• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    蒙藥藍(lán)盆花乙醇提取物的血清藥物化學(xué)研究

    2018-09-10 21:10:24馬飛祥薛培鳳韓盟帝王媛媛
    中國藥房 2018年21期
    關(guān)鍵詞:串聯(lián)質(zhì)譜法超高效液相色譜

    馬飛祥 薛培鳳 韓盟帝 王媛媛

    摘 要 目的:初步探討蒙藥藍(lán)盆花乙醇提取物在大鼠體內(nèi)的血中移行成分,為闡明該藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考。方法:將10只大鼠隨機(jī)分成給藥組(以生藥量計為0.3 g/100 g)和空白組(0.5%羧甲基纖維素鈉溶液),每組5只,灌胃給藥,給藥量均為2 mL/100 g,早、晚8:00各給藥1次,連續(xù)給藥3 d。末次給藥30 min后,肝門靜脈取血,經(jīng)有機(jī)溶劑沉淀法分別制得含藥血清和空白血清樣品。以藍(lán)盆花原藥材為對照,采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行測定,通過比較3種樣品的化學(xué)成分差異,再結(jié)合化合物對照品和文獻(xiàn)數(shù)據(jù),鑒定藍(lán)盆花乙醇提取物灌胃后大鼠體內(nèi)的血中移行成分。結(jié)果:共發(fā)現(xiàn)了39個血中移行成分,其中原型成分17個、代謝成分22個,原型成分主要為黃酮類及苯丙酸類,在大鼠體內(nèi)多發(fā)生甲基化、硫酸化與葡萄糖醛酸化等反應(yīng)。結(jié)論:初步確定了大鼠灌胃藍(lán)盆花乙醇提取物后的入血成分,為該藥材進(jìn)一步的體內(nèi)代謝研究奠定了基礎(chǔ)。

    關(guān)鍵詞 藍(lán)盆花;血清藥物化學(xué);超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;血中移行成分;大鼠

    中圖分類號 R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408(2018)21-2953-05

    DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.21.17

    ABSTRACT OBJECTIVE: To preliminarily investigate the constituents absorbed into the blood of ethanol extract from Mongolia medicine Scabiosa comosa in rats, and to provide reference for clarifying the effective substance basis of the medicine. METHODS: Ten rats were randomly divided into administration group (0.3 g/100 g by crude drug) and blank group (0.5% CMC-Na solution), with 5 rats in each group. The were given relevant medicine intragastrically 2 mL/100 g, at 8:00 morning and evening, for consecutive 3 d. 30 min after last administration, blood samples were collected from hepatic portal vein. The containing serum samples and blank serum samples were prepared by organic solvent precipitation. UPLC-MS/MS method was adopted by using S. comosa as control. Through comparing chemical components of 3 kinds of samples, constituents of ethanol extract from S. comosa in rats after intragastric administration were identified on the basis of compound control and literature data. RESULTS: Totally 39 constituents absorbed into blood were found, of which 17 were prototype components and 22 related metabolites. The prototype components were mainly flavonoids and phenylpropionic acid. Methylation, sulfation and glucose aldehyde reactions were observed in rats. CONCLUSIONS: The constituents into the blood of ethanol extract from S. comosa in rats are confirmed preliminarily after intragastric administration, which lay a foundation for further metabolism study in vivo.

    KEYWORDS Scabiosa comosa; Serum pharmacochemistry; UPLC-MS/MS; Constituents absorbed into the blood; Rats

    藍(lán)盆花的蒙藥名為“陶森-陶日莫”,又稱蒙古山蘿卜,是來源于川續(xù)斷科(Dipsacaceae)植物窄葉藍(lán)盆花(Scabiosa comosa Fisch. ex Roem.et Schult)和華北藍(lán)盆花(Scabiosa tschiliensis Grunning)的干燥花序,為蒙藥專用品種之一[1]。該藥具有清熱、清“協(xié)日”之功效,蒙醫(yī)臨床用于治療肝火頭痛、發(fā)燒、肺熱咳嗽、黃疸等病,可單用也可配方使用[2]。目前,從藍(lán)盆花的花序中分離鑒定了37個化學(xué)成分[3-7],其中本課題組共分離得到22個化合物[8],并建立了該藥材的特征圖譜及7個成分的含量測定方法[9],總結(jié)發(fā)現(xiàn)主要含有黃酮類(木犀草素與芹菜素及其氧苷類)、苯丙酸類(綠原酸及異綠原酸類)與環(huán)烯醚萜類(馬錢素、獐牙菜苷等)化合物,這3類成分是蒙藥藍(lán)盆花及其同屬植物中含有的主要化學(xué)成分類型,且具有較強(qiáng)的藥理活性[10-11]。但該藥化學(xué)成分在體內(nèi)的變化尚不明確,導(dǎo)致該藥的有效成分模糊不清,質(zhì)量控制難以把握。鑒于此,本課題組利用血清藥物化學(xué)方法[12],對藍(lán)盆花提取物灌胃后大鼠血中移行成分進(jìn)行初步研究,為其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的進(jìn)一步研究開發(fā)提供依據(jù)。

