蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究

夏爾巴提?吾馬爾 金小越

摘要目的：研究蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑對小鼠抗炎及鎮(zhèn)痛作用。方法：采用小鼠熱板法和醋酸扭體法，檢測蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑的鎮(zhèn)痛作用。采用小鼠耳廓腫脹法觀察蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑的抗炎作用。小鼠隨機(jī)分為5組，即空白對照組、蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑高、中、低劑量組、阿司匹林組。每組小鼠連續(xù)灌胃給藥7 d后，觀察蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果：蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑能明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹，中、高劑量明顯提高小鼠的痛閾，對小鼠醋酸扭體法和熱板法致痛反應(yīng)有較好的止痛作用。結(jié)論：蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛療效。

關(guān)鍵詞蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑；抗炎；鎮(zhèn)痛；小鼠；耳廓腫脹法；實(shí)驗(yàn)研究

Experimental Study on Antiinflammatory and Analgesic Effects of Lianwei Anaqi Granules

Xiaerbati·Wumaer1， Jin Xiaoyue2

（1 School of Pharmacy， Xinjiang Medical University， Urumqi 830011， China； 2 Department of Pharmacy，

the Sixth Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University， Urumqi 830002， China）

AbstractObjective：To investigate the antiinflammatory and analgesic effects of Lianwei Anaqi granules. Methods：The analgesic effect of Lianwei Anaqi granules was determined by hot plate test and acetic acid writhing test in mice. The antiinflammatory effect of Lianwei Anaqi granules was observed by ear swelling test in mice. Mice were divided into 5 groups randomly， namely blank control group， Lianwei Anaqi granules at high， medium and low doses groups， and Aspirin group. The antiinflammatory and analgesic effects of Lianwei Anaqi granules were observed after every group mice were orally given correspondence durg （ig） for 7 days. Results：Lianwei Anaqi granules could inhibit ear swelling caused by Xylene in mice markedly， and the high and medium doses of Lianwei Anaqi granules could increase pain threshold significantly. In the acetic acid writhing test and hot plate test， Lianwei Anaqi granules showed greater analgesic effects. Conclusion：Lianwei Anaqi granules have significant antiinflammatory and analgesic effects.

Key WordsLianwei Anaqi granules； Antiinflammatory； Analgesic；Mice；Ear swelling test；Experimental study

中圖分類號：R2855文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.05.039

蓮?fù)⒛瞧涮幏絹碓从谛陆t(yī)科大學(xué)第六附屬醫(yī)院中醫(yī)科，是我院傳統(tǒng)中藥自制制劑，主要針對“炎性反應(yīng)”而立意組方，由雪蓮、肉蓯蓉、桑椹、阿那其根、骨碎補(bǔ)、鹿銜草、淫羊藿等12味藥材組成，具有補(bǔ)骨通絡(luò)、活血化瘀、祛風(fēng)止痛之功效，可用于治療各種原因引起的骨關(guān)節(jié)炎、椎間盤突出、外界損傷性炎性反應(yīng)和腫脹。蓮?fù)⒛瞧涮幏揭詼珓┑膭┬团R床應(yīng)用十幾年來，療效確切，取得了很好的治療效果。本研究采用小鼠熱板法和醋酸扭體法考察了蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑的體外鎮(zhèn)痛作用，并通過蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑對二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹的影響考察了蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑的抗炎作用，為該藥的臨床科學(xué)用藥提供安全性依據(jù)和藥理試驗(yàn)研究基礎(chǔ)。

1材料與方法

11材料

111動物健康昆明種小白鼠，雌雄兼用，體重（20±2）g，由新疆維吾爾自治區(qū)實(shí)驗(yàn)動物研究中心提供。飼養(yǎng)溫度20～25 ℃，給予充分的標(biāo)準(zhǔn)飼料和飲用水。

112藥物蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑：由新疆醫(yī)科大學(xué)附屬第六醫(yī)院中醫(yī)科制劑室提供，生產(chǎn)批號：150301；阿司匹林，由拜耳醫(yī)藥保健有限公司提供，生產(chǎn)批號：BJ32261，規(guī)格100 mg，人體臨床用量：1片/次，1次/d。

113試劑與儀器乙酸：天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司提供，生產(chǎn)批號：160701；二甲苯：天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司提供，生產(chǎn)批號：160810。智能熱板測痛儀、打孔器（6 mm）、計(jì)時(shí)器、AB135S電子天平（MettlerTeledo）。

