• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    甜瓜尾孢葉斑病病原分離與鑒定

    2018-09-10 22:48:56葉云峰杜嬋娟覃斯華柳唐鏡洪日新付崗李桂芬黃金艷
    關(guān)鍵詞:葉斑病甜瓜

    葉云峰 杜嬋娟 覃斯華 柳唐鏡 洪日新 付崗 李桂芬 黃金艷

    摘要:[目的]明確近年來(lái)引起廣西大棚厚皮甜瓜葉斑病的病原,為該病害的有效防治提供參考依據(jù)。[方法]采用單孢分離法直接從罹病厚皮甜瓜葉片上分離病原菌,以離體葉片接種法驗(yàn)證病原菌的致病性。對(duì)致病菌的菌落、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)、分生孢子等形態(tài)特征進(jìn)行觀察,同時(shí)對(duì)致病菌的rDNA-ITS基因序列進(jìn)行同源性比對(duì)分析。[結(jié)果]病原菌形態(tài)特征與瓜類尾孢(Cercospora citrullina)基本一致,rDNA-ITS基因序列與瓜類尾孢的同源性達(dá)99%。結(jié)合病原菌的形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)特征,將該病害的病原菌鑒定為瓜類尾孢。[結(jié)論]近年在廣西大棚厚皮甜瓜產(chǎn)區(qū)嚴(yán)重發(fā)生的甜瓜葉斑病由瓜類尾孢引起,該病是廣西厚皮甜瓜上的一種新病害。

    關(guān)鍵詞:甜瓜;葉斑??;病原鑒定;瓜類尾孢

    中圖分類號(hào):S436.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A 文章編號(hào):2095-1191(2018)03-0476-05

    0引言

    [研究意義]甜瓜是葫蘆科黃瓜屬(CucumisLinn.)一年生蔓生草本植物,分為薄皮甜瓜和厚皮甜瓜兩大類型。厚皮甜瓜(包括哈密瓜、白蘭瓜和粗皮甜瓜等)原產(chǎn)非洲和亞洲熱帶地區(qū),我國(guó)新疆為厚皮甜瓜次生起源中心之一。廣西引進(jìn)厚皮甜瓜種植始于20世紀(jì)90年代中期,并于1998年開(kāi)始通過(guò)改用大棚保護(hù)地避雨栽培試種獲得成功,2003年后種植面積迅速擴(kuò)大,常年種植總面積約4000 ha,種植甜瓜已成為廣西部分瓜農(nóng)脫貧致富的重要途徑。由于廣西的氣候高溫多雨,大棚內(nèi)濕度大,加上大棚栽培難以實(shí)施輪作,致使大棚甜瓜生產(chǎn)受到多種病害的威脅。本課題組于2015-2016年在廣西南寧、北海和欽州等厚皮甜瓜主產(chǎn)區(qū)開(kāi)展甜瓜病害種類調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)一種葉部新病害,該病害侵染北甜一號(hào)、好運(yùn)11號(hào)和新金鳳凰等厚皮甜瓜品種,其癥狀與以往發(fā)生的甜瓜葉部病害癥狀存在明顯差異,主要表現(xiàn)為在葉片上形成近圓形或倒“V”字形褐色大型病斑。該病在春茬甜瓜上的發(fā)病率為30%~50%,在秋茬甜瓜上發(fā)生更嚴(yán)重,多數(shù)大棚發(fā)病率在80%~22z,嚴(yán)重的發(fā)病率達(dá)100%,成為2015~2016年廣西大棚甜瓜最嚴(yán)重的葉部病害之一。該病主要造成甜瓜葉片大面積枯死,植株早衰,嚴(yán)重影響果實(shí)后期的營(yíng)養(yǎng)吸收,降低果實(shí)品質(zhì)和產(chǎn)量,造成20%~40%的經(jīng)濟(jì)損失。目前該病病原菌的分類地位尚不明確,因此,開(kāi)展該病原的鑒定研究,對(duì)有效防治該病害具有重要的指導(dǎo)意義。[前人研究進(jìn)展]在我國(guó)南方地區(qū)大棚甜瓜上常發(fā)生的病害主要有霜霉病、白粉病、蔓枯病、病毒病、枯萎病、炭疽病、猝倒病和根結(jié)線蟲(chóng)病等(何毅等,2005;周靈芝等,2006)。經(jīng)比對(duì),本課題組調(diào)查發(fā)現(xiàn)的甜瓜葉部新病害癥狀與上述常見(jiàn)病害的葉部癥狀存在明顯差異,關(guān)于這種新病害目前未見(jiàn)相關(guān)研究報(bào)道。此外,前人對(duì)植物病害的鑒定通常采用病原菌形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)相結(jié)合的方法,該方法能將病原菌鑒定到種的水平(王爽等,2013;冉雙飛等,2016;趙楊等,2016;歐陽(yáng)秋飛等,2017)。[本研究切入點(diǎn)]對(duì)于一種新發(fā)生的病害,準(zhǔn)確鑒定其病原菌是進(jìn)行有效防治的基本前提。目前對(duì)近年來(lái)廣西大棚甜瓜葉片上發(fā)生的新病害尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。[擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題]采用單孢分離法對(duì)厚皮甜瓜上新發(fā)生的葉部病害進(jìn)行病原菌分離,用離體葉片接種法進(jìn)行致病性測(cè)定,同時(shí)對(duì)病原菌的形態(tài)特征進(jìn)行顯微觀察,并對(duì)其rDNA-ITS基因序列進(jìn)行同源性比對(duì)分析,結(jié)合病原菌的形態(tài)學(xué)特征和分子生物學(xué)分析結(jié)果進(jìn)行鑒定,以明確該病原菌的分類地位,為該病害的有效防治提供參考依據(jù)。

