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    環(huán)境激素壬基酚對(duì)雜交鱘血液指標(biāo)和糖原含量的影響

    2018-09-20 04:14:58董然然白天泉
    水產(chǎn)科學(xué) 2018年5期
    關(guān)鍵詞:壬基糖原轉(zhuǎn)氨酶

    楊 琦,董然然,冉 嚴(yán),張 堯,白天泉

    ( 貴州大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,貴州 貴陽 550025 )

    壬基酚廣泛用于洗滌劑、除草劑、殺蟲劑、增塑劑、乳化劑、潤(rùn)濕劑、涂料助劑、化妝品、紡織助劑和石油制品中,是一種典型的環(huán)境激素,具有毒性、生物累積性、雌激素活性和持久性。在水、大氣、土壤以及食品中均有壬基酚分布的報(bào)道,尤其是在水中的報(bào)道最多,歐洲、美洲、亞洲和非洲的多條河流中均檢測(cè)到了壬基酚[1-4]。

    目前,壬基酚對(duì)硬骨魚類影響的研究主要集中在生殖毒性和生物累積方面[5-14],而其對(duì)魚類生態(tài)毒性方面的研究較少。筆者以生長(zhǎng)速度快、抗病力強(qiáng)、肉質(zhì)鮮美、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富的雜交鱘(Acipenserschrenckii♀×A.baerii♂)為研究對(duì)象[15],在不同含量壬基酚溶液中浸浴后,檢測(cè)雜交鱘血液生理生化指標(biāo)、肝臟指數(shù)、肝糖原和肌糖原含量的變化,以期豐富環(huán)境激素對(duì)魚類生態(tài)毒理方面的研究,引起公眾對(duì)環(huán)境激素的廣泛關(guān)注,為保護(hù)野生鱘魚提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    試驗(yàn)用雜交鱘購(gòu)自遵義綏陽縣芙蓉江鱘魚繁養(yǎng)有限公司,體質(zhì)量為(59.16±4.18) g。實(shí)驗(yàn)室暫養(yǎng)7 d。

    1.2 方法

    1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    將壬基酚溶于95%乙醇中,配成2 mg/mL的母液,浸浴處理時(shí),分別向含100 L水魚缸中加入1、2、4 mL 壬基酚母液,使水中壬基酚的終質(zhì)量濃度分別為25、50、100 μg/L。

    試驗(yàn)包括1個(gè)對(duì)照組和25、50、100 μg/L 3個(gè)處理組,每個(gè)處理組設(shè)3個(gè)重復(fù)。自暫養(yǎng)7 d的雜交鱘中,選取80尾健康個(gè)體隨機(jī)分至各組,每組8尾,浸浴28 d。浸浴期間,每日9:00和17:00飽食投喂,水溫為18~20 ℃,溶解氧6~8 mg/L,pH 約7.5。浸浴結(jié)束后,稱量每尾魚的體質(zhì)量和肝臟質(zhì)量,抽取雜交鱘尾靜脈血檢測(cè)血液生理生化指標(biāo),取肝臟和背部肌肉檢測(cè)糖原的含量。

    1.2.2 指標(biāo)測(cè)定

    血液生理指標(biāo)的測(cè)定:用2 mL注射器抽取雜交鱘血液,一份直接保存至1.5 mL離心管中,用于制備血清;另一份保存至含有肝素的1.5 mL離心管中,4 ℃保存?zhèn)溆?,用于?jì)算紅細(xì)胞數(shù)目和血紅蛋白的含量。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)采用血球計(jì)數(shù)板(25×16格)在顯微鏡下計(jì)數(shù)。血紅蛋白的含量采用堿化比色法測(cè)定。

    血液生化指標(biāo)的測(cè)定:血糖濃度、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性采用北京索萊寶生物科技有限公司試劑盒測(cè)定,操作流程按試劑盒說明書進(jìn)行。

    糖原含量的測(cè)定:肝糖原含量的測(cè)定采用蒽酮比色法,肌糖原的含量采用南京建成生物工程研究所的肌糖原測(cè)定試劑盒。以上所有指標(biāo)的測(cè)定均設(shè)置3個(gè)以上重復(fù)。

    1.3 數(shù)據(jù)的計(jì)算及處理

    紅細(xì)胞血紅蛋白含量和肝臟指數(shù)按下式計(jì)算:

    Hm=ρB/n

    n1=m1/m×100%

    式中,Hm為每個(gè)紅細(xì)胞血紅蛋白含量(pg/個(gè)),ρB為血紅蛋白含量(g/L),n為紅細(xì)胞數(shù)目(1012個(gè)/L);n1為肝臟指數(shù),m1為肝臟質(zhì)量(g),m為體質(zhì)量(g)。

    試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,用Excel 2013和IBM SPSS 21統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行整理和分析;各組數(shù)據(jù)之間的多重比較采用單因素方差分析中的LSD和Ducan法,多重比較的顯著性水平為0.05。

