鈣強(qiáng)化風(fēng)味發(fā)酵乳的鈣吸收率研究

◎ 李國(guó)定，何麗媛，黃 浩

（1.廣州分析測(cè)試中心科力技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，廣東 廣州 510070；2.廣東省測(cè)試分析研究所（中國(guó)廣州分析測(cè)試中心），廣東 廣州 510070）

鈣是生命元素，可以促進(jìn)骨骼的發(fā)育，鈣也是重要的機(jī)體信使物質(zhì)，決定著機(jī)體反應(yīng)靈敏程度與抗外界壓力的程度。機(jī)體攝入鈣，在胃中形成鈣離子，鈣離子通過(guò)血液輸送到各個(gè)器官，包括沉積到骨骼中。一旦骨鈣開(kāi)始流失，就會(huì)造成骨質(zhì)疏松癥。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

①儀器。Agilent55AA原子吸收分光光度計(jì)，安捷倫科技（中國(guó)）有限公司；BS224S電子天平，感量0.000 1 g，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；HL-1型鈣空心陰極燈，河北寧強(qiáng)光源公司制造。②試劑。超純水，一級(jí)水；氧化鑭，分析純，上海晶純生化科技股份有限公司；鹽酸，分析純，廣州化學(xué)試劑廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 鈣標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備

量取1 000 mg/L鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液2.5 mL鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液于100 mL容量瓶中，以20 g/L氧化鑭溶液稀釋至刻度，此溶液為25 mg/L的鈣標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

1.2.2 鈣標(biāo)準(zhǔn)工作液的制備

移取鈣標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0、1、2、3、4、5、6 mL，分別置于50 mL容量瓶中，加20 g/L氧化鑭溶液搖勻，得到濃度分別為0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mg/L的系列鈣標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2.3 分析條件

分析條件燈電流5 mA，波長(zhǎng)422.7 nm，光譜通帶0.5 nm，空氣流量3.5 L/min，乙炔流量1.5 L/min，燈頭高度6 mm，氘燈背景校正。以鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液含量和對(duì)應(yīng)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或計(jì)算直線回歸方程，試樣吸收值與曲線比較或代入方程求得含量[1]。

1.3 樣品的制備

SD大鼠糞便前處理方法：飼料樣品經(jīng)均勻混合過(guò)20目篩，鼠糞樣品80 ℃烘箱中烘干，置于干燥器中冷卻后磨細(xì)；根據(jù)鈣的含量，精確稱取烘干磨細(xì)的均勻樣品0.2 g于150 mL三角瓶中，上蓋表面皿。

風(fēng)味發(fā)酵乳及其配制液、飼料及碳酸鈣溶液前處理方法：精確稱取1.0 g樣品，置于150 mL三角瓶中，加入10 mL 6 mol/L的鹽酸，開(kāi)始慢慢一滴一滴加入，邊加入邊旋動(dòng)，直到不冒泡為止，然后再快速加入，一邊旋動(dòng)一邊加熱直到內(nèi)容物近乎干燥，在加熱期間務(wù)必避免內(nèi)容物濺出，用5 mL 6 mol/L鹽酸加熱溶解殘?jiān)?，分多? mL超純水將試液轉(zhuǎn)移至50 mL比色管中，待冷卻后用超純水稀釋定容至50 mL并用濾紙過(guò)濾，待測(cè)[2]。

2 結(jié)果與討論

2.1 線性范圍

按“1.2.3”項(xiàng)下的分析條件進(jìn)行測(cè)定，以鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液含量和對(duì)應(yīng)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或計(jì)算直線回歸方程，得到鈣元素的線性方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果Y=0.050 55X+0.010 81，線性關(guān)系良好（R2=0.994 9）。

2.2 方法檢出限和準(zhǔn)確度

將鈣標(biāo)準(zhǔn)系列溶液連續(xù)測(cè)定11次，以3倍空白的標(biāo)準(zhǔn)偏差除以標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率，計(jì)算鈣的檢出限為0.082 4 mg/g，以國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)牛血標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)考察鈣測(cè)定的準(zhǔn)確度，平行稱取3份各0.2 g標(biāo)物60 ℃烘干恒重，經(jīng)與樣品相同的前處理及測(cè)定分析后，總鈣測(cè)定結(jié)果（52.0±0.2）mg/L，位于證書標(biāo)準(zhǔn)值（51.6±0.9）mg/L范圍內(nèi)，說(shuō)明本分析方法準(zhǔn)確可靠。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取10份樣品混合均勻，分別稱取6份，按1.2.3項(xiàng)方法操作，進(jìn)行分析，結(jié)果表明RSD為0.41%，重現(xiàn)性良好[3]。

2.4 回收率試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取10份樣品混合均勻，取樣量為樣品的一半，分為4組，每組分別稱取2份，其中1組為原樣，另外3組為加標(biāo)樣，加標(biāo)樣分別加入低、中、高3個(gè)不同濃度，按1.2.3項(xiàng)方法操作進(jìn)行分析，分別測(cè)定回收率，回收率在90.2%～107.4%。

2.5 動(dòng)物分組

60只大鼠在實(shí)驗(yàn)室條件下檢疫1周后，按體重隨機(jī)分成5組，每組12只（或10只），包括受試物低、中、高3個(gè)劑量組[劑量分別為4.15、8.97、20.7 g/（kg·bw）]。將受試物摻入低鈣飼料中給予動(dòng)物。低鈣合成飼料按《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）配方。

2.6 鈣含量測(cè)定

分別測(cè)定碳酸鈣配制液、風(fēng)味發(fā)酵乳、普通飼料組、低鈣飼料組、中鈣飼料組、高鈣飼料組、SD大鼠糞便等6組不同樣品的鈣含量，測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)表1。

表1 檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)表

2.7 討論

本實(shí)驗(yàn)建立糞鈣含量的測(cè)定方法。采用火焰原子吸收分光光度法測(cè)定SD小鼠糞鈣的含量。結(jié)果表明所建方法靈敏、精確、快速、線性范圍寬，可用于糞鈣的含量測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，風(fēng)味發(fā)酵乳可增加大鼠的身長(zhǎng)、體重、股骨重量、骨鈣含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示，高劑量組鈣表觀吸收率與碳酸鈣對(duì)照組相近，表明受試樣品可作為補(bǔ)鈣劑。依據(jù)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》判定標(biāo)準(zhǔn)判斷，該風(fēng)味發(fā)酵乳具有增加大鼠骨密度的作用[4]。

本實(shí)驗(yàn)研究的風(fēng)味發(fā)酵乳與直接補(bǔ)充碳酸鈣組的效果一致，具有明顯的增強(qiáng)骨密度作用，為科學(xué)補(bǔ)鈣提供了理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。