    1材料與方法

    1.1試驗(yàn)材料

    病原菌分離和接種均采用厚皮甜瓜品種好運(yùn)11號(hào),種植于廣西南寧市武鳴區(qū)鑼圩鎮(zhèn)武帽農(nóng)場(chǎng)。病原菌分離采用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基(PDA)。

    1.2病害癥狀觀察

    2015年8月~2016年12月,在南寧市武鳴區(qū)、青秀區(qū)和北海市銀海區(qū)等厚皮甜瓜主產(chǎn)區(qū),于不同發(fā)病時(shí)期對(duì)厚皮甜瓜葉斑病進(jìn)行癥狀觀察、記錄和拍照。

    1.3病原菌鑒定

    1.3.1病原菌分離 從南寧市武鳴區(qū)鑼圩鎮(zhèn)武帽農(nóng)場(chǎng)5個(gè)大棚采集新鮮病葉各1張,分別用滅菌水沖洗表面,置于28℃下保濕2 d,在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行病原菌單孢分離。用沾了無(wú)菌水的滅菌接種環(huán)粘取病斑處的分生孢子,在水瓊脂塊表面劃線,置顯微鏡下觀察,挑取單孢子移入另一塊水瓊脂塊表面,再次用顯微鏡觀察,確認(rèn)第2塊水瓊脂塊上只含有1個(gè)分生孢子,將第2塊水瓊脂塊移到PDA培養(yǎng)基上,28℃下黑暗培養(yǎng)10 d,挑取菌落邊緣的菌絲塊轉(zhuǎn)接至PDA斜面培養(yǎng)基上,培養(yǎng)10 d后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.2病原菌致病性測(cè)定 從生長(zhǎng)健壯的甜瓜植株中上部剪取健康葉片,用無(wú)菌水沖洗干凈。用滅菌接種針在健康葉片上的每個(gè)接種點(diǎn)針刺5下,在傷口處滴半滴無(wú)菌水。從28℃黑暗培養(yǎng)15 d的菌落上切取菌絲塊(5 mm×5mm),將長(zhǎng)菌絲的一面貼于針刺傷口處。每處理3張葉片,每張葉片接種3個(gè)菌絲塊;以針刺傷口處貼放PDA空白培養(yǎng)基塊為對(duì)照。將處理和對(duì)照葉片置于28℃下保濕培養(yǎng),定期觀察各處理葉片的發(fā)病情況。發(fā)病后對(duì)病斑上的病原菌進(jìn)行再分離,比較分離菌株與接種菌株的菌落和分生孢子形態(tài)是否相同,如分離菌株與接種菌株的菌落和分生孢子形態(tài)相同,則說(shuō)明是同一種真菌,可確認(rèn)為病原菌。

