自建檢測(cè)系統(tǒng)性能驗(yàn)證方法初探

李學(xué)會(huì) 張望明 弋志巍 李程程

【摘要】目的：探討自建檢測(cè)系統(tǒng)分析性能的確認(rèn)方法。方法：本研究參照美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（CLSI）頒布的多個(gè)EP文件、NCCLS C28-A2和我國(guó)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》制定驗(yàn)證方案，對(duì)某國(guó)產(chǎn)β2-微球蛋白試劑和西門(mén)子ADVIA1800全自動(dòng)生化分析儀組成的檢測(cè)系統(tǒng)的最低檢測(cè)限（空白限）、精密度（重復(fù)性精密度和期間精密度）、正確度（正確度相對(duì)偏差、比對(duì)試驗(yàn)）、線性范圍進(jìn)行性能驗(yàn)證。結(jié)果：最低檢測(cè)限為0.0156≤2.000，批內(nèi)精密度為0.92%、0.67%，批間精密度為0.49%，線性范圍為0～15mg/L，正確度相對(duì)偏差均小于8%，與西門(mén)子原裝配套試劑進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)得到回歸方程為：y=0.884x+0.3202，相關(guān)系數(shù)R=0.9624。結(jié)論：該檢測(cè)系統(tǒng)性能指標(biāo)均滿足相關(guān)法規(guī)和試劑說(shuō)明書(shū)要求，驗(yàn)證結(jié)論為合格。本研究提供的驗(yàn)證方案方便實(shí)用，較適合于臨床實(shí)驗(yàn)室的性能評(píng)價(jià)。

【關(guān)鍵詞】檢測(cè)系統(tǒng)；正確度；精密度；性能驗(yàn)證

我國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法和ISO15189：2012均要求實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)檢驗(yàn)程序的性能進(jìn)行確認(rèn)，證實(shí)其滿足預(yù)期用途后方可用于臨床檢測(cè)。但對(duì)臨床化學(xué)自建檢測(cè)系統(tǒng)性能驗(yàn)證的具體實(shí)驗(yàn)方法國(guó)內(nèi)尚未達(dá)成共識(shí)，本研究參照美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（CLSI）頒布的EP17-A2、EP5-A2、EP15-A3、EP9-A3、EP-6A和我國(guó)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》制定實(shí)驗(yàn)方案，對(duì)某國(guó)產(chǎn)β2-微球蛋白試劑和西門(mén)子ADVIA1800全自動(dòng)生化分析儀組成的檢測(cè)系統(tǒng)的最低檢測(cè)限、精密度、正確度、線性范圍進(jìn)行性能驗(yàn)證，旨在驗(yàn)證該檢測(cè)系統(tǒng)的性能狀況和探討方便實(shí)用的性能驗(yàn)證方案。

1 材料與方法

1.1 判斷標(biāo)準(zhǔn)制定

由于β2-微球蛋白精密度和正確度尚無(wú)國(guó)家或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)2016年衛(wèi)生部PT結(jié)果β2-微球蛋白的允許范圍反推其為T(mén)EA=25%，本次判斷標(biāo)準(zhǔn)按照行業(yè)推薦要求，重復(fù)性精密度<1/4TEA，批內(nèi)精密度<1/3TEA，偏倚<1/3TEA為判斷標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)試劑說(shuō)明書(shū)要求較以上要求高時(shí)按試劑說(shuō)明要求。其它驗(yàn)證試驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)均按文件要求或試劑說(shuō)明書(shū)規(guī)定取其要求高者。

1.2 試劑與儀器

西門(mén)子ADVIA1800全自動(dòng)生化分析儀、某國(guó)產(chǎn)β2-微球蛋白測(cè)定試劑盒（免疫比濁發(fā)）、西門(mén)子原裝配套脂蛋白（a）試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 最低檢測(cè)限