    1 材料

    1.1 儀器

    Dionex UltiMate 3000快速超高效液相色譜儀(包括雙三元梯度泵、自動進(jìn)樣器、在線脫氣機(jī)、柱溫箱、進(jìn)樣恒溫箱)、Q-Exactive組合型四級桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜儀(包括電噴霧離子源、Analyst QS2.0數(shù)據(jù)處理系統(tǒng))均購自美國Thermo Fisher公司;TDZ5-WS臺式低速離心機(jī)(湖南赫西儀器裝備有限公司);MX-S旋渦混合器(美國Scilogex公司);HX-2D 氮氣吹干儀(恒信科技有限公司);3-18K高速溫控離心機(jī)(德國Sigma公司)。

    1.2 藥品與試劑

    藍(lán)盆花藥材購自安國路通中藥飲片有限公司(批號:150301),由內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院喬俊纏教授鑒定為華北藍(lán)盆花(Scabiosa tschilliensis Grunning)的干燥花序;奎寧酸 (批號:SH17071211)、綠原酸 (批號:SH17050201)、秦皮乙素(批號:SH17053218)、咖啡酸 (批號:SH17051207)、木犀草苷 (批號:SH16070401)、野漆樹苷 (批號:SH0977)、異綠原酸B (批號:wkq16040902)、異綠原酸A (批號:SH17092212)、大波斯菊苷(批號:SH17102501)、異綠原酸C(批號:SH17120111)、木犀草素(批號:SH16041006)、芹菜素(批號:SH17032405)、香葉木素(批號:wkq16080501)對照品均購自北京賽百草科技有限公司,純度:均≥98%;異葒草素對照品(本實驗室自制,批號:20160018,純度:≥98%);乙腈、甲醇為色譜純,甲酸、乙醚等試劑為分析純,水為娃哈哈純凈水。

    1.3 動物

    SPF級健康Wistar大鼠10只,♂,體質(zhì)量(200±20)g,購自內(nèi)蒙古大學(xué)實驗動物研究中心,實驗動物生產(chǎn)許可證號:SCXK(蒙)2016-001。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 藍(lán)盆花藥液的制備

    取蒙藥藍(lán)盆花藥材500 g,以12倍量70%乙醇加熱回流提取3次,每次2.5 h,合并3次濾液,減壓濃縮至無醇味,進(jìn)行冷凍干燥,得藍(lán)盆花凍干粉。用0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液溶解凍干粉,制成0.05 g/mL(相當(dāng)于藍(lán)盆花生藥量0.15 g)的灌胃藥液,放入4 ℃冰箱中保存,使用前超聲(功率250 W,頻率40 kHz)30 min混合均勻,即得。

    2.2 空白血清和含藥血清的制備及處理

    2.2.1 血清樣品的制備 取Wistar大鼠10只,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)分成空白組和給藥組,每組5只。給藥前12 h禁食、自由飲水,給藥組大鼠灌胃“2.1”項下藥液,空白組大鼠灌胃0.5% CMC-Na溶液,給藥量均為2 mL/100 g(相當(dāng)于人臨床等效劑量的10倍),連續(xù)給藥3 d,早、晚8:00各給藥1次。末次給藥30 min后,乙醚麻醉,肝門靜脈取血,靜置1 h,然后在室溫條件下以3 500 r/min離心15 min,收集血清,將同組大鼠血清混合,即得到空白血清和含藥血清樣品。

    2.2.2 血清樣品的處理 取1 mL血清樣品,置于具塞離心管中,加入3倍量乙腈,搖勻,在20 ℃下以14 360×g離心15 min;取上清液,在37 ℃下氮氣吹干,再用100 μL的60%甲醇復(fù)溶,再次在20 ℃下以14 360×g離心10 min,取上清液,即得到空白血清和含藥血清的分析樣品。

    2.3 分析條件

    2.3.1 色譜條件 色譜柱:COSMOSIL C18(250 mm×4.6 mm,4.6 ?m);流動相:乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B);梯度洗脫(0~15 min,5%→15%A;15~20 min,15%→18%A;20~25 min,18%→20%A;25~50 min,20%→28%A;50~60 min,28%→30%A;60~70 min,30%→80%A;70~80 min,80%A);柱溫:20 ℃;流速:0.8 mL/min;進(jìn)樣量:10 ?L。