    1.3.3病原菌形態(tài)學(xué)鑒定 將致病菌接種到PDA培養(yǎng)基上,置于28℃下黑暗培養(yǎng),定期觀察記錄菌落的形態(tài)特征和生長(zhǎng)情況。另外,用滅菌解剖刀片從葉片病斑上刮下菌體,置于載玻片上的半滴無(wú)菌水中,蓋上蓋玻片,置顯微鏡下觀察病菌的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和分生孢子形態(tài)特征,并測(cè)量大小。

    1.3.4病原菌分子生物學(xué)鑒定 采用天根生化科技(北京)有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒提取病原菌基因組DNA。以真菌通用引物ITS1(5-TCCG-TAGGTGAACCTGCGG-3)和ITS4(5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3')(朱迎迎等,2016)對(duì)病原菌的rDNA-ITS序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系25.0 uL:2.5 mmol/L dNTP 2.0μL,10xBuffer 2.5μL,5 U/IaLEx Taq 0.5 μL,10 μmol/L ITS1和ITS4各1.0μL,模板DNA 100 ng,超純水補(bǔ)足至25.0μL。擴(kuò)增程序:95℃預(yù)變性5 min;95℃30 s,58℃30 s,72℃80 s,進(jìn)行35個(gè)循環(huán);72℃延伸10 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后,回收目標(biāo)DNA條帶,送交金唯智生物科技(北京)有限公司進(jìn)行序列測(cè)定。運(yùn)用BLAST將測(cè)序結(jié)果與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中的基因序列進(jìn)行同源性比對(duì)分析。

    2結(jié)果與分析

    2.1病害癥狀

    該病害在厚皮甜瓜定植后的整個(gè)生育期均可發(fā)生,苗期發(fā)生較輕微,以生長(zhǎng)中后期(結(jié)果期至采收期)發(fā)病最重。病害癥狀首先在植株下部的葉片上出現(xiàn),隨后向中上部葉片擴(kuò)展。初期在葉片上形成灰白色圓形小斑點(diǎn),后逐漸擴(kuò)大成近圓形褐色病斑,病斑中央常為灰白色,外圍有明顯黃色暈圈(圖1-A)。還可形成不規(guī)則形或沿著葉緣葉脈向葉片內(nèi)部擴(kuò)展呈倒“V”字形的大型病斑,病斑均為褐色,外圍有黃色暈圈(圖1-B),病斑大小差異較明顯。病害嚴(yán)重時(shí),多個(gè)病斑融合在一起,致葉片大面積干枯死亡,造成植株早衰。

    2.2病原菌分離和鑒定結(jié)果

    2.2.1病原菌分離和致病性測(cè)定結(jié)果 對(duì)5張來(lái)自不同大棚的甜瓜病葉進(jìn)行病原菌單孢分離,分離純化得到形態(tài)特征一致的真菌5株。通過(guò)針刺接種法將5株菌株的菌絲塊接種到健康的甜瓜葉片上,接種4 d后,接種部位均出現(xiàn)明顯的近圓形褐色小病斑,直徑8-10 mm,外圍有明顯黃色暈圈(圖2-B)。隨著時(shí)間推移,病斑不斷擴(kuò)大,接種6 d后,病斑直徑達(dá)25-30 inn3,病斑癥狀與自然發(fā)病的近圓形病斑癥狀相似(圖2-C)。對(duì)照葉片未發(fā)?。▓D2-A)。從發(fā)病組織上采用單孢分離法再分離得到的菌株,其菌落和分生孢子形態(tài)與接種菌株相同,表明再分離獲得的真菌菌株即為病原菌。選取其中一株菌株TBD-2進(jìn)行培養(yǎng)菌落的形態(tài)特征觀察和分子生物學(xué)鑒定。