    2 結(jié) 果

    2.1 不同質(zhì)量濃度壬基酚對(duì)雜交鱘血液生理指標(biāo)的影響

    試驗(yàn)結(jié)果顯示,對(duì)照組和處理組雜交鱘的紅細(xì)胞數(shù)目無顯著差異(表2)(P>0.05)。壬基酚質(zhì)量濃度為100 μg/L時(shí),血紅蛋白的質(zhì)量濃度最高,為(80.98±2.56) g/L,顯著高于其他組(P<0.05),其他各組間血紅蛋白的質(zhì)量濃度差異不顯著(P>0.05)(表1)。

    壬基酚質(zhì)量濃度為0、25、50 μg/L和100 μg/L時(shí),平均每個(gè)紅細(xì)胞中血紅蛋白含量分別為(183.31±13.47)、(194.28±8.76)、(174.46±6.67) pg/個(gè)和(237.02±6.44) pg/個(gè),壬基酚質(zhì)量濃度為100 μg/L時(shí),平均每個(gè)紅細(xì)胞中血紅蛋白含量顯著高于其他組(P<0.05)(表1)。其他各組間差異不顯著(P>0.05)。

    表1 壬基酚對(duì)雜交鱘血液生理指標(biāo)的影響

    注:同一列標(biāo)不同字母的平均值間差異顯著(P<0.05),下同.

    2.2 不同質(zhì)量濃度壬基酚對(duì)雜交鱘血清生化指標(biāo)的影響

    雜交鱘血清中葡萄糖的濃度隨著壬基酚質(zhì)量濃度的升高而增加(表2)。壬基酚質(zhì)量濃度為50、100 μg/L時(shí),血糖濃度達(dá)到(4.18±0.17)、(4.73±0.44) mmol/L,顯著高于0和25 μg/L組(P<0.05)。但是,50 μg/L和100 μg/L組間以及0和25 μg/L組間血糖濃度差異不顯著(P>0.05)。

    壬基酚質(zhì)量濃度為50 μg/L時(shí),血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性為(25.24±1.02) U/L,顯著高于對(duì)照組(9.96±0.48) U/L(P<0.05),且隨著壬基酚質(zhì)量濃度的增加(100 μg/L),谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性也進(jìn)一步增強(qiáng)(37.14±2.53) U/L(P<0.05)(表3)。

    對(duì)照組和處理組雜交鱘血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性差異不顯著(P>0.05)。壬基酚質(zhì)量濃度為0、25、50 μg/L和100 μg/L時(shí),谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性分別為(101.03±3.35)、(99.46±1.94)、(102.80±2.96) U/L和(104.04±2.34) U/L(表2)。

    表2 壬基酚對(duì)雜交鱘血液生化指標(biāo)的影響

    2.3 不同質(zhì)量濃度壬基酚對(duì)雜交鱘肝臟指數(shù)的影響

    壬基酚質(zhì)量濃度為0、25、50 μg/L和100 μg/L時(shí),雜交鱘肝臟指數(shù)分別為(2.01±0.11)%、(2.19±0.14)%、(3.24±0.09)%和(3.37±0.13)%。壬基酚質(zhì)量濃度為50 μg/L和100 μg/L時(shí),雜交鱘肝臟指數(shù)顯著高于0和25 μg/L組(P<0.05),而50 μg/L和100 μg/L組間以及0和25 μg/L組間肝臟指數(shù)無顯著性差異(P>0.05)(表4)。

    2.4 不同質(zhì)量濃度壬基酚對(duì)雜交鱘肝糖原含量的影響

    壬基酚質(zhì)量濃度為0、25、50 μg/L和100 μg/L時(shí),雜交鱘肝糖原含量分別為(22.74±1.99)、(18.82±1.38)、(13.81±1.41) mg/g和(15.65±1.67) mg/g。隨著壬基酚質(zhì)量濃度的增加,肝糖原的含量逐步減少。壬基酚質(zhì)量濃度為25 μg/L時(shí),肝糖原的含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05),質(zhì)量濃度為50 μg/L和100 μg/L時(shí),肝糖原含量顯著低于壬基酚質(zhì)量濃度為25 μg/L時(shí)(P<0.05),但是這兩組間無顯著差異(P>0.05)(表3)。

    壬基酚質(zhì)量濃度為0、25、50 μg/L和100 μg/L時(shí),雜交鱘肌糖原含量分別為(2.09±0.07)、(2.11±0.11)、(2.05±0.09) mg/g和(1.88±0.03) mg/g,質(zhì)量濃度為100 μg/L時(shí),肌糖原含量最低,顯著低于其他各組(P<0.05),其他各組間肌糖原含量無顯著差異(P>0.05)(表3)。

