魚(yú)腥草種莖分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)研究

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(1.四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物育種栽培研究所， 成都 610300； 2.成都中醫(yī)藥大學(xué)， 四川 成都 611137)

魚(yú)腥草為三白草科植物蕺菜(HouttuyniacordataThunb.)的新鮮全草或干燥地上部分[1]。原名“蕺”，始載于《名醫(yī)別錄》，列為下品。別名有岑草、俎菜、臭豬巢、臭腥草、側(cè)耳根、豬鼻孔、九節(jié)蓮等[2]。魚(yú)腥草位列衛(wèi)計(jì)委發(fā)布的既是食品又是藥品的中藥名單，具有廣泛的開(kāi)發(fā)潛力[3]。近年來(lái)魚(yú)腥草種植面積逐年遞增，對(duì)優(yōu)質(zhì)種莖的需求增加。魚(yú)腥草種子繁殖存在一定困難[4-5]，各地栽培技術(shù)規(guī)程[6-8]均采用根莖作為種莖進(jìn)行無(wú)性繁殖。隨著中藥種子種苗標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)項(xiàng)目的實(shí)施[9-10]，已有甘草、素花黨參、黃芩等多種藥用植物開(kāi)展了種子種苗分級(jí)研究[11-15]。筆者在魚(yú)腥草產(chǎn)地調(diào)研發(fā)現(xiàn)，農(nóng)戶種植用魚(yú)腥草根莖多數(shù)是自繁自留種，或者從種植規(guī)模較大的產(chǎn)地購(gòu)買(mǎi)種莖，播種時(shí)隨挖隨栽，未進(jìn)行種莖篩選。王巧等[16]以?xún)舳?、莖節(jié)數(shù)、芽頭數(shù)、莖粗、不健康率為指標(biāo)初步擬定魚(yú)腥草種苗分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，但缺少實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檢測(cè)種莖發(fā)芽率、重量等指標(biāo)。本研究收集了全國(guó)魚(yú)腥草主要產(chǎn)區(qū)的種莖，依據(jù)莖徑粗細(xì)將魚(yú)腥草種莖分為不同規(guī)格，建立了魚(yú)腥草種莖發(fā)芽率測(cè)定方法，結(jié)合凈度、外觀、生活力、重量、干燥失重等指標(biāo)的研究，2016年收集9批樣品采用相關(guān)分析和聚類(lèi)分析初步建立魚(yú)腥草種莖分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，2017年收集10批樣品依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

筆者經(jīng)過(guò)查閱文獻(xiàn)、市場(chǎng)調(diào)研、實(shí)地考察，綜合相關(guān)信息，通過(guò)前往產(chǎn)地采集或委托當(dāng)?shù)胤N植戶快遞郵寄，2016—2017年從全國(guó)魚(yú)腥草人工種植主產(chǎn)區(qū)收集種莖19份(表1)，每份種莖采集10 kg。經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)生藥學(xué)李敏教授鑒定為三白草科植物蕺菜(HouttuyniacordataThunb.)的根莖。其中四川江油九嶺鎮(zhèn)為項(xiàng)目所屬種源基地，收集批次為5批。四川雅安嚴(yán)橋鎮(zhèn)未大面積種植，采集到作為種質(zhì)資源保存的少量植株。種莖凈度、發(fā)芽率等試驗(yàn)在四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物育種栽培研究所公共實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

1.2 方 法

1.2.1 凈 度

從每包裝上、中、下3個(gè)部位取樣品約500 g稱(chēng)重，再將樣品分離成凈種莖和雜質(zhì)。對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行稱(chēng)量，每個(gè)樣品設(shè)2個(gè)重復(fù)，按下列公式計(jì)算凈度。

凈度(%)=(樣品重量-雜質(zhì)重量)/樣品重量×100%。

1.2.2 種莖生活力測(cè)定

參照農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程中生活力測(cè)定方法[17]，取凈度分析后的種莖，洗凈表面泥土，切斷為5 cm長(zhǎng)的短根。每批種莖隨機(jī)數(shù)取50根，放入棕色磨口瓶中，加入0.5%TTC溶液浸沒(méi)種莖，在40 ℃水浴中保溫1 h后，傾出藥液，用自來(lái)水沖洗2～3次，立即觀察種莖節(jié)間和切面著色情況，判斷種莖有無(wú)生活力。為便于統(tǒng)計(jì)分析，節(jié)間無(wú)褐變?nèi)咀霞t、切面染紫紅的活力好，評(píng)分為90；節(jié)間和切面染紫紅-粉紅的活力較好，評(píng)分為80；節(jié)間和切面染微紅的活力差，評(píng)分為70；節(jié)間有超過(guò)3 mm褐變，扣5分。