    2.2.2病原菌形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果 人工培養(yǎng)的菌落在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)緩慢,28℃下黑暗培養(yǎng)10 d,菌落直徑僅為3.0-3.5 cm,且不產(chǎn)生分生孢子。菌落近圓形,邊緣平滑,氣生菌絲致密,菌落正面為白色,中央隆起(圖3-D),菌落背面黑褐色,產(chǎn)生紅色色素。菌落生長(zhǎng)特征基本與尾孢屬真菌相符(雷玉明和張建文,2006)。

    從葉片病斑上觀察到病菌子實(shí)體葉兩面生。刮下菌體制成臨時(shí)玻片在顯微鏡下觀察,可見(jiàn)子座小或不明顯。分生孢子梗單生或2-12根簇生,頂部淺褐色,基部深褐色,不分枝,直立或彎曲,有1-7個(gè)曲膝狀折點(diǎn),1-8個(gè)隔膜,頂部圓錐形平截,孢痕疤明顯加厚(圖3-C),大小為(52.5-245.0)μm×(4.0-6.0)gin。分生孢子針形,直或稍彎曲,無(wú)色,單生,基部平截,頂端漸細(xì)至鈍,多個(gè)隔膜(圖3-A和圖3-B),大小為(48.5-238.0)μmx(2.7-5.4)岬。從葉片病斑上觀察到的病原菌形態(tài)特征與《中國(guó)真菌志》第二十四卷尾孢菌屬(郭英蘭等,2005)描述的寄生在葫蘆科作物上的瓜類尾孢(Cercospora citrullina)基本一致。

    2.2.3病原菌分子生物學(xué)鑒定結(jié)果 用真菌通用引物ITSl和ITS4對(duì)菌株TBD一2的rDNA-ITS基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增,產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳,獲得長(zhǎng)度約530 bp的DNA片段(圖4)?;厥赵揇NA片段進(jìn)行測(cè)序,得到538 bp的基因序列(GenBank登錄號(hào)KY824771),將該序列與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中已公布的基因序列進(jìn)行BLAST同源比對(duì)分析,結(jié)果表明,該序列與瓜類尾孢的同源性達(dá)99%。

    結(jié)合病原菌的形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定結(jié)果,將菌株TBD-2鑒定為瓜類尾孢(C.citrullina)。

    3討論

    國(guó)內(nèi)外已報(bào)道能引起甜瓜葉斑病的病原菌有多種,包括瓜鏈格孢(Alternaria cucumerina)(Egeland Harmon,2007)、交鏈格孢(A.alternata)(Zhouand Everts,2008;Huang et a1.,2011)、多主棒孢霉(Corynespora cassiicola)(王爽等,2013)和丁香假單胞桿菌(Pseudomonas syringae)(李亞利等,2007)等真菌和細(xì)菌,由瓜類尾孢(C. citrullina)引起的甜瓜葉斑病未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。瓜類尾孢主要侵染葫蘆科的冬瓜、西瓜、南瓜、西葫蘆、黃瓜、絲瓜和苦瓜等作物(郭英蘭等,2005),引起葉斑類病害。鑒于能引起甜瓜葉斑病的病原種類較多,為避免混淆,建議將瓜類尾孢引起的甜瓜葉斑病定名為甜瓜尾孢葉斑病。

    本研究發(fā)現(xiàn)采用常規(guī)的組織分離法很難分離到尾孢菌,其原因可能是尾孢菌在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)緩慢,容易被其他生長(zhǎng)較快的腐生真菌或內(nèi)生真菌覆蓋,因此采用組織分離法通常分離到其他真菌而不是尾孢菌。而采用挑取單孢的分離法,可有效分離到純的尾孢菌,且能減少病菌分離純化的工作量。劉慶奎等(2013)、張小飛等(2014)也是采用單孢分離法對(duì)尾孢屬真菌進(jìn)行分離。

