(chǎn)羔季節(jié)羔羊死亡過程中是否扮演重要角色，仍有待深入研究。