    2.3.2 質(zhì)譜條件 電噴霧離子化源,溫度:400 ℃;鞘氣:45 arb,輔助氣:2 arb;毛細(xì)管電壓:3.5 kV;離子傳輸管溫度:150 ℃;掃描模式:全離子監(jiān)測模式,采集范圍:100~1 250 Da,負(fù)離子采集;一級質(zhì)譜分辨率:70 000,二級質(zhì)譜分辨率:17 500。

    2.4 蒙藥藍(lán)盆花血中移行成分鑒定

    2.4.1 原型成分鑒定 取“2.2”項下含藥血清樣品和空白血清樣品;取“2.1”項下凍干粉,60%甲醇溶解,0.45 μm微孔濾膜濾過,取連續(xù)濾液,即得原藥材樣品。同時將已有的對照品分別溶解(60%甲醇),得混合對照品溶液Ⅰ(含奎寧酸、綠原酸、咖啡酸、異葒草素、野漆樹苷、異綠原酸B、大波斯菊苷和木犀草素)、混合對照品Ⅱ(含秦皮乙素、木犀草苷、芹菜素、香葉木素)和混合對照品Ⅲ(含異綠原酸A和異綠原酸C)。將上述溶液均按“2.3”項下分析條件分別進(jìn)樣,記錄圖譜。根據(jù)藍(lán)盆花藥材樣品、含藥血清樣品及對照品圖譜情況,使用精確相對分子質(zhì)量與分子碎片峰尋找,并結(jié)合相對色譜保留時間與質(zhì)譜二級碎片信息進(jìn)行指認(rèn),無對照品的原型成分通過與文獻(xiàn)報道的質(zhì)譜二級碎片信息進(jìn)行比對指認(rèn)。結(jié)果,最終共鑒定出17個原型成分,分別為奎寧酸(1)、綠原酸(2)、秦皮乙素(3)、咖啡酸(4)、異葒草素(5)、木犀草苷(6)、野漆樹苷(7)、異綠原酸B(8)、異綠原酸A(9)、大波斯菊苷(10)、木犀草-4′ -糖苷(11)、異綠原酸C(12)、對羥基苯甲酸(13)、木犀草素(14)、芹菜素(15)、香葉木素(16)、熊果酸(17),其中編號為11、13、17的原型成分是根據(jù)文獻(xiàn)[7,13-14]推斷鑒定的,其余均是由對照品對照鑒定。通過分析發(fā)現(xiàn),藍(lán)盆花含藥血清中主要含有以芹菜素、木犀草素及其氧苷為主的黃酮類化合物,以及咖啡酸、綠原酸及其相似結(jié)構(gòu)化合物為代表的苯丙酸類化合物??傠x子流圖見圖1,化合物信息見表1。

    2.4.2 代謝途徑及代謝產(chǎn)物推斷 對于圖中其余未知峰,筆者通過查閱相關(guān)的代謝產(chǎn)物、代謝途徑與質(zhì)譜裂解規(guī)律,共推斷出了22個代謝產(chǎn)物(M1~M22),詳見表2。

    具體推斷過程如下:

    (1)黃酮類化學(xué)成分。黃酮類化合物經(jīng)灌胃給藥后,多在肝及腸、胃代謝,再經(jīng)腸、胃吸收,產(chǎn)生代謝產(chǎn)物,其苷類多被水解,以苷元的形式發(fā)生轉(zhuǎn)化。有學(xué)者[15-16]將木犀草素與木犀草苷灌胃大鼠,收集各時間點內(nèi)的血漿、尿液、糞便,總結(jié)出木犀草素在大鼠體內(nèi)多發(fā)生氧化、甲基化、葡萄糖醛酸化反應(yīng)等,而木犀草苷在腸道中被水解為苷元后,發(fā)生以上反應(yīng)。芹菜素在體內(nèi)多產(chǎn)生2、3位雙鍵還原反應(yīng),以硫酸酯、葡萄糖醛酸的形式排出體外,其裂解規(guī)律為A環(huán)掉一個或多個—CO2等[17]。通過以上總結(jié)與二級質(zhì)譜信息對比,推測木犀草素和芹菜素主要是以甲基化反應(yīng)、硫酸化反應(yīng)、葡萄糖醛酸化反應(yīng)及復(fù)合反應(yīng)進(jìn)行代謝,其代謝途徑見圖2。