    瓜類尾孢在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)緩慢,這一特性與其他尾孢屬真菌相同(雷玉明和張建文,2006)。其生長(zhǎng)緩慢的特性將影響后續(xù)的生物學(xué)特性測(cè)定、藥劑敏感性測(cè)定等室內(nèi)試驗(yàn)的開(kāi)展,因此,促進(jìn)該病原菌快速生長(zhǎng)的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)方法尚需進(jìn)一步探究。

    4結(jié)論

    結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法,對(duì)近年來(lái)在廣西大棚厚皮甜瓜上嚴(yán)重發(fā)生的一種葉部新病害進(jìn)行鑒定,將病原菌鑒定為瓜類尾孢(C. citrullina),該病是廣西厚皮甜瓜上的一種新病害。

    (責(zé)任編輯 麻小燕)

    猜你喜歡
    葉斑病甜瓜
    甜瓜的重量
    番茄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SlSTP2在防御細(xì)菌性葉斑病中的功能
    “二月蘭葉斑病菌甘藍(lán)鏈格孢生物學(xué)特性觀察實(shí)驗(yàn)”的教學(xué)設(shè)計(jì)
    甘肅教育(2021年10期)2021-11-02 06:14:26
    榛子葉斑病病原菌生物學(xué)特性
    薄皮甜瓜新品種墾甜1號(hào)的選育
    玉米葉斑病綜合防治技術(shù)
    我喜歡吃甜瓜
    大果紫檀葉斑病的病原鑒定
    中甜1號(hào)甜瓜
    甜瓜有多重
    在线视频色国产色| 人人澡人人妻人| 少妇被粗大的猛进出69影院| 欧美性长视频在线观看| 午夜亚洲福利在线播放| 又紧又爽又黄一区二区| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 91字幕亚洲| 免费在线观看日本一区| 大香蕉久久成人网| 亚洲国产看品久久| 欧美乱色亚洲激情| av片东京热男人的天堂| 免费高清在线观看日韩| 中文亚洲av片在线观看爽| 高清在线国产一区| 日韩高清综合在线| 少妇被粗大的猛进出69影院| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久午夜综合久久蜜桃| 中国美女看黄片| 国产91精品成人一区二区三区| 午夜激情av网站| 天堂影院成人在线观看| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲男人天堂网一区| 久久久久久免费高清国产稀缺| www.精华液| 电影成人av| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 9色porny在线观看| 三级毛片av免费| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲情色 制服丝袜| 日日干狠狠操夜夜爽| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 成人18禁在线播放| 国产av又大| 精品久久久久久久毛片微露脸| 99久久人妻综合| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲成国产人片在线观看| 大型av网站在线播放| 亚洲片人在线观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 午夜老司机福利片| 99热只有精品国产| 男人舔女人的私密视频| 在线国产一区二区在线| 欧美黄色淫秽网站| 欧美在线一区亚洲| 国产真人三级小视频在线观看| 怎么达到女性高潮| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久香蕉国产精品| avwww免费| 国产亚洲av高清不卡| 少妇的丰满在线观看| 日韩人妻精品一区2区三区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产精品国产av在线观看| 亚洲国产精品999在线| 国产成人欧美| av免费在线观看网站| 一本综合久久免费| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 性色av乱码一区二区三区2| 国产精品九九99| 久热这里只有精品99| 亚洲 国产 在线| 亚洲熟女毛片儿| 色老头精品视频在线观看| 男女高潮啪啪啪动态图| 超色免费av| 亚洲av电影在线进入| 国产亚洲精品第一综合不卡| 久久国产精品影院| 可以在线观看毛片的网站| 大码成人一级视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 天堂√8在线中文| 久久中文看片网| 国产又爽黄色视频| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲精品在线美女| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 丝袜美足系列| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 一级,二级,三级黄色视频| 久久99一区二区三区| 天天添夜夜摸| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲精品一区av在线观看| 麻豆成人av在线观看| 亚洲专区字幕在线| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 亚洲av第一区精品v没综合| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 波多野结衣高清无吗| 国产蜜桃级精品一区二区三区| av天堂在线播放| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产av在哪里看| 国产99白浆流出| 一级黄色大片毛片| 一二三四在线观看免费中文在| 97人妻天天添夜夜摸| 成人永久免费在线观看视频| 美国免费a级毛片| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美乱色亚洲激情| 久久精品91蜜桃| 老司机亚洲免费影院| 国产亚洲精品一区二区www| 国产精品电影一区二区三区| 