實時熒光定量PCR在HPV檢測中的應(yīng)用研究

王景芬

（赤峰市松山區(qū)婦幼保健所檢驗科，內(nèi)蒙古 赤峰 024005）

人乳頭瘤病毒（HPV）是與女性患者宮頸病變甚至癌變直接相關(guān)的一類病毒，持續(xù)感染會增加宮頸癌發(fā)生率[1]，HPV感染患者早期多無特異性表現(xiàn)，因而實時早期篩查的價值較高。目前臨床常用的篩查手段有實時熒光定量PCR、第二代雜交捕獲法、酶切信號放大法等，其中實時熒光定量PCR在HPV檢測中的應(yīng)用愈發(fā)廣泛，本次研究就其在HPV檢測中的應(yīng)用進行研究分析，為臨床檢驗工作提供部分參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年6月～2018年2月我院接診的宮頸病變患者180例作為研究對象，年齡25～50歲，平均（38.59±4.32）歲，均未合并其他生殖系統(tǒng)疾病者，且就本次研究簽署知情同意書。按照患者的就診編號將其隨機分為觀察組與對照組，各90例，兩組患者一般資料對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

對所有患者均實施陰道鏡病理學(xué)活檢后實施HPV DNA檢測。

1.2.1 對照組

給予雜交捕獲Ⅱ代法檢測，采用試劑盒對待檢標(biāo)本進行解鏈、雜交，獲取的雜交鏈與特異性抗體結(jié)合后進行信號放大與發(fā)光處理，對獲取的光強度對DNA-RNA雜交鏈含量進行定量檢測。

1.2.2 觀察組

給予熒光定量PCR檢測，采用HPV核酸分型檢測試劑盒，對宮頸細(xì)胞進行HPV DAN檢測，將特異性引物與探針與靶序列結(jié)合，同時在Taq酶引導(dǎo)下復(fù)制，水解探針后形成FAM熒光基團，其與DNA復(fù)制合成情況相關(guān)，一條DNA鏈的合成與一次熒光相對應(yīng)，一次進行DNA復(fù)制的定量檢測。

1.3 觀察指標(biāo)

對兩組患者的HPV陽性檢出率、特異度及敏感度進行比較分析，其中特異度=真陰性/（真陰性＋假陽性）×100%；敏感度=真陽性/（真陽性＋假陰性）×100%[2]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理，計數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用x2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者HPV，DNA陽性檢出率比較

兩組患者HPV，DNA陽性檢出率分別為觀察組93.98%，對照組81.93%，組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），實時熒光定量PCR的陽性檢出率顯著高于雜交捕獲Ⅱ代法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組患者HPV，DNA陽性檢出率比較 [n（%）]

2.2 兩組患者檢測結(jié)果的特異度及敏感度比較

觀察組患者檢測的特異度及敏感度分別為83.21%，92.35%，對照組分別為76.69%，81.93%，組間比較觀察組均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組患者檢測的特異度及敏感度比較（%）

3 討 論

HPV病毒根據(jù)其DNA排序有多種分型，目前有超40中HPV，DNA分型與女性生殖系統(tǒng)感染相關(guān)，嚴(yán)重時易引發(fā)宮頸癌變，直接威脅患者生命安全。臨床診斷多有賴于病理學(xué)活檢，HPV的早期篩查多采用第二代雜交捕獲法、酶切信號放大法等方法。本次研究就實施熒光定量PCR檢測與以往常用的第二代雜交捕獲法的應(yīng)用效果進行比較，結(jié)果顯示實時熒光定量PCR檢測在PCR DNA檢測方面，從陽性檢出率、敏感度及特異度等方面比較，均顯著優(yōu)于第二代雜交捕獲法，由此可見與過去常用的檢驗方法比較，實時熒光定量PCR檢測在早期診斷方面的優(yōu)勢較高，臨床推廣及普及的價值較大。