    表3 壬基酚對(duì)雜交鱘糖原及肝臟指數(shù)的影響

    3 討 論

    3.1 壬基酚對(duì)雜交鱘血紅蛋白含量的影響

    血液生理指標(biāo)可以反映魚類的健康狀況和對(duì)周圍環(huán)境的適應(yīng)性,是重要的毒理學(xué)指標(biāo)[16-17]。紅細(xì)胞數(shù)目較多和血紅蛋白含量較高時(shí),魚類紅細(xì)胞的攜氧能力、機(jī)體生命力和運(yùn)動(dòng)能力也相對(duì)較強(qiáng)[18]。養(yǎng)殖密度較高時(shí),可以提高魚類血紅蛋白含量和紅細(xì)胞數(shù)目[19];水體中溶解氧含量較低時(shí),血紅蛋白含量和紅細(xì)胞數(shù)目減少[20];氨氮含量較高時(shí),魚體內(nèi)血紅蛋白的含量和紅細(xì)胞數(shù)目降低[21]。嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)感染后,可以降低魚體內(nèi)血紅蛋白的含量[22]。環(huán)境激素苯并芘(a)和芘能夠提高魚類血紅蛋白的含量,但對(duì)紅細(xì)胞數(shù)目的影響不顯著[23]。本研究中,100 μg/L試驗(yàn)組顯著提高了雜交鱘血紅蛋白的含量,可能跟加速壬基酚代謝有關(guān),但3個(gè)處理組均未顯著影響紅細(xì)胞的數(shù)目。

    3.2 壬基酚對(duì)雜交鱘谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的影響

    谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶是生物體內(nèi)活力最強(qiáng)的轉(zhuǎn)氨酶,正常個(gè)體中,這兩種酶的活性較低,一旦組織受到損傷或發(fā)生病變,酶活性才會(huì)增強(qiáng)[24]。研究顯示,敵敵畏和氟氯氰菊酯可以誘導(dǎo)草魚(Ctenopharyngodonidella)谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的表達(dá)[25]。對(duì)中華倒刺鲃(Spinibarbussinensis)和川鰈(Platichthysflesus)的研究表明,血清中轉(zhuǎn)氨酶的活性隨著多環(huán)芳烴含量的增加而增強(qiáng)[26-27]。本研究中,隨著壬基酚質(zhì)量濃度的增加,谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性增強(qiáng);各組間谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性無顯著差異。雖然只有谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性增強(qiáng),但也表明雜交鱘的肝臟組織已受到壬基酚的損傷。

    3.3 壬基酚對(duì)雜交鱘肝臟指數(shù)的影響

    魚類肝臟指數(shù)常用作檢測(cè)水體污染的指標(biāo),肝臟指數(shù)升高,表明肝臟遇到有毒有害物質(zhì),正在解毒。研究表明,環(huán)境激素可增加青鳉(Oryziaslatipes)[28]、中華倒刺鲃[27]的肝臟指數(shù)。本試驗(yàn)中,50、100 μg/L處理組雜交鱘肝臟指數(shù)均升高,表明壬基酚可能已在雜交鱘體內(nèi)累積,肝臟已開始解毒。

    3.4 壬基酚對(duì)雜交鱘能量代謝的影響

    葡萄糖提供了機(jī)體內(nèi)代謝所需的大部分能量,是維持生命活動(dòng)所必需的物質(zhì)。用壬基酚、可的松、石油餾出物和萘分別處理海鱸(Dicentrarchuslabrax)、尼羅羅非魚(Oreochromisniloticus)、歐洲鰻鱺(Anguillaanguilla)和虹鱒(Oncorhynchusmykiss)后,這4種魚體內(nèi)的血糖均顯著性升高[29-32]。還有研究顯示,環(huán)境有機(jī)污染物能增加斑馬魚(Daniorerio)血糖的濃度[33]。環(huán)境脅迫也會(huì)引起許氏平鲉(Sebastesschlegeli)和花鱸(Lateolabraxjaponicus)血糖濃度的升高[34]。本研究中,雜交鱘血糖濃度隨著壬基酚質(zhì)量濃度的增加而呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)。血糖升高可能是肝糖原和肌糖原分解產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)入到血液中,方便調(diào)動(dòng)能量解毒。血糖濃度的升高主要來源于肝糖原的能量動(dòng)員,肝糖原不足時(shí),才會(huì)動(dòng)員肌糖原。

    虹鱒、胡子鲇(Clariasbatrachus)暴露于壬基酚和工業(yè)污水中,肝糖原含量顯著下降[35-36]。Tintos等[37]也指出,環(huán)境激素可以加速魚體內(nèi)糖原的分解,引起體內(nèi)糖原含量下降。本研究中,25 μg/L壬基酚引起肝糖原含量的降低;100 μg/L壬基酚才可引起肌糖原含量的降低。糖原含量降低的原因可能是肝臟解毒需要能量;血液中葡萄糖濃度的升高來源于糖原的分解。

    4 結(jié) 論

    本研究中,不同質(zhì)量濃度壬基酚浸浴可以顯著提高雜交鱘血紅蛋白含量和血糖濃度、谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性和肝臟指數(shù),降低肝糖原和肌糖原的含量。表明壬基酚進(jìn)入魚體后,雜交鱘的肝臟已受到損傷,啟動(dòng)了自身解毒系統(tǒng)。

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