国产精品一区二区免费欧美| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 大码成人一级视频| 日本vs欧美在线观看视频| 午夜精品在线福利| 一级片免费观看大全| 国产精品av久久久久免费| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 嫁个100分男人电影在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看| 极品教师在线免费播放| 亚洲av美国av| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲全国av大片| 久热爱精品视频在线9| 久久人妻av系列| 亚洲精华国产精华精| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲九九香蕉| 亚洲久久久国产精品| 国产免费av片在线观看野外av| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产野战对白在线观看| 国产99白浆流出| 亚洲专区字幕在线| xxx96com| 两人在一起打扑克的视频| 操美女的视频在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品一区二区在线不卡| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲自拍偷在线| 国产成人系列免费观看| 亚洲伊人色综图| 一区二区三区激情视频| 日韩精品中文字幕看吧| 真人做人爱边吃奶动态| 看免费av毛片| 在线播放国产精品三级| 久久草成人影院| 国产熟女午夜一区二区三区| 最近最新免费中文字幕在线| 国产精品av久久久久免费| 欧美日本中文国产一区发布| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 91麻豆精品激情在线观看国产 | 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 宅男免费午夜| 色在线成人网| 涩涩av久久男人的天堂| 动漫黄色视频在线观看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 欧美人与性动交α欧美软件| 看免费av毛片| 黄片播放在线免费| 精品久久久久久久久久免费视频 | 人人澡人人妻人| 高清在线国产一区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 欧美黄色淫秽网站| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产国语露脸激情在线看| 精品无人区乱码1区二区| 日韩有码中文字幕| 久久久久九九精品影院| 视频在线观看一区二区三区| а√天堂www在线а√下载| 午夜福利在线观看吧| 很黄的视频免费| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产成人精品无人区| 久久久久久久午夜电影 | 午夜精品久久久久久毛片777| 高清毛片免费观看视频网站 | 欧美成狂野欧美在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 视频区欧美日本亚洲| 国产91精品成人一区二区三区| 在线永久观看黄色视频| 精品国产美女av久久久久小说| 久热这里只有精品99| 午夜a级毛片| 黄色女人牲交| av视频免费观看在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 男女下面进入的视频免费午夜 | 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲中文日韩欧美视频| 精品国产国语对白av| 国产熟女xx| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 水蜜桃什么品种好| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久精品国产综合久久久| 婷婷丁香在线五月| 伦理电影免费视频| 亚洲在线自拍视频| 久久伊人香网站| 少妇的丰满在线观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 精品日产1卡2卡| www.精华液| 级片在线观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 一进一出抽搐动态| 高清在线国产一区| 精品第一国产精品| 久久 成人 亚洲| 两个人看的免费小视频| 午夜老司机福利片| 在线观看免费日韩欧美大片| 久久久久九九精品影院| 久久精品成人免费网站| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲av第一区精品v没综合| 久久中文字幕人妻熟女| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 在线免费观看的www视频| 久久中文看片网| 欧美激情 高清一区二区三区| 女性被躁到高潮视频| 丁香六月欧美| 精品一区二区三区四区五区乱码| 日本一区二区免费在线视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 嫁个100分男人电影在线观看| 中国美女看黄片| 交换朋友夫妻互换小说| 高清黄色对白视频在线免费看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 91av网站免费观看| 1024视频免费在线观看| 又大又爽又粗| 国产国语露脸激情在线看| 欧美一级毛片孕妇| 一区二区三区国产精品乱码| 国产高清视频在线播放一区| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 久久精品国产亚洲av高清一级| 久久久水蜜桃国产精品网| 天天添夜夜摸| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 国产精品久久久人人做人人爽| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲精品粉嫩美女一区| 午夜亚洲福利在线播放| 精品福利永久在线观看| 久久久久久久久久久久大奶| 性色av乱码一区二区三区2| 欧美日韩福利视频一区二区| 中文字幕高清在线视频| 日本欧美视频一区| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲精品一二三| 