    (2)苯丙酸類成分。苯丙酸類成分中咖啡酸的代謝產(chǎn)物多為甲基化、葡萄糖醛酸化、硫酸化及其結(jié)合型產(chǎn)物[19];綠原酸的代謝途徑以水解、甲基化、還原及結(jié)合反應(yīng)為主,且在體內(nèi)多代謝成咖啡酸、奎寧酸、阿魏酸及異阿魏酸等[19-20];異綠原酸類的代謝多分成三步,即首先水解生成單咖啡??鼘幩犷?,后續(xù)代謝途徑與綠原酸和咖啡酸途徑相同[21-23]。通過以上總結(jié)與二級質(zhì)譜信息對比,推測主要的苯丙酸類化合物綠原酸和咖啡酸的代謝途徑如圖3所示,主要是以水解與還原反應(yīng)、甲基化反應(yīng)、硫酸化反應(yīng)及復(fù)合反應(yīng)方式進(jìn)行代謝。

    3 討論

    在本研究中,共發(fā)現(xiàn)灌胃給藥藍(lán)盆花39個血中移行成分,其中黃酮類與苯丙酸類化學(xué)成分體內(nèi)吸收入血較多,且黃酮苷類化學(xué)成分多代謝成苷元形式吸收入血,代謝較快;苯丙酸類化學(xué)成分在體內(nèi)多代謝成咖啡酸及其代謝產(chǎn)物后吸收入血,綠原酸在體內(nèi)可發(fā)生酯基位置異構(gòu),其代謝產(chǎn)物多出現(xiàn)同分異構(gòu)現(xiàn)象,通過二級質(zhì)譜信息只能推斷,不能詳細(xì)鑒定。從各一級質(zhì)譜圖對比觀察,含藥血清藥品中木犀草素、芹菜素含量明顯高于其他成分,其次為香木葉素、秦皮乙素、咖啡酸、對羥基苯甲酸,均為藍(lán)盆花在大鼠體內(nèi)的主要血中移行成分。萜類化合物及環(huán)烯醚萜類化合物在血中移行成分中尚未發(fā)現(xiàn),推測該類化合物可能因為含量低或代謝物少檢測不到,故有待深入研究。本次研究對藍(lán)盆花大鼠體內(nèi)血中移行成分進(jìn)行了初步探討,可為該藥材的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)篩選提供依據(jù),為該藥的深層次開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

    參考文獻(xiàn)

    [ 1 ] 衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(蒙藥分冊)[S]. 1998:52.

    [ 2 ] 國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會.中華本草·蒙藥卷[M].上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,2004:385.

    [ 3 ] 王國英,薛培鳳.蒙藥藍(lán)盆花及其同屬植物的研究進(jìn)展[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2009,31(5):487-490.

    [ 4 ] 王乃利,白玉霞,樊崢嶸,等.蒙古山蘿卜活性成分的研究[J].中草藥,1989,20(6):247-249.

    [ 5 ] 冀敏,李淑娟,馬超美.窄葉藍(lán)盆花化學(xué)化學(xué)成分及其抗氧化和抑制α-葡糖糖苷酶活性的研究[J].內(nèi)蒙古大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2014,45(4):398-403.

    [ 6 ] ZHENG Q,KOIKE K,HAN LK,et al. New biologically active triterpenoid saponins from Scabiosa tschiliensis[J]. J Nat Prod,2004,67(4):604-613.

    [ 7 ] 麻劍南.蘋果梨果皮和藍(lán)盆花的化學(xué)成分及生物活性研究[D].呼和浩特:內(nèi)蒙古大學(xué),2015.

    [ 8 ] 王國英,趙子龍,薛培鳳,等.華北藍(lán)盆花化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志,2015,40(5):807-813.

    [ 9 ] 馬飛祥,趙子龍,薛培鳳,等.蒙藥藍(lán)盆花HPLC特征圖譜及7種成分的含量測定[J].中藥材,2018,41(3):644- 649.

    [10] 薛長松,徐晶,李萃萍,等.環(huán)烯醚萜苷類化合物體內(nèi)代謝及代謝物藥理活性研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志,2018,43(1):39-45.

    [11] 徐暉,麥嘉妮,梁潔,等.黃酮類化合物的譜效關(guān)系研究進(jìn)展[J].中國藥房,2017,28(27):3882-3885.

    [12] 馬飛祥,薛培鳳,王媛媛,等.中藥血清藥物化學(xué)研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志,2017,42(7):1265-1270.

    [13] 于倩,王曉波,楊媛媛.返魂草顆粒中2種成分在大鼠血漿中的藥代動力學(xué)行為[J].中成藥,2016,38(7):1481- 1484.

