Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞比例失衡對強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病的影響

孟 珊，范韶光，馬 超，馬秀芬，劉亞婧，蘇玉華

(1.濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 風(fēng)濕免疫科，山東 濰坊261000；2.中國人民解放軍第89醫(yī)院 小兒骨科；3 .鄆城縣中醫(yī)醫(yī)院 內(nèi)三科)

強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)生與多種因素有關(guān)，具體發(fā)病機(jī)制尚未完全明了[1]。有研究指出，在強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)生發(fā)展過程中，機(jī)體免疫功能受到嚴(yán)重影響，患者T細(xì)胞亞群數(shù)量可呈現(xiàn)出一定的失衡表現(xiàn)，提示T細(xì)胞免疫在強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)病過程中扮演著重要角色[2]。本研究主要探討T細(xì)胞亞群中的輔助性T細(xì)胞以及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在強(qiáng)直性脊柱炎中的表達(dá)水平的變化情況及與強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病的相關(guān)關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年12月-2016年12月期間來院就診的強(qiáng)制性脊柱炎患者65例為觀察組，所有患者均符合1984年紐約修訂的強(qiáng)直性脊柱炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，且未經(jīng)任何治療。排除入院前半年內(nèi)接受糖皮質(zhì)激素治療者；排除合并急性感染及腫瘤患者；排除合并風(fēng)濕病及其他自身免疫病患者；排除合并嚴(yán)重肝腎功能不全者；排除妊娠婦女。其中男34例，女31例，年齡18-56歲，平均年齡(31.32±2.42)歲。選取同期來院行常規(guī)體檢的65例健康者作為對照組。兩組患者一般資料無明顯差異(P均>0.05)，具有可比性。全部患者均簽署了關(guān)于本次試驗(yàn)的知情權(quán)同意書，通過醫(yī)院倫理學(xué)審核。

1.2 方法

所有研究對象均抽取空腹靜脈血5 ml，置于肝素鈉抗凝負(fù)壓真空采血管，常規(guī)4 000 r/min離心10 min，棄去上清液分離血清后，-80℃保存待用。外周血Th17細(xì)胞百分率、Treg細(xì)胞百分率、Th17/Treg細(xì)胞比例檢測采用流式細(xì)胞技術(shù)，將血液樣本常溫復(fù)溫后，加入淋巴細(xì)胞分離液，采用密度梯度離心法分離外周血單核細(xì)胞，然后進(jìn)行常規(guī)FTTC染色后進(jìn)行流式細(xì)胞檢測，所用儀器、試劑及試劑盒均由美國BD公司提供。外周血IL-17、IL-23及IL-6等炎性因子水平檢測采用雙抗體夾心ELIAs法，所采用的試劑盒均來自于北京福瑞生物科技有限公司，檢測步驟及方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求進(jìn)行，利用標(biāo)準(zhǔn)品建立吸光度與已知梯度濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過樣品的OD值計(jì)算與標(biāo)準(zhǔn)曲線的對應(yīng)濃度來測定樣品中目的白介素濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象外周血炎性細(xì)胞因子分布情況

與對照組水平相比，觀察組患者外周血IL-17、IL-23及IL-6等炎性因子水平均明顯偏高(P<0.05)，組間差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 兩組研究對象外周血炎性細(xì)胞因子分布情況

2.2 兩組研究對象外周血T細(xì)胞亞群分布情況

與對照組水平相比，觀察組患者外周血Th17細(xì)胞數(shù)明顯偏高(P<0.05)，其外周血Treg細(xì)胞數(shù)則明顯偏低(P<0.05)，觀察組患者外周血Th17/Treg比率明顯高于對照組(P<0.05)，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2 兩組研究對象外周血T細(xì)胞亞群分布情況

2.3 兩組研究對象外周血T細(xì)胞亞群分布情況與強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病相關(guān)性分析

觀察組與對照組患者外周血Th17細(xì)胞數(shù)與Th17/Treg比率與強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病存在著明顯的正相關(guān)性(r=0.567、0.483，P<0.05)，且觀察組與對照組患者外周血Treg細(xì)胞數(shù)則與強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病存在著明顯的負(fù)相關(guān)性(r=-0.982，P<0.05)。