国产精品 国内视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 无限看片的www在线观看| 男女午夜视频在线观看| 久久久久久大精品| bbb黄色大片| av国产精品久久久久影院| 少妇 在线观看| 亚洲美女黄片视频| 88av欧美| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲avbb在线观看| 亚洲一区中文字幕在线| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产成人精品无人区| 很黄的视频免费| 女同久久另类99精品国产91| 免费高清在线观看日韩| 人人澡人人妻人| 性少妇av在线| 国产视频一区二区在线看| 久久香蕉国产精品| 级片在线观看| 啦啦啦免费观看视频1| 天堂中文最新版在线下载| 精品久久久久久电影网| 成年版毛片免费区| 久久精品国产综合久久久| 午夜福利一区二区在线看| 午夜精品在线福利| 免费日韩欧美在线观看| 99国产综合亚洲精品| 日韩欧美在线二视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 窝窝影院91人妻| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产成人一区二区三区免费视频网站| √禁漫天堂资源中文www| 老汉色∧v一级毛片| 少妇粗大呻吟视频| 久久久精品欧美日韩精品| 一区二区三区精品91| 成人三级做爰电影| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 婷婷六月久久综合丁香| 午夜免费激情av| 黄色成人免费大全| 久久久精品欧美日韩精品| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 欧美丝袜亚洲另类 | videosex国产| 成人影院久久| 中文字幕高清在线视频| 午夜福利一区二区在线看| 欧美一区二区精品小视频在线| 免费av毛片视频| 黄色片一级片一级黄色片| a级毛片黄视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 最新美女视频免费是黄的| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲国产精品合色在线| 国产又爽黄色视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 日韩精品青青久久久久久| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产伦人伦偷精品视频| 欧美乱色亚洲激情| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产区一区二久久| 亚洲精品国产区一区二| 免费高清在线观看日韩| 精品久久久久久久久久免费视频 | 日本三级黄在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 久久中文字幕人妻熟女| 成人免费观看视频高清| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 无遮挡黄片免费观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲精品一二三| 淫秽高清视频在线观看| netflix在线观看网站| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 三级毛片av免费| 好男人电影高清在线观看| 午夜免费激情av| 成人永久免费在线观看视频| 久久久久久大精品| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产精品免费视频内射| 亚洲九九香蕉| 在线国产一区二区在线| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美黄色片欧美黄色片| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 性欧美人与动物交配| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产伦人伦偷精品视频| 国产区一区二久久| 大型黄色视频在线免费观看| 久久九九热精品免费| 国产精品一区二区在线不卡| 999久久久精品免费观看国产| 国产在线观看jvid| 久久久久久久久久久久大奶| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 黄色成人免费大全| 国产91精品成人一区二区三区| 午夜老司机福利片| 久久香蕉激情| 男人舔女人的私密视频| 久99久视频精品免费| 国产一区二区三区视频了| 欧美在线一区亚洲| 欧美大码av| 亚洲精品成人av观看孕妇| 1024香蕉在线观看| 亚洲欧美激情综合另类| 黄色成人免费大全| 国产成年人精品一区二区 | 久久影院123| 女同久久另类99精品国产91| 久久性视频一级片| 国产精品免费视频内射| 亚洲精品美女久久av网站| 99精品在免费线老司机午夜| 精品乱码久久久久久99久播| 黄色丝袜av网址大全| 精品人妻在线不人妻| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产高清videossex| 精品人妻在线不人妻| 精品日产1卡2卡| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产精品日韩av在线免费观看 | 国产片内射在线| 国产又色又爽无遮挡免费看| 久久伊人香网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 波多野结衣一区麻豆| 一边摸一边做爽爽视频免费| 成人免费观看视频高清| 看黄色毛片网站| 久久天堂一区二区三区四区| 欧美大码av| 日韩三级视频一区二区三区| 久久影院123| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 在线观看免费视频网站a站| 制服诱惑二区| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久亚洲精品不卡| 欧美黄色淫秽网站| 一级黄色大片毛片| 电影成人av| 91九色精品人成在线观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久久久久久久久免费视频了| 