參照EP17-A2文件要求，采用同一批號(hào)試劑，重復(fù)測(cè)定零濃度校準(zhǔn)品20次，計(jì)算測(cè)定結(jié)果的均值x及標(biāo)準(zhǔn)差（s），（x+2s）以作為試劑的最低檢測(cè)限，以不高于產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)標(biāo)稱的≤2.0000為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.2 精密度

參考CLSI EP5-A2文件要求，重復(fù)性精密度通過(guò)測(cè)定兩個(gè)濃度水平的質(zhì)控樣本，每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)定20次，計(jì)算變異系數(shù)（CV），以精密度不高于6.0%作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。期間精密度通過(guò)測(cè)定兩個(gè)濃度水平的質(zhì)控樣本，每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)定3次（x1、x2、x3），連續(xù)測(cè)定20天，計(jì)算批間變異系數(shù)（CV），以精密度不高于8%作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.3 正確度相對(duì)偏差

參考CLSIEP15-A3文件要求，取廠商不同批的校準(zhǔn)品和廠商質(zhì)控物，每份樣本重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算均值（x）與參考值（M）的相對(duì)偏差（T%），以不高于8%作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.4 比對(duì)試驗(yàn)

依據(jù)CLSI EP9-A3文件，用40個(gè)在測(cè)定濃度范圍內(nèi)不同濃度的人源樣本，以西門(mén)子原裝配套產(chǎn)品測(cè)定結(jié)果為x，以驗(yàn)證試劑測(cè)定結(jié)果為y，用線性回歸方法計(jì)算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)（r）及在參考值上限處的預(yù)期偏差（Be），其公為：Bc=a+（b-1）Xc，預(yù)期偏差Bc的95%可信區(qū)間公式為：

1.3.5 線性范圍

參考CLSIEP6一文件，取一份接近線性低限樣本（低值樣本）和一份接近線性高限樣本（高值樣本）將低濃度與高濃度血清標(biāo)本按比例配制成5個(gè)系列濃度樣本（1：0、3：1、1：1、1：3，0：1），各個(gè)濃度梯度樣本重復(fù)檢測(cè)3次，計(jì)算均值。其預(yù)期濃度按公式x=（CL×VL+CH×VH）/（VL+VH）計(jì)算，以理論值（xi）作為自變量，以測(cè)定值（yi）作為因變量，求出線性回歸方程，計(jì)算相關(guān)系數(shù)r。用稀釋濃度的理論值（xi）代入線性回歸方程，計(jì)算出yi的估計(jì)值（yi），及yi與yi的偏差，相對(duì)偏差（%）=（yi-yi）/yi×100%，絕對(duì)偏差=（yi-yi），以說(shuō)明書(shū)規(guī)定的相關(guān)系數(shù)r≥0.990，β2-MG濃度≤5mg/L，線性絕對(duì)偏差≤0.5mg/L；β-MG濃度>5mg/L，線性相對(duì)偏差≤8.0%作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 最低檢測(cè)限結(jié)果

20次檢測(cè)結(jié)果x=0.021、s=0.0183，x+2s=0.0156≤2.000，符合說(shuō)明書(shū)規(guī)定，驗(yàn)證通過(guò)。

2.2 精密度

兩個(gè)濃度水平質(zhì)控樣本重復(fù)測(cè)定20次的均值分別為4.22、14.98，標(biāo)準(zhǔn)差分別為0.039、0.100，批內(nèi)CV值為0.92%和0.67%都小于6.0%；批間精密度樣本均值分別為4.41、15.70，標(biāo)準(zhǔn)差分別為0.12、0.45批間CV值為2.7%和0.49%都小于2.9%，符合說(shuō)明書(shū)規(guī)定，驗(yàn)證通過(guò)。

2.3 正確度相對(duì)偏差

校準(zhǔn)品五個(gè)濃度相對(duì)偏差分別為2.50%、1.25%、-0.50%、0.44%、-0.09%，質(zhì)控品相對(duì)偏差分別為-1.88%、-3.55%，偏差均小于8%，驗(yàn)證通過(guò)。