12方法

121分組與模型制備冰醋酸扭體試驗(yàn)與耳廓腫脹法試驗(yàn)均選取健康，體重（20±2）g的小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只。熱板痛閾試驗(yàn)篩選合格的雌性小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只。

122給藥方法根據(jù)《中藥藥理研究方法學(xué)》中計(jì)量換算方法計(jì)算試驗(yàn)中的小鼠給藥劑量。在正常飼養(yǎng)基礎(chǔ)上，每組灌胃給藥1次，連續(xù)給藥1周。第1組為空白對照組，灌胃生理鹽水，20 mL/（kg·d）；第2組為阿司匹林組，給藥劑量為004 g/（kg·d）；第3組委蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑高劑量組，給藥劑量為81 g/（kg·d）；第4組為蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑中劑量組，給藥劑量為27 g/（kg·d）；第5組為蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑低劑量組，給藥劑量為09 g/（kg·d）。

123檢測指標(biāo)與方法

1231蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑對冰醋酸扭體法小鼠扭體次數(shù)影響試驗(yàn)于未測給藥后1 h，各組小鼠腹腔注射11%冰醋酸001 mL/（g·d）。觀察并記錄20 min內(nèi)小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)（表現(xiàn)為腹部內(nèi)凹、軀干與后腿伸展、臀部高起）并計(jì)算扭體抑制率（%）。扭體抑制率=疼痛抑制率=（空白對照組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù)）/空白對照組扭體次數(shù)×100%[12]。

1232蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑對熱板痛閾時(shí)間影響試驗(yàn)5組雌性小鼠，分別放在（55±05）℃熱板上測小鼠痛閾值（注：熱板用前預(yù)熱10 min）。痛閾值=自小鼠放在熱板上至出現(xiàn)添足后所需時(shí)間（s）[34]。

1233蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑的小鼠耳廓腫脹法抗炎、鎮(zhèn)痛作用試驗(yàn)?zāi)┐谓o藥后60 min，每鼠左耳正、反兩面均勻涂抹二甲苯02 mL，致炎后60 min脫頸椎處死小鼠，沿耳廓基線剪下左右耳。用直徑9 mm打孔器在左右耳相同部位打孔，于分析天平上立即稱其質(zhì)量（mg），以左、右耳片重量差為腫脹度，并計(jì)算小鼠耳片腫脹率。腫脹度=左耳耳孔片重-右耳耳孔片重，腫脹抑制率=（空白對照組腫脹度-給藥組腫脹度）/空白對照組扭體次數(shù)×100%。

13統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 210統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，以P<005為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

21蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑對冰醋酸扭體法小鼠扭體次數(shù)影響試驗(yàn)結(jié)果冰醋酸扭體實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑能減少因冰醋酸引起的扭體反應(yīng)，且隨著計(jì)量的增加其作用增強(qiáng)，存在一定的量效關(guān)系。與空白對照組比較，蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑大、中，低劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005），表明蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑有一定的鎮(zhèn)痛作用。見表1。

表1蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑對醋酸誘發(fā)的小鼠

扭體反應(yīng)的影響（±s，n=10）組別劑量20 min扭體次數(shù)扭體抑制率（%）空表對照組等容量4540±26阿司匹林組004 g/kg1130±33*7511高劑量組81 g/kg1450±350*6806中劑量組27 g/kg1750±322**614低劑量組09 g/kg2350±224**4823注：與空白對照組比較*P<005，**P<001

22蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑對熱板痛閾時(shí)間影響試驗(yàn)結(jié)果在測定時(shí)間內(nèi)，阿司匹林組，蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑高、中劑量組小鼠痛閾值隨觀察時(shí)間而發(fā)生變化，給藥30 min后，蓮?fù)⒛瞧涓?、中劑量組鎮(zhèn)痛作用表現(xiàn)明顯（P<005），痛閾值明顯延長，90 min內(nèi)均有鎮(zhèn)痛作用，60 min左右出現(xiàn)作用高峰期，與空白對照組比較30 min、60 min差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。見表2。

23蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑對二甲苯胺所致的小鼠耳廓腫脹的影響試驗(yàn)結(jié)果蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑能抑制二甲苯致炎性反應(yīng)引起的小鼠耳腫脹作用，蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑高、中劑量組與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005），但中、高劑量組疼痛抑制作用較阿司匹林弱，阿司匹林組疼痛抑制作用與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<001），結(jié)果表明蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑能抑制二甲苯致炎性反應(yīng)引起的小鼠耳腫脹作用，對急性炎性腫脹具有抑制作用。見表3。

3討論

蓮?fù)⒛瞧涮幏脚R床用于治療椎間盤突出，骨關(guān)節(jié)的軟骨、韌帶等軟組織的變形、退化、外界損傷性炎性反應(yīng)和疼痛以及各種原因引起的骨關(guān)節(jié)炎的治療[7]，而這些病癥都會出現(xiàn)不同程度的炎性反應(yīng)和疼痛癥狀，運(yùn)用《中華人民共和國藥典》相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定和現(xiàn)代藥理學(xué)研究已經(jīng)可以證實(shí)蓮?fù)⒛瞧涮幏街械亩喾N中藥成分具有較強(qiáng)的抗炎和鎮(zhèn)痛作用，如處方中天山雪蓮、桑葚、阿那其根、淫羊藿、誘骨草等藥材在有效成分基礎(chǔ)上具有補(bǔ)腎通絡(luò)、活血化瘀、祛風(fēng)止痛等功效[811]，其中天山雪蓮、阿那其根在維醫(yī)藥臨床治療中抗炎、鎮(zhèn)痛作用明顯。方中天山雪蓮、桑葚、阿那其根、肉蓯蓉等藥材同時(shí)含有黃酮類、多糖和生物堿類成分，而多糖和蘆丁等黃酮類化合物具有良好的抗炎、鎮(zhèn)痛和活血化瘀作用[1214]。

小鼠熱板法和醋酸扭體法是鎮(zhèn)痛藥物外周鎮(zhèn)痛效果的評價(jià)和篩選中常用的經(jīng)典模型，分別屬于物理致痛法和化學(xué)致痛法，使用于觀察藥物對急性非特異性炎性反應(yīng)的抗炎及鎮(zhèn)痛作用，二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹試驗(yàn)觀察外周鎮(zhèn)痛藥物對炎性反應(yīng)早期的滲出和腫脹的影響。本研究中蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑的抗炎、鎮(zhèn)痛藥理學(xué)研究使用小鼠熱板法和醋酸扭體法觀察蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑的鎮(zhèn)痛作用，以二甲苯作為小鼠耳廓致炎因子，觀察了小鼠炎性反應(yīng)早期的耳廓腫脹情況[1517]。

本研究中蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑的低劑量組的劑量是由人的常用劑量折算出來的小鼠給藥劑量，其抗炎鎮(zhèn)痛效果低于中、高劑量組，研究結(jié)果顯示，蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑對化學(xué)致痛和物理致痛具有良好的鎮(zhèn)痛效果，蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑高、中、低劑量組鎮(zhèn)痛抑制率分別為6806%、614%和4823%，與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005），并且鎮(zhèn)痛作用和劑量之間存在量效依賴性關(guān)系，中、高劑量能明顯提高小鼠的痛閾值。小鼠耳廓腫脹試驗(yàn)結(jié)果表明，蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑中、高劑量對小鼠耳廓腫脹程度有良好的抑制作用，腫脹抑制率分別為4831%和2359%，與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005），抑制耳廓腫脹效果隨劑量的增加而增強(qiáng)，但高劑量組的抑制作用相對阿司匹林組弱，能有效地對抗急性炎性反應(yīng)引起的腫脹。

蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑的小鼠膜性實(shí)驗(yàn)結(jié)果對蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑的中醫(yī)治療理論上的抗炎、鎮(zhèn)痛作用提供了試驗(yàn)研究基礎(chǔ)，為該藥的臨床應(yīng)用提供了藥理學(xué)依據(jù)和指導(dǎo)。中藥復(fù)方制劑成分多，成分之間的相互作用比較復(fù)雜，難以定性和定量，指令控制是一個(gè)難題，并且作用部位不一致，通過主要活性成分的藥效研究也不能完全說明問題，蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑的抗炎、鎮(zhèn)痛作用機(jī)制缺乏完整的依據(jù)。因此蓮?fù)⒛瞧漕w粒劑的抗炎、鎮(zhèn)痛作用和機(jī)制還需要進(jìn)一步的去研究和探討。

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