    [14] 楊曉靜,陳麗娜,秦瑤,等. UPLC-MS/MS法測定中藥材中齊墩果酸與熊果酸的含量[J].分析測試學(xué)報,2016,35(6):753-757.

    [15] 李軍茂,何明珍,馮育林,等.木犀草素及木犀草苷在大鼠體內(nèi)的代謝研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2017,28(1):61-68.

    [16] 歐陽輝,黎田兒,何明珍,等.超高效液相色譜與飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)鑒定蒙藥藍(lán)盆花在大鼠體內(nèi)效應(yīng)成分及其代謝物[J].中國藥學(xué)雜志,2016,51(14):1197-1203.

    [17] 張亞洲,王濤,鄒樹良,等.芹菜素在大鼠體內(nèi)代謝產(chǎn)物的鑒定與分析[J].中國藥房,2016,27(4):479-482.

    [18] 謝岑,鐘大放,陳笑艷.鑒定大鼠注射綠原酸后體內(nèi)的代謝產(chǎn)物[J].藥學(xué)學(xué)報,2011,46(1):88-95.

    [19] 蘇美英,周婷婷,周茂金. LC/MSn鑒定咖啡酸在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2009,26(6):501-505.

    [20] 黃月,武曉,薄云海,等.基于RP-UPLC-MS和HILIC- UPLC-MS的骨疏丹對糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松型大鼠干預(yù)作用的尿液代謝組學(xué)研究[J].中國藥學(xué)雜志,2016,51(23):2045-2052.

    [21] 李云.基于LC-HR-MSn的小兒清解顆粒成分分析與體內(nèi)代謝研究[D].北京:北京中醫(yī)藥大學(xué),2016.

    [22] 劉江林,袁丹,丁建剛,等.液相色譜-電噴霧離子阱質(zhì)譜法研究人尿中1,5-二咖啡酰奎寧酸的代謝產(chǎn)物[J].中國臨床藥理雜志,2010,26(3):217-220.

    [23] 楊波. 1,5-二咖啡釀奎寧酸的體內(nèi)外代謝及藥代動力學(xué)研究[D].沈陽:沈陽藥科大學(xué),2005.

    (收稿日期:2018-01-23 修回日期:2018-09-11)

    (編輯:林 靜)