2.4 比對(duì)試驗(yàn)

經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，回歸方程為：y=0.884x+0.3202，相關(guān)系數(shù)R2-0.9624。在參考值上限（3.0mg /L）時(shí)的預(yù)期偏差（及預(yù)期偏差95%的可信區(qū)間）為0.028（-0.012～0.051）mg幾驗(yàn)證通過(guò)，結(jié)果如圖1所示。

3.5 線性實(shí)驗(yàn)

線性回歸方程y =1.002x-0.135，相關(guān)系數(shù)r=0.9997>0.990；xi=0mg/L時(shí)，線性絕對(duì)偏差為-0.135mg/L小于0.5mg/L；xi=3.75、7.5、11.25、15mg/L時(shí)，線性相對(duì)偏差分別為-2.97、-0.34、-0.79、0.70均小于10.0%.相關(guān)系數(shù)和線性偏差均符合說(shuō)明書(shū)規(guī)定，驗(yàn)證通過(guò)，結(jié)果如圖2所示。

精密度是檢驗(yàn)程序最主要的分析性能。評(píng)價(jià)精密度的方案有多種，主要有CLSIEP-5A、CLSI EP15-A、CLSI EP5-A。本研究參考EP5-A2文件建立驗(yàn)證方案，批內(nèi)和日間（兩水平）各重復(fù)測(cè)定20次，分別計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差和CV，結(jié)果顯示批內(nèi)CV和日間CV均遠(yuǎn)低于判斷標(biāo)準(zhǔn)，表面精密度性能達(dá)到了最佳的質(zhì)量要求。

正確度的評(píng)價(jià)方法也有多種，主要有正確度相對(duì)偏差的計(jì)算、回收試驗(yàn)和比對(duì)試驗(yàn)。本研究參考CLSI EP15-α3和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，我們分別使用了不同批號(hào)的校準(zhǔn)品和定值質(zhì)控品進(jìn)行正確度相對(duì)偏差的計(jì)算結(jié)果顯示偏差均遠(yuǎn)小于判斷標(biāo)準(zhǔn)。除此之外我們還按CLSI發(fā)布的EP9-A3方案與原裝配套試劑進(jìn)行樣本比對(duì)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，回歸方程為：y=0.884x+0.3202，相關(guān)系數(shù)R2=0.9624。在參考值上限（3.Omg/L）時(shí)的預(yù)期偏差（及預(yù)期偏差95%的可信區(qū)間）為0.028（-0.012～0.051）mg/L，以上兩種評(píng)價(jià)方法結(jié)果均表明該檢測(cè)系統(tǒng)具有較好正確度。

CLSI EP17-A2推薦用空白限、檢出限和定量檢出限表示檢驗(yàn)程序的檢出能力。本研究通過(guò)重復(fù)測(cè)定零濃度校準(zhǔn)品20次，以（x+2s）作為試劑的最低檢測(cè)限，結(jié)果為0.0156遠(yuǎn)低于試劑說(shuō)明書(shū)宣稱的2.000，表面該檢測(cè)系統(tǒng)具有較好的檢出能力。

線性范圍指測(cè)量結(jié)果與預(yù)期的分析物濃度呈線性的范圍，是質(zhì)量控制的主要性能評(píng)價(jià)指標(biāo)之一。參考CLSI EP6-A文件，建立測(cè)定此次線性驗(yàn)證方案，結(jié)果表明相關(guān)系數(shù)和線性偏差均符合說(shuō)明書(shū)規(guī)定。

綜上所述，某國(guó)產(chǎn)β2-微球蛋白試劑和西門(mén)子ADVIA1800全自動(dòng)生化分析儀組成的檢測(cè)系統(tǒng)，具有較好的性能狀態(tài)。本研究提供的性能評(píng)價(jià)方案，具有方便實(shí)用，操作簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)，較適合于臨床實(shí)驗(yàn)室的性能評(píng)價(jià)。