表1 魚(yú)腥草種莖收集一覽表

編號(hào)采集地點(diǎn)采集時(shí)間(年/月/日)四川廣漢917四川省廣漢市西高鎮(zhèn)金光村21隊(duì)2016/09/17四川江油1009四川省江油九嶺鎮(zhèn)蘇溪村7隊(duì)2016/10/09湖北當(dāng)陽(yáng)1020湖北省當(dāng)陽(yáng)半月鎮(zhèn)先鋒村2隊(duì)2016/10/20浙江蕭山1022浙江省蕭山益農(nóng)鎮(zhèn)興裕村5組2016/10/22湖南懷化1023湖南省懷化西牛村7隊(duì)2016/10/23廣西象山1023廣西省桂林市象山四合村8隊(duì)2016/10/23云南建水1024云南省建水青龍鎮(zhèn)王家莊2016/10/24貴州威寧1025貴州威寧黑石頭鎮(zhèn)長(zhǎng)方村2016/10/25四川江油1114四川江油市九嶺鎮(zhèn)大寶村2016/11/14四川江油3281四川江油九嶺鎮(zhèn)大寶村2隊(duì)(1年生)2017/03/28四川江油3282四川江油九嶺鎮(zhèn)大寶村2隊(duì)(2年生)2017/03/28四川江油3283四川江油九嶺鎮(zhèn)大寶村2隊(duì)(3年生)2017/03/28四川安州405四川安州寶林鎮(zhèn)(2年生)2017/04/05四川雅安411四川雅安嚴(yán)橋鎮(zhèn)2017/04/11四川眉山423四川眉山市岷江村3隊(duì)2017/04/23四川江油1029四川江油九嶺鎮(zhèn)2017/10/29貴州畢節(jié)1112貴州畢節(jié)赫章縣野馬川鎮(zhèn)2017/11/12湖北當(dāng)陽(yáng)1112湖北省當(dāng)陽(yáng)半月鎮(zhèn)先鋒村2隊(duì)2017/11/12廣西靈川1117廣西桂林市靈川縣石枧村2017/11/17

1.2.3 外觀測(cè)定

觀察成熟期魚(yú)腥草完整的根莖，下種時(shí)的根莖多已木質(zhì)化，顏色深，為老根。老根先長(zhǎng)出主莖，主莖再發(fā)一級(jí)分支、二級(jí)分支。通常主莖莖徑較粗(節(jié)間直徑大于4 mm)，一級(jí)分支、二級(jí)分支依次變細(xì)。將主莖和分支按文獻(xiàn)[18]的方法進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)主莖萌發(fā)的芽粗，長(zhǎng)，色紅；分支越細(xì)萌發(fā)的芽越小，色白。取凈度分析后的種莖，將整株種莖依主莖、一級(jí)分支、二級(jí)分支順序，從分支處折斷為單根種莖并與自然挖斷的單根種莖合，用游標(biāo)卡尺測(cè)量單根種莖較粗一端的莖徑。參考文獻(xiàn)[4]、[19]，莖徑<2.5 mm的不能做種莖。將魚(yú)腥草種莖分成粗、中、細(xì)3種規(guī)格：莖徑≥4 mm為粗種莖、3 mm<莖徑<4 mm為中種莖、2.5 mm≤莖徑≤3 mm為細(xì)種莖，計(jì)算不同規(guī)格種莖占總數(shù)的比例作為莖徑分布，每個(gè)樣品測(cè)2個(gè)重復(fù)。然后取不同規(guī)格的種莖洗凈，切斷為5 cm長(zhǎng)的短根，隨機(jī)數(shù)取50短根，測(cè)定每短根中部節(jié)間長(zhǎng)數(shù)據(jù)，計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。

1.2.4 發(fā)芽率測(cè)定方法建立及質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定

自然挖斷的魚(yú)腥草種莖，無(wú)論長(zhǎng)短，都在較粗一端的節(jié)上發(fā)芽，多數(shù)只發(fā)一個(gè)芽；如種莖前端帶芽時(shí)，種莖其他節(jié)上存在的潛伏芽不萌發(fā)。推測(cè)種莖發(fā)芽受頂端優(yōu)勢(shì)的影響，考察種莖切斷為不同長(zhǎng)度的發(fā)芽率差異。