    猜你喜歡
    串聯(lián)質(zhì)譜法超高效液相色譜
    UPLC—MS/MS法測定雞蛋、雞肉中4種氟喹諾酮類藥物殘留
    水產(chǎn)品中呋喃唑酮代謝物檢測結(jié)果不確定度的評定
    超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定豬尿液中30種不同種類“瘦肉精”藥物殘留
    氣相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測定玩具產(chǎn)品中5種有機(jī)磷阻燃劑
    中國纖檢(2016年12期)2017-01-20 09:28:19
    高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測定益母草顆粒中鹽酸水蘇堿的含量
    醋酸艾司利卡西平片在比格犬體內(nèi)的相對生物利用度
    UPLC—MS/MS法同時測定葡萄中4種植物生長調(diào)節(jié)劑研究
    超高效液相色譜 串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞皮及脂肪組織中抗球蟲類藥物殘留
    食品罐內(nèi)壁涂料中雙酚 二縮水甘油醚的快速檢測和遷移規(guī)律
    超高效液相色譜 三重四極桿/復(fù)合線性離子阱質(zhì)譜測定水樣中三苯甲烷類及代謝物
    国产成人免费无遮挡视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲全国av大片| 最好的美女福利视频网| avwww免费| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| av超薄肉色丝袜交足视频| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲欧美激情在线| 精品卡一卡二卡四卡免费| 可以在线观看毛片的网站| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 少妇粗大呻吟视频| 91字幕亚洲| 国产又爽黄色视频| 久久99一区二区三区| 极品人妻少妇av视频| 精品国内亚洲2022精品成人| 日韩免费av在线播放| 99国产精品99久久久久| 91老司机精品| 免费在线观看亚洲国产| 99久久人妻综合| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 国产男靠女视频免费网站| 欧美一区二区精品小视频在线| 免费av毛片视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产亚洲欧美98| 亚洲国产欧美网| 亚洲专区中文字幕在线| 俄罗斯特黄特色一大片| 免费不卡黄色视频| 一本大道久久a久久精品| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 99精国产麻豆久久婷婷| 少妇的丰满在线观看| netflix在线观看网站| 18禁观看日本| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美色视频一区免费| 黑人猛操日本美女一级片| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久午夜综合久久蜜桃| 欧美乱色亚洲激情| 高清欧美精品videossex| 精品国产亚洲在线| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 村上凉子中文字幕在线| 欧美在线黄色| 99精品欧美一区二区三区四区| 88av欧美| 黑丝袜美女国产一区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 亚洲五月婷婷丁香| 国产欧美日韩一区二区精品| 精品熟女少妇八av免费久了| а√天堂www在线а√下载| 黑丝袜美女国产一区| 女警被强在线播放| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲av电影在线进入| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 99国产精品免费福利视频| 成年人黄色毛片网站| 黄片播放在线免费| 男人舔女人的私密视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 好男人电影高清在线观看| 久久久国产精品麻豆| 精品久久久久久电影网| 在线观看舔阴道视频| 新久久久久国产一级毛片| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 80岁老熟妇乱子伦牲交| 欧美成狂野欧美在线观看| 黄片播放在线免费| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 一级片'在线观看视频| a级毛片黄视频| 国产主播在线观看一区二区| 日韩高清综合在线| 桃色一区二区三区在线观看| 在线av久久热| xxx96com| 香蕉久久夜色| 欧美人与性动交α欧美软件| 不卡av一区二区三区| 国产乱人伦免费视频| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲专区中文字幕在线| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产精品影院久久| 涩涩av久久男人的天堂| 国产一卡二卡三卡精品| av福利片在线| netflix在线观看网站| 久久国产乱子伦精品免费另类| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产主播在线观看一区二区| av超薄肉色丝袜交足视频| 亚洲人成电影观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 夜夜夜夜夜久久久久| 国产片内射在线| 色播在线永久视频| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美黑人精品巨大| 国产成人精品在线电影| 国产激情久久老熟女| 午夜两性在线视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲自拍偷在线| 嫩草影院精品99| 免费看十八禁软件| 免费在线观看日本一区| 嫩草影视91久久| 欧美激情高清一区二区三区| 伦理电影免费视频| 丝袜在线中文字幕| 香蕉丝袜av| 国产亚洲欧美精品永久| 悠悠久久av| 久久久久久大精品| 国产成人啪精品午夜网站| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产精品一区二区三区四区久久 | a级片在线免费高清观看视频| 久9热在线精品视频| 亚洲国产欧美网| 啦啦啦免费观看视频1| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲av成人一区二区三| 国产欧美日韩一区二区三| 久久午夜亚洲精品久久| 老司机亚洲免费影院| 精品人妻在线不人妻| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 中文字幕av电影在线播放| 日本五十路高清| 18禁美女被吸乳视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 成人av一区二区三区在线看| 满18在线观看网站| 国产成人av激情在线播放| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 视频在线观看一区二区三区| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲片人在线观看| 女警被强在线播放| 麻豆成人av在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 欧美日韩福利视频一区二区| 超碰成人久久| 国产一区二区三区综合在线观看| 校园春色视频在线观看| 18禁观看日本| 99riav亚洲国产免费| 窝窝影院91人妻| 亚洲美女黄片视频| 国产精品成人在线| 99国产精品一区二区三区| 国产免费av片在线观看野外av| 成人黄色视频免费在线看| 色播在线永久视频| 免费在线观看完整版高清| 精品国产一区二区久久| 一二三四在线观看免费中文在| www.999成人在线观看| e午夜精品久久久久久久| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 一二三四社区在线视频社区8| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲国产精品合色在线| 99热只有精品国产| 99久久综合精品五月天人人| 