TNF-α和TSLP在干眼癥患者中的表達(dá)水平及臨床意義

朱珮瑜 雷鵬

（廣東省第二人民醫(yī)院體檢科 廣州 510317）

干眼癥是由于淚液動(dòng)力學(xué)及淚液量和質(zhì)異常所引起的淚膜穩(wěn)定性下降，可誘使眼表組織病變[1]?；颊叱０橛醒鄄慨愇锔小⑽饭獾劝Y狀，且存在角膜上皮角化干燥等體征，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示[2]，我國干眼癥發(fā)生率為19%～29%，呈現(xiàn)老年人多于青年人、女性多于男性的流行病學(xué)趨勢(shì)。干眼癥病因繁多，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，主要危險(xiǎn)因素包括年齡、性別、糖尿病、空氣污染、眼藥水濫用等，且與機(jī)體炎癥反應(yīng)密切相關(guān)[3]。腫瘤壞死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α） 為重要的炎性介質(zhì)，能促進(jìn)中性粒細(xì)胞吞噬，抗感染，促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化，與青光眼、白內(nèi)障等一些眼部疾病的發(fā)生、進(jìn)展有密切關(guān)系。胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素（Thymic Stromal Lymphopoietin，TSLP）是一種由上皮細(xì)胞、肥大細(xì)胞及成纖維細(xì)胞表達(dá)的細(xì)胞因子，可通過樹突狀細(xì)胞協(xié)調(diào)體內(nèi)天然免疫和適應(yīng)性免疫，導(dǎo)致上皮細(xì)胞增生肥大及黏液過多分泌，進(jìn)一步加重病情。鑒于此，本研究通過檢測不同人群淚液、結(jié)膜上皮細(xì)胞中TNF-α、TSLP的表達(dá)，以探究二者在干眼癥發(fā)生機(jī)制中的作用，以期為臨床提供參考?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年1月～2017年6月我院收治的70例干眼癥患者為觀察組，其中男33例、女 37例，年齡 28～71歲、平均年齡（42.91±6.98）歲。選擇同期于我科進(jìn)行眼科體檢未見異常的55例健康正常者為對(duì)照組，其中男30例、女25例，年齡26～68歲、平均年齡（43.78±6.77）歲。兩組性別、年齡等資料比較無顯著性差異（P＞0.05），具可比性。

1.2 入組標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：符合干眼癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；無其他眼部疾病者；未合并全身代謝性疾病者；患者均自愿參加本次研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：精神異?；驘o法配合檢查者；近12周內(nèi)有眼部活動(dòng)性炎癥史者；合并其他變應(yīng)性疾病、角膜移植、已行準(zhǔn)分子激光屈光手術(shù)者；不能如期進(jìn)行復(fù)查的干眼癥患者。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集與檢測 兩組患者均在首次入院檢查時(shí)按以下方法進(jìn)行1次標(biāo)本采集與檢測：（1）輕拉受檢者下瞼結(jié)膜，稍稍后壓，收集淚液后立即放入凍存管；（2）輕輕用刀片刮取受檢者上瞼結(jié)膜，放入凍存管，儲(chǔ)存待檢。將結(jié)膜上皮細(xì)胞和淚液放入離心機(jī)，轉(zhuǎn)速2 000 r/min，離心半徑13.5 CB，離心10 min，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測兩組淚液、結(jié)膜上皮細(xì)胞中TNF-α、TSLP水平，且兩組樣本檢測均由同1人進(jìn)行。

1.3.2 臨床檢查 （1）角膜熒光素染色情況（Fluorescein，F(xiàn)L）檢查分為：0 級(jí)，無染色；1 級(jí)，散狀點(diǎn)狀染色；2級(jí)，密集型點(diǎn)狀染色為；3級(jí)，片狀染色。其中 2～3級(jí)判定為陽性。（2） 淚膜破裂時(shí)間（Break-up Time，BUT）檢查：在裂隙燈下將1%熒光素鈉紙放在患者結(jié)膜囊內(nèi)，暴露角膜，用鉆藍(lán)光照射，記錄最后一次瞬目到角膜上開始出現(xiàn)斑點(diǎn)的時(shí)間，時(shí)間＜10 s為陽性。（3）淚液分泌試驗(yàn)（Schirmer I Test，SIT）檢查：輕輕將濾紙放入受檢者下瞼內(nèi)側(cè)1/3的結(jié)膜囊內(nèi)，另一端自然下垂，囑患者輕輕閉眼，5 min后取出濾紙測量并記錄濕長，長度＜10 mm為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，多組之間比較采用方差分析，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組淚液、結(jié)膜上皮細(xì)胞中TNF-α、TSLP比較觀察組淚液、結(jié)膜上皮細(xì)胞中TNF-α、TSLP均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組淚液、結(jié)膜上皮細(xì)胞中TNF-α、TSLP水平比較（ng/L，±s）