男女床上黄色一级片免费看| 成人三级黄色视频| 极品教师在线免费播放| 视频区图区小说| 日韩国内少妇激情av| 91成人精品电影| av在线天堂中文字幕 | 9191精品国产免费久久| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久亚洲真实| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产成人啪精品午夜网站| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 国产乱人伦免费视频| 91精品三级在线观看| 1024视频免费在线观看| 男男h啪啪无遮挡| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲成国产人片在线观看| 高清在线国产一区| 欧美中文日本在线观看视频| 成人永久免费在线观看视频| 午夜a级毛片| 国产国语露脸激情在线看| 国产视频一区二区在线看| 日韩精品青青久久久久久| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲一区高清亚洲精品| 又紧又爽又黄一区二区| 久久久水蜜桃国产精品网| 欧美黄色淫秽网站| 丝袜人妻中文字幕| 在线观看舔阴道视频| 一区福利在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲熟女毛片儿| 妹子高潮喷水视频| 黄色成人免费大全| 午夜a级毛片| 成人手机av| 亚洲av片天天在线观看| 久久中文看片网| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲中文日韩欧美视频| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲精品美女久久av网站| 精品国产美女av久久久久小说| 99riav亚洲国产免费| 男男h啪啪无遮挡| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲av熟女| 久久久久久久午夜电影 | 亚洲五月色婷婷综合| 欧美不卡视频在线免费观看 | 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 桃红色精品国产亚洲av| 日韩欧美在线二视频| 午夜影院日韩av| 国产亚洲欧美98| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 精品久久蜜臀av无| 啦啦啦免费观看视频1| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 亚洲成人免费av在线播放| 一区福利在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 日韩精品免费视频一区二区三区| 成人18禁在线播放| 日韩欧美一区视频在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 黄色毛片三级朝国网站| 大陆偷拍与自拍| 一级片'在线观看视频| 最好的美女福利视频网| 他把我摸到了高潮在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 另类亚洲欧美激情| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产免费男女视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲久久久国产精品| 日韩欧美免费精品| 午夜两性在线视频| 黄色女人牲交| 亚洲在线自拍视频| 男女下面进入的视频免费午夜 | 亚洲成人免费av在线播放| 久久人妻熟女aⅴ| 久久国产精品人妻蜜桃| 又黄又爽又免费观看的视频| 久久中文字幕一级| 欧美乱色亚洲激情| 色哟哟哟哟哟哟| 男人操女人黄网站| 国产亚洲av高清不卡| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲精品在线美女| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产免费av片在线观看野外av| 国产又爽黄色视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产视频一区二区在线看| 午夜福利影视在线免费观看| 国产激情欧美一区二区| 少妇被粗大的猛进出69影院| 嫩草影视91久久| 丝袜美腿诱惑在线| 欧美成人免费av一区二区三区| 真人做人爱边吃奶动态| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产真人三级小视频在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产一卡二卡三卡精品| 一级作爱视频免费观看| 丝袜美足系列| 国产成人av教育| 久久国产精品影院| 欧美日韩乱码在线| www日本在线高清视频| 国产成年人精品一区二区 | 麻豆一二三区av精品| 亚洲国产欧美一区二区综合| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 一级片'在线观看视频| 女性生殖器流出的白浆| 一级黄色大片毛片| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产在线观看jvid| 久久青草综合色| 99国产综合亚洲精品| 亚洲精品中文字幕在线视频| 精品久久久久久成人av| 国产99白浆流出| 99久久国产精品久久久| 18禁国产床啪视频网站| 欧美性长视频在线观看| 亚洲人成电影观看| av天堂在线播放| 欧美中文日本在线观看视频| 国产主播在线观看一区二区| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲伊人色综图| 国产精华一区二区三区| 国产99久久九九免费精品| 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 久久国产精品影院| 欧美日韩视频精品一区| 精品人妻1区二区| 天堂俺去俺来也www色官网| 少妇被粗大的猛进出69影院| 免费在线观看日本一区| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲av美国av| 久久久国产一区二区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡|