CXCR4和CXCR7在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

呂棟，滕志剛，周云飛，任選義

（河南省開封市中心醫(yī)院 泌尿外科，河南 開封 475000）

趨化因子相對分子質(zhì)量為10×103～12×103，是細(xì)胞因子超家族中具有化學(xué)趨化作用的小分子蛋白，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)約50種趨化因子和約20種受體[1]。趨化因子與其相對應(yīng)的受體結(jié)合后，在血管生成、胚胎發(fā)育、炎癥和腫瘤等生理或病理過程中發(fā)揮作用。CHATTERJEE等[2]報道趨化因子受體與腫瘤的轉(zhuǎn)移特性有關(guān)以來，更多研究發(fā)現(xiàn)趨化因子受體與腫瘤的發(fā)展密切相關(guān)。過去認(rèn)為趨化因子受體4（chemokine receptor 4, CXCR4）是趨化因子基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1（stromal cell derived factor-1, CXCL12）的唯一受體，然而最近研究發(fā)現(xiàn)CXCL12尚存在趨化因子受體7（chemokine receptor 7, CXCR7） 這 一 新 的 受 體[3-4]，CXCL12/CXCR7生物軸同樣在腫瘤發(fā)展過程中起重要作用。因此本實(shí)驗(yàn)檢測趨化因子受體CXCR4和CXCR7在腎透明細(xì)胞癌（clear cell renal cell carcinoma, ccRCC）組織中的表達(dá)，并探討其相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2010年9月-2015年8月在河南省開封市中心醫(yī)院泌尿外科行手術(shù)切除且臨床資料完整的50例腎癌患者，取其ccRCC組織標(biāo)本。其中，男性28例，女性22例；年齡49～83歲，平均62.4歲。采用2004年世界衛(wèi)生組織腎癌組織學(xué)分級方法：高、中分化32例，低分化18例。按照2010版UICC/AJCC的TNM分期系統(tǒng)進(jìn)行臨床分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期14例，Ⅲ期12例，Ⅳ期8例；其中骨轉(zhuǎn)移3例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例；外科切緣陰性46例，陽性4例。所有患者術(shù)前未行放、化療。隨機(jī)切取20例遠(yuǎn)離腎癌的正常腎組織作為對照，其中男性12例，女性8例；年齡49～83歲，平均67.4歲。

1.2 方法

使用免疫組織化學(xué)SABC三步法。一抗試劑CXCR4和CXCR7為濃縮型羊多克隆抗體，工作液濃度1∶100；二抗試劑為濃縮型兔抗羊多克隆抗體，稀釋比例1∶200。兔抗人CXCR4一抗、兔抗人CXCR7一抗、兔抗SABC試劑盒及DAB顯色劑由上海哈靈生物科技有限公司提供，所有標(biāo)本用10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，2～4μm連續(xù)切片。應(yīng)用免疫組織化學(xué)SABC法檢測，組織切片常規(guī)脫蠟，水化后經(jīng)3%過氧化氫處理，加熱抗原修復(fù)，按試劑盒說明書進(jìn)行操作。所有實(shí)驗(yàn)均設(shè)陽性對照及陰性對照，用已知CXCR4、CXCR7表達(dá)的陽性圖片作陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

免疫組織化學(xué)法陽性反應(yīng)為黃棕色顆粒，陽性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜。用半定量積分判斷結(jié)果：①陽性細(xì)胞數(shù)≤10%為0分，10%～30%為1分，31%～60%為2分，61%～80%為3分，＞80%為4分；②陽性強(qiáng)度：無著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。將兩者積分相乘，0分陰性（-），1～4分弱陽性（+），5～8分陽性（++），9～12分強(qiáng)陽性（+++）。將ccRCC組織標(biāo)本及正常腎組織標(biāo)本中CXCR4和CXCR7蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行比較，分析ccRCC組織中CXCR4和CXCR7的表達(dá)水平及其與患者臨床病理學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)或一致性檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CXCR4、CXCR7在ccRCC和癌旁組織中的表達(dá)

免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示，CXCR4和CXCR7蛋白陽性表達(dá)于細(xì)胞漿和細(xì)胞膜，以細(xì)胞漿為主。ccRCC組織中，CXCR4和CXCR7蛋白含量升高。CXCR4在ccRCC組織中的陽性表達(dá)率為72%（36/50），在正常腎組織為10%（2/20）；CXCR7在ccRCC組織中的陽性表達(dá)率為70%（35/50），在正常腎組織為15%（3/20），經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=22.128和0.000，P=17.414和0.000）。見圖1～3。