3 討論

強(qiáng)直性脊柱炎屬自身免疫性疾病，根據(jù)患者發(fā)病程度的不同，其相關(guān)中軸關(guān)節(jié)及肌腱韌帶附著處可出現(xiàn)不同程度的受累表現(xiàn)，主要好發(fā)于青壯年，發(fā)病往往較為隱匿[4,5]。隨著病情進(jìn)展，患者可逐漸由發(fā)病之初的腰背部疼痛轉(zhuǎn)變?yōu)檠祷顒邮芟奚踔良怪┲睆?qiáng)直，嚴(yán)重影響患者的正常生活作息，是世界范圍內(nèi)較為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題[6,7]。

盡管目前關(guān)于強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)病機(jī)制尚不明確，但免疫系統(tǒng)在疾病發(fā)病過程中的調(diào)節(jié)與拮抗作用，已受到廣泛重視。CD4輔助性T細(xì)胞是機(jī)體T細(xì)胞亞群中主要參與適應(yīng)性免疫應(yīng)答的T細(xì)胞，與巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞以及肥大細(xì)胞的聚集和活化[8,9]。Th17細(xì)胞是近年來逐漸被認(rèn)識的一類新型的Th細(xì)胞亞群，可合成并分泌Th17以及IL-22等細(xì)胞因子，可參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)工程[10]。有研究表明，Th17細(xì)胞在真菌感染和細(xì)菌感染的中性白細(xì)胞活化中也扮演著重要角色，主要參與機(jī)體的局部微環(huán)境炎癥介導(dǎo)，是系統(tǒng)性紅斑狼瘡等多種自身免疫性疾病中的促進(jìn)因子[11]。Treg細(xì)胞屬調(diào)控性T細(xì)胞，主要在機(jī)體的特異性免疫抑制中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，與機(jī)體的T細(xì)胞增殖抑制以及維持機(jī)體的免疫耐受均具有明顯的相關(guān)性[12]。動物實(shí)驗(yàn)表明，許多自身免疫性疾病動物模型中，Treg細(xì)胞含量均明顯降低，提示Treg細(xì)胞與機(jī)體的自身免疫有一定關(guān)系[13]。國外有文獻(xiàn)指出，Treg細(xì)胞可通過抑制IL-10等炎性細(xì)胞抑制的分泌活性，影響相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子FOXP3的功能，同時(shí)對Th17細(xì)胞也具有一定的階段性增殖抑制作用[14]。除此之外，Treg細(xì)胞還可表達(dá)一種促進(jìn)ATP水解作用的核苷酸，也可在一定程度上抑制T細(xì)胞的增殖效應(yīng)，從而介導(dǎo)免疫損傷的發(fā)生。本研究結(jié)果顯示，相較于健康人外周血水平，強(qiáng)直性脊柱炎患者外周血中Th17細(xì)胞百分比明顯偏高(P<0.05)，而Treg細(xì)胞百分比則明顯偏低(P<0.05)，且Th17/Treg細(xì)胞比率明顯偏高(P<0.05)，提示Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞百分比及平衡比例與強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)生具有一定關(guān)系，進(jìn)一步探究其相關(guān)關(guān)系發(fā)現(xiàn)，強(qiáng)直性脊柱炎患者外周血Th17細(xì)胞百分比及Th17/Treg細(xì)胞比率與強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)病呈顯著正相關(guān)，患者外周血Treg細(xì)胞百分比則與強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)病呈顯著負(fù)相關(guān)。進(jìn)一步探究強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病過程中患者外周血中炎性細(xì)胞因子的分泌情況發(fā)現(xiàn)，強(qiáng)直性脊柱炎患者外周血中IL-17、IL-23及IL-6等炎性因子表達(dá)水平均明顯高于健康人(P<0.05)，提示炎癥反應(yīng)過程在促進(jìn)強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)生發(fā)展過程中也發(fā)揮著一定的作用。