表1 兩組淚液、結(jié)膜上皮細(xì)胞中TNF-α、TSLP水平比較（ng/L，±s）

組別 n 淚液TNF-α TSLP結(jié)膜上皮細(xì)胞TNF-α TSLP觀察組對(duì)照組70 55 t P 30.23±6.33 20.61±4.40 10.01 0.00 16.40±4.28 9.31±2.57 11.47 0.00 268.84±30.28 190.89±21.50 16.81 0.00 128.20±16.49 66.38±8.81 26.79 0.00

2.2 觀察組淚液中TNF-α、TSLP表達(dá)與臨床檢查結(jié)果相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析顯示，淚液中TNF-α、TSLP 表達(dá)與 BUT、SIT 均呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），與 FL呈正相關(guān)（P＜0.05）。見表 2。

表2 觀察組淚液中TNF-α、TSLP表達(dá)與臨床檢查結(jié)果相關(guān)性分析

2.3 觀察組結(jié)膜上皮細(xì)胞中TNF-α、TSLP表達(dá)與臨床檢查結(jié)果相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析顯示，結(jié)膜上皮細(xì)胞中TNF-α、TSLP表達(dá)與BUT、SIT均呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），與 FL 呈正相關(guān)（P＜0.05）。見表3。

表3 觀察組結(jié)膜上皮細(xì)胞中TNF-α、TSLP表達(dá)與臨床檢查結(jié)果相關(guān)性分析

3 討論

干眼癥是眼科常見的眼表疾病之一，病因繁多，目前多認(rèn)為炎癥、內(nèi)分泌紊亂以及神經(jīng)功能障礙可能參與或共同參與該病的發(fā)生、發(fā)展，當(dāng)淚液分泌及排出系統(tǒng)功能不全，且存在長時(shí)間異常便會(huì)破壞眼表面防御平衡，損傷眼表修復(fù)功能，導(dǎo)致淚膜穩(wěn)定性下降，引起淚腺和眼表慢性炎癥反應(yīng)。臨床研究表明[5]，在正常情況下，眼表面能通過多種調(diào)控機(jī)制調(diào)整眼表面免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)，在干眼癥進(jìn)展階段，炎癥反應(yīng)起著最為關(guān)鍵的作用。

TNF-α主要是由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥介質(zhì)，為啟動(dòng)炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵細(xì)胞因子，可促進(jìn)炎癥細(xì)胞發(fā)生聚集與黏附，誘發(fā)慢性炎癥反應(yīng)[6]。此外，TNF-α亦可通過自分泌和旁分泌等多種途徑將白細(xì)胞招募到炎癥部位，激活炎性細(xì)胞以發(fā)揮抗感染、殺傷和抑制腫瘤細(xì)胞、促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化等作用，廣泛參與了多種自身免疫病的病理過程。TSLP主要由上皮細(xì)胞合成、分泌，能夠與樹突狀細(xì)胞表面受體結(jié)合，通過TSLP/OX40L/OX40信號(hào)通路誘導(dǎo)Th2 型細(xì)胞轉(zhuǎn)型，促進(jìn)白細(xì)胞介素 -4（IL-4）、IL-5、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子的產(chǎn)生，啟動(dòng)過敏反應(yīng)[7]。研究結(jié)果顯示，觀察組淚液、結(jié)膜上皮細(xì)胞中TNF-α、TSLP均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），提示在干眼癥患者結(jié)膜上皮細(xì)胞和淚液中，TNF-α和TSLP處于病理性過度表達(dá)。這與曾永宜[8]研究結(jié)果相一致。此外，本研究亦發(fā)現(xiàn)，干眼癥患者淚液、結(jié)膜上皮細(xì)胞中 TNF-α、TSLP表達(dá)與 BUT、SIT 均呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），與 FL 呈正相關(guān)（P＜0.05），這說明 TNF-α、TSLP在干眼癥發(fā)生機(jī)制中具有重要作用，考慮原因可能為以TNF-α、TSLP為代表的炎性介質(zhì)的釋放，引起炎性聚集，加重眼表和淚腺的炎癥反應(yīng)，同時(shí)淚膜持續(xù)性異常，眼表面防御機(jī)制被破壞以致免疫及炎癥反應(yīng)失衡，進(jìn)一步加重淚膜不穩(wěn)定性及眼表損害。綜上所述，TNF-α、TSLP在干眼癥發(fā)生、發(fā)展中有著極為重要的作用，可作為干眼癥臨床診斷或預(yù)后判斷的標(biāo)志物。