12—13女人毛片做爰片一| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 多毛熟女@视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 满18在线观看网站| 99国产精品99久久久久| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久久久九九精品影院| 欧美乱色亚洲激情| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲欧美精品综合久久99| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产伦人伦偷精品视频| 啦啦啦在线免费观看视频4| 国产精品久久久av美女十八| 制服诱惑二区| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 一二三四社区在线视频社区8| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 黄片小视频在线播放| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 日韩免费av在线播放| 国产成人精品在线电影| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲国产欧美网| 丰满饥渴人妻一区二区三| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 日韩欧美在线二视频| 岛国在线观看网站| 久久亚洲精品不卡| 亚洲av熟女| 欧美另类亚洲清纯唯美| 又黄又粗又硬又大视频| 美女大奶头视频| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 午夜91福利影院| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲男人天堂网一区| 欧美乱妇无乱码| 一级毛片女人18水好多| 精品电影一区二区在线| 88av欧美| 嫁个100分男人电影在线观看| 夫妻午夜视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 亚洲成人久久性| av在线播放免费不卡| 叶爱在线成人免费视频播放| 日韩有码中文字幕| 看黄色毛片网站| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产一区二区在线av高清观看| 国产色视频综合| 天堂影院成人在线观看| 手机成人av网站| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日韩人妻精品一区2区三区| 精品久久久久久成人av| 久久精品91蜜桃| 99在线人妻在线中文字幕| 女人精品久久久久毛片| 好男人电影高清在线观看| 久久久久国内视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产黄a三级三级三级人| 精品久久久久久成人av| 天天影视国产精品| 国产区一区二久久| 韩国精品一区二区三区| 麻豆国产av国片精品| 高清毛片免费观看视频网站 | 久久人人精品亚洲av| 国产精华一区二区三区| 高清欧美精品videossex| 成年人免费黄色播放视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 免费看a级黄色片| 香蕉国产在线看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 丝袜美腿诱惑在线| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产一卡二卡三卡精品| 午夜成年电影在线免费观看| 日本欧美视频一区| 国产单亲对白刺激| av天堂在线播放| 欧美色视频一区免费| 少妇 在线观看| 91av网站免费观看| 成人精品一区二区免费| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产成人av激情在线播放| 精品人妻在线不人妻| 欧美中文日本在线观看视频| 国产三级在线视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 老司机靠b影院| av超薄肉色丝袜交足视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 我的亚洲天堂| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 久热这里只有精品99| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 在线十欧美十亚洲十日本专区| 视频区欧美日本亚洲| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 成年女人毛片免费观看观看9| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| bbb黄色大片| 在线观看www视频免费| 夜夜爽天天搞| 美女国产高潮福利片在线看| 久久久久久久精品吃奶| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 国产片内射在线| 99re在线观看精品视频| 最新在线观看一区二区三区| 日韩精品青青久久久久久| 欧美色视频一区免费| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 高清黄色对白视频在线免费看| 搡老熟女国产l中国老女人| 在线天堂中文资源库| 9色porny在线观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 午夜免费鲁丝| 日韩欧美三级三区| 国产在线精品亚洲第一网站| 精品乱码久久久久久99久播| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲,欧美精品.| 午夜成年电影在线免费观看| 两个人免费观看高清视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 九色亚洲精品在线播放| 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 大型av网站在线播放| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 90打野战视频偷拍视频| 精品高清国产在线一区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | av网站在线播放免费| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲成a人片在线一区二区| 97碰自拍视频| 日韩有码中文字幕| 韩国精品一区二区三区| 99久久国产精品久久久| www.自偷自拍.com| 免费不卡黄色视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 色综合欧美亚洲国产小说| 最好的美女福利视频网| 最新在线观看一区二区三区| 国产在线观看jvid| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 欧美中文综合在线视频| av视频免费观看在线观看| 高清av免费在线| 久久狼人影院| 国产av一区在线观看免费| 一区福利在线观看| www.