2.2 CXCR4、CXCR7與患者臨床病理特征的關(guān)系

CXCR4、CXCR7蛋白的表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小等無相關(guān)性（P＞0.05），與患者TNM分期、組織學(xué)分級及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切（P＜0.05）。見表1。

2.3 CXCR4、CXCR7在ccRCC組織中表達(dá)的相關(guān)性

CXCR4與CXCR7蛋白在ccRCC組織中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.467，Kappa=0.740，P=0.001）。見表2。

圖1 CXCR4在ccRCC組織中陽性表達(dá)

圖2 CXCR4在正常腎組織中陰性表達(dá)

圖3 CXCR7在ccRCC組織中陽性表達(dá)

表1 ccRCC患者臨床病理特征與CXCR4、CXCR7蛋白表達(dá)的關(guān)系

表2 CXCR4、CXCR7在ccRCC組織中表達(dá)的相關(guān)性 例

3 討論

CXCR4是有7個跨膜結(jié)構(gòu)域的GTP-蛋白偶連的跨膜受體之一，在免疫系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞中廣泛表達(dá)[5]。不同的腫瘤高表達(dá)特異的趨化因子受體，腫瘤細(xì)胞借助趨化因子與受體的特異結(jié)合力，最終向這些器官特異性轉(zhuǎn)移。CXCR4作為CXCL12的受體不僅表達(dá)于細(xì)胞漿，也可在細(xì)胞膜中檢測到。CXCL12/CXCR4生物軸在多種惡性腫瘤的特定轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用，在淋巴結(jié)、肺、肝及骨髓腫瘤常見的轉(zhuǎn)移灶中均發(fā)現(xiàn)CXCL12/CXCR4高表達(dá)[6]，但其在腎腫瘤組織中的研究甚少[7]。最近研究發(fā)現(xiàn)，CXCL12尚存在CXCR7受體，CXCL12/CXCR7生物軸同樣在腫瘤發(fā)展過程中起重要作用[3-4，8]。CXCR7作為膜相關(guān)的受體蛋白，在多種腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及胎肝細(xì)胞中高表達(dá)，在正常細(xì)胞中不表達(dá)。CXCR7在乳腺癌、宮頸癌、肺癌等多種腫瘤細(xì)胞株中高表達(dá)[9-11]，但對腎腫瘤的研究甚少。目前，CXCR4和CXCR7在腎腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用尚不明確。本研究發(fā)現(xiàn)，CXCR4在ccRCC組織中呈高表達(dá)，其陽性率為72.0%，相比癌旁腎組織，CXCR4蛋白表達(dá)升高。同樣CXCR7在ccRCC組織中的陽性表達(dá)率為70%，高于正常腎組織的15%。尤其重要的是，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CXCR4、CXCR7的陽性表達(dá)與患者TNM分期、組織學(xué)分級及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，與患者的性別、年齡及腫瘤大小無關(guān)。本組資料顯示，隨著ccRCC細(xì)胞的惡性程度升高和分化變差，CXCR4和CXCR7蛋白的陽性表達(dá)水平逐漸升高；同樣隨著浸潤深度增加和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生，即進(jìn)展期ccRCC組織中CXCR4和CXCR7蛋白的陽性表達(dá)率升高。據(jù)此推測，CXCR4和CXCR7可能作為促癌基因發(fā)揮作用，其高表達(dá)與腎腫瘤分期、分級及惡性發(fā)展進(jìn)程相關(guān)，可用來推斷ccRCC的預(yù)后。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CXCR4與CXCR7蛋白在ccRCC組織中表達(dá)呈正相關(guān)，兩者共陽性表達(dá)30例（60%，30/50），提示兩者可能通過CXCL12/CXCR4/CXCR7生物軸，借助于某種復(fù)雜的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，協(xié)同作用于ccRCC的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移，其具體機(jī)制尚需研究。

本研究認(rèn)為，CXCR4、CXCR7在ccRCC組織中高表達(dá)，其與ccRCC TNM分期和組織學(xué)分級關(guān)系密切，聯(lián)合檢測2種蛋白的表達(dá)可作為判斷ccRCC預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。