取2批中種莖，洗凈后切斷為4個(gè)處理分別為5(約含2個(gè)節(jié))，10，15，20 cm，為保持各處理用種莖總長(zhǎng)度一致，不同長(zhǎng)度的種莖分別取50根、25根、17根、13根，重復(fù)3次。參考農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程中發(fā)芽試驗(yàn)方法[20]，將切斷的種莖短根放在2層濕潤(rùn)的濾紙中間，濾紙置于發(fā)芽盆中，用黑色塑料袋包裹保濕遮光，發(fā)芽室溫保持22 ℃，發(fā)芽標(biāo)準(zhǔn)為芽長(zhǎng)大于3 mm，第10天統(tǒng)計(jì)種莖包含的完整的總節(jié)數(shù)(切斷時(shí)切在節(jié)上導(dǎo)致節(jié)不完整的不計(jì)入)和發(fā)芽的節(jié)數(shù)，計(jì)算百節(jié)發(fā)芽數(shù)作為發(fā)芽率，篩選適宜的切斷長(zhǎng)度后，每個(gè)樣品測(cè)4個(gè)重復(fù)。

發(fā)芽率(%)=發(fā)芽節(jié)數(shù)/完整的節(jié)總數(shù)×100%。

1) 發(fā)芽和根率：魚(yú)腥草種莖節(jié)上可以萌發(fā)芽，也可以萌發(fā)根，或者發(fā)芽和發(fā)根同時(shí)存在。在發(fā)芽率測(cè)定時(shí)，統(tǒng)計(jì)種莖包含的完整總節(jié)數(shù)，發(fā)芽和發(fā)根的節(jié)數(shù)，計(jì)算發(fā)芽和根率。

發(fā)芽和根率(%)=發(fā)芽或發(fā)根的節(jié)數(shù)之和/完整節(jié)總數(shù)×100%。

2) 百節(jié)鮮重、干燥失重：取不同規(guī)格種莖洗凈，用濾紙吸去種莖表面水分，切斷為5 cm長(zhǎng)的短根。隨機(jī)數(shù)取50段放入已干燥至恒重的稱(chēng)樣鋁盒中，稱(chēng)定百節(jié)鮮重，再放置烘箱105 ℃干燥24 h至恒重，按下列公式計(jì)算干燥失重(由于魚(yú)腥草種莖還含有揮發(fā)油，因此魚(yú)腥草種莖水分測(cè)定采用干燥失重說(shuō)法較為準(zhǔn)確)。每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)重復(fù)。

干燥失重=100%-(樣品、鋁盒干燥后重量-鋁盒重量)/百節(jié)鮮重×100%。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析

以發(fā)芽率、發(fā)芽和根率、百節(jié)鮮重、干燥失重、生活力為指標(biāo)[10]，參考文獻(xiàn)[15]的方法，采用DPS軟件進(jìn)行相關(guān)分析、聚類(lèi)分析、顯著性檢驗(yàn)。

1.2.6 種莖分級(jí)田間試驗(yàn)

以江油種莖3281不同等級(jí)種莖為供試材料，播期為3月下旬，試驗(yàn)地設(shè)在四川省綿陽(yáng)市江油縣九嶺鎮(zhèn)魚(yú)腥草基地，采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，3次重復(fù)，每小區(qū)面積為7 m2。各等級(jí)種莖切斷為5 cm長(zhǎng)，采用開(kāi)溝條播，用種量為每小區(qū)525 g。

1) 生長(zhǎng)指標(biāo)測(cè)定：在魚(yú)腥草生長(zhǎng)的出苗期、封行期、花果期和成熟期，分別測(cè)量不同等級(jí)魚(yú)腥草的株高、單葉面積、單株葉數(shù)和單株總?cè)~面積，其中葉面積用游標(biāo)卡尺測(cè)定的植株頂部第3片葉片長(zhǎng)度和葉片寬度相乘計(jì)算，單株總?cè)~面積=單株葉數(shù)×單葉面積。每處理隨機(jī)取樣株10株，各重復(fù)3次測(cè)定。

2) 魚(yú)腥草產(chǎn)量測(cè)定：于10月下旬，魚(yú)腥草成熟期，不同等級(jí)處理魚(yú)腥草分小區(qū)單獨(dú)采收地上和地下部分并測(cè)產(chǎn)。測(cè)產(chǎn)過(guò)程中在各處理小區(qū)隨機(jī)取500 g，按1.2.3測(cè)量莖徑分布以及各級(jí)重量比例，重復(fù)3次取平均值。