熟女人妻精品国产| a级片在线免费高清观看视频| 天堂影院成人在线观看| 深夜精品福利| xxxhd国产人妻xxx| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产av一区二区精品久久| 亚洲男人的天堂狠狠| 精品国产一区二区三区四区第35| 午夜成年电影在线免费观看| 国产欧美日韩一区二区三| 黄色丝袜av网址大全| 在线永久观看黄色视频| 成人18禁在线播放| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲在线自拍视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 成人精品一区二区免费| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲午夜理论影院| 欧美日韩乱码在线| 9热在线视频观看99| 69av精品久久久久久| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 丰满饥渴人妻一区二区三| 欧美乱妇无乱码| 丝袜在线中文字幕| 精品无人区乱码1区二区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产精品亚洲av一区麻豆| 久久国产乱子伦精品免费另类| 中文字幕色久视频| 精品人妻在线不人妻| 在线播放国产精品三级| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 真人做人爱边吃奶动态| 中文字幕人妻丝袜制服| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲人成电影观看| 午夜视频精品福利| 久久这里只有精品19| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产亚洲欧美精品永久| 1024香蕉在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 国产亚洲欧美98| 亚洲欧美日韩无卡精品| 多毛熟女@视频| a级片在线免费高清观看视频| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 欧美激情极品国产一区二区三区| 午夜91福利影院| 天堂中文最新版在线下载| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 超色免费av| 悠悠久久av| 人人妻人人澡人人看| 国产三级在线视频| 欧美中文综合在线视频| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲 欧美一区二区三区| 午夜福利免费观看在线| 在线十欧美十亚洲十日本专区| av网站免费在线观看视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 桃红色精品国产亚洲av| 男人舔女人的私密视频| 中文字幕色久视频| 日本wwww免费看| 欧美一区二区精品小视频在线| 精品久久久久久电影网| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 在线免费观看的www视频| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 一本综合久久免费| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲成人久久性| 免费在线观看亚洲国产| 男人舔女人下体高潮全视频| 91大片在线观看| 黄色视频不卡| 国产精品久久久久成人av| 夜夜爽天天搞| 老司机靠b影院| 亚洲人成伊人成综合网2020| 男人舔女人下体高潮全视频| 精品久久久久久久久久免费视频 | 法律面前人人平等表现在哪些方面| 午夜免费观看网址| 91精品国产国语对白视频| 欧美激情高清一区二区三区| 在线观看66精品国产| 久久性视频一级片| 嫩草影视91久久| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产精品国产av在线观看| 亚洲在线自拍视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 老司机在亚洲福利影院| 久久午夜亚洲精品久久| 男女午夜视频在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美乱码精品一区二区三区| 一级,二级,三级黄色视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 十分钟在线观看高清视频www| av欧美777| 我的亚洲天堂| 香蕉丝袜av| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 免费一级毛片在线播放高清视频 | 成熟少妇高潮喷水视频| 国产精品免费一区二区三区在线| 久久久久久久久中文| 在线看a的网站| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 欧美日韩福利视频一区二区| 在线视频色国产色| 最近最新中文字幕大全电影3 | 新久久久久国产一级毛片| 亚洲男人的天堂狠狠| 天堂动漫精品| 高清欧美精品videossex| 日韩高清综合在线| 嫩草影视91久久| 国产亚洲欧美精品永久| 国产欧美日韩精品亚洲av| 韩国av一区二区三区四区| av超薄肉色丝袜交足视频| 少妇粗大呻吟视频| 精品日产1卡2卡| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久精品国产综合久久久| 久久亚洲真实| 亚洲全国av大片| 成人亚洲精品av一区二区 | 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 中亚洲国语对白在线视频| 悠悠久久av| 久久草成人影院| 亚洲精品一二三| 亚洲av片天天在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 精品久久蜜臀av无| 91精品三级在线观看| 国产成人精品久久二区二区免费| 一级片免费观看大全| 三上悠亚av全集在线观看| av网站在线播放免费| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 亚洲一区二区三区欧美精品| 日韩精品青青久久久久久| www.精华液| 国产三级黄色录像| 老司机在亚洲福利影院| 黄色片一级片一级黄色片| 在线观看免费视频网站a站| 日日爽夜夜爽网站| 啪啪无遮挡十八禁网站| 好男人电影高清在线观看| www.精华液| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲av五月六月丁香网| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 日韩欧美一区视频在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 人妻久久中文字幕网| 国产成年人精品一区二区 | 久久性视频一级片| 精品久久久久久,| 亚洲情色 制服丝袜| 午夜亚洲福利在线播放| 久久婷婷成人综合色麻豆| 91麻豆av在线| 国产午夜精品久久久久久| 欧美日韩av久久| 国产欧美日韩综合在线一区二区| av在线播放免费不卡| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 国产人伦9x9x在线观看| 叶爱在线成人免费视频播放| 动漫黄色视频在线观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产精品一区二区三区四区久久 | www.精华液| 久久久国产精品麻豆| 又紧又爽又黄一区二区| 国产97色在线日韩免费| www.999成人在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 成人黄色视频免费在线看| 午夜福利欧美成人| 真人做人爱边吃奶动态| 这个男人来自地球电影免费观看| 村上凉子中文字幕在线| 精品国产乱子伦一区二区三区| 日本a在线网址| 99久久久亚洲精品蜜臀av| av网站在线播放免费| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 国产熟女xx| 在线观看免费日韩欧美大片| 天天影视国产精品| 丁香六月欧美| 视频在线观看一区二区三区| 精品久久久久久,| 精品国内亚洲2022精品成人| 老鸭窝网址在线观看| www.自偷自拍.com| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 99国产综合亚洲精品| 动漫黄色视频在线观看| 成人三级做爰电影| 久久香蕉国产精品| 女同久久另类99精品国产91| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 欧美精品啪啪一区二区三区| bbb黄色大片| 18禁国产床啪视频网站| 99国产精品一区二区三区| 日韩有码中文字幕| 欧美午夜高清在线| 日韩国内少妇激情av| 69精品国产乱码久久久| 少妇被粗大的猛进出69影院| 韩国av一区二区三区四区| 后天国语完整版免费观看| 精品国产一区二区三区四区第35| 看黄色毛片网站| 青草久久国产| 日韩精品免费视频一区二区三区| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品偷伦视频观看了| 久久狼人影院| 91九色精品人成在线观看| 久9热在线精品视频| 黄色女人牲交| 国产精品久久久久成人av| 99热国产这里只有精品6| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 色老头精品视频在线观看| 极品人妻少妇av视频| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 无人区码免费观看不卡| 欧美黑人欧美精品刺激|