2 結(jié)果與分析

2.1 凈度和生活力

樣品四川江油1009被農(nóng)戶清洗，四川雅安411收到為帶泥土的植株，不適合測(cè)定凈度，其余樣品凈度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。觀察各批樣品，從種莖中分離的雜質(zhì)主要為泥塊，少量魚(yú)腥草葉片、地膜、稻草。從種莖攜帶的泥塊質(zhì)地分析，土壤質(zhì)地粘重的種莖凈度低，種植在沙壤土的種莖凈度高，提示種莖生產(chǎn)應(yīng)選擇壤土和沙壤土。在種莖采挖后，通過(guò)凈選，可降低泥土含量。根據(jù)實(shí)際情況，將魚(yú)腥草種莖雜質(zhì)定義為：種莖中帶有的魚(yú)腥草葉、脫落的葉鞘、泥土、腐敗莖、其他非魚(yú)腥草物。參考王巧等[16]研究結(jié)果，規(guī)定凈度不得低于95%。

采用TTC染色測(cè)定優(yōu)點(diǎn)是根據(jù)顯紅色深淺能快速反應(yīng)種莖的新鮮程度，紅色越深代表生活力越好。各批樣品切段為短根，采用TTC染色切面和節(jié)間都能染紅，不同樣品染色有深淺差別(表2)。結(jié)合各批樣品實(shí)際運(yùn)輸和保存條件情況分析，種莖生活力主要受采挖后運(yùn)輸時(shí)間(種莖郵寄時(shí)間越短染色越紅)、保存條件(如泡沫箱保存的種莖染色紅，編織袋保存的種莖染色較淺)影響。

2.2 外觀測(cè)定結(jié)果

各批種莖莖徑分布見(jiàn)表3。總體而言，中種莖所占比例大，細(xì)種莖和粗種莖比例差異表明不同產(chǎn)地種莖直徑粗細(xì)不同，如貴州威寧1025種莖整體較粗，4 mm以上種莖比例高，3 mm以下種莖比例低；四川安州405和湖北當(dāng)陽(yáng)1112種莖較細(xì)，4 mm以上種莖比例低，統(tǒng)計(jì)小于2.5 mm的根莖分別占15.3%和31.4%。

2016年各批種莖節(jié)間長(zhǎng)見(jiàn)表4。魚(yú)腥草種莖節(jié)間長(zhǎng)度變異較大，同一批種莖的節(jié)間長(zhǎng)度從18～30 mm不等，多數(shù)樣品不同規(guī)格種莖節(jié)間長(zhǎng)無(wú)顯著性差異。推測(cè)種莖在田間不同生長(zhǎng)時(shí)期受溫度、肥水等環(huán)境條件影響，時(shí)而生長(zhǎng)快，時(shí)而生長(zhǎng)慢，導(dǎo)致節(jié)間長(zhǎng)度變異大。不建議將節(jié)間長(zhǎng)度納入種莖質(zhì)量控制指標(biāo)。2017年采集樣品未進(jìn)行節(jié)間長(zhǎng)度測(cè)定。

編號(hào)凈度切面染色節(jié)間染色生活力評(píng)分四川廣漢91786.7±1.6紫紅紫紅90四川江油1009—紫紅紫紅90湖北當(dāng)陽(yáng)102093.4±0.6紫紅紫紅90浙江蕭山102295.3±0.8紫紅紫紅90湖南懷化102394.7±0.1粉紅粉紅80廣西象山102392.1±2.6微紅褐變、微紅65云南建水102492.3±0.1粉紅粉紅80貴州威寧102596.7±0.5粉紅褐變、粉紅75四川江油111494.6±2.8粉紅褐變、粉紅75四川江油328195.0±0.8紫紅紫紅90四川江油328293.3±1.9紫紅紫紅90四川江油328392.5±0.4紫紅紫紅90四川安州40590.8±0.8粉紅粉紅80四川雅安411—紫紅紫紅90四川眉山42398.1±0.2紫紅紫紅90四川江油102996.9±0.1紫紅紫紅90貴州畢節(jié)111298.3±1.2紫紅褐變、紫紅85湖北當(dāng)陽(yáng)111298.6±0.6紫紅紫紅90廣西靈川111799.1±0.2紫紅褐變、紫紅85

表3 種莖莖徑分布(%)

編號(hào)細(xì)種莖中種莖粗種莖四川廣漢91716.068.016.0四川江油100926.048.925.1湖北當(dāng)陽(yáng)102056.540.04.0浙江蕭山10225.062.034.0湖南懷化102341.049.59.5廣西象山102346.544.09.5云南建水10246.052.042.0貴州威寧10257.538.054.5四川江油111436.548.015.5四川江油328131.746.022.1四川江油328247.540.512.0四川江油328349.534.516.0四川安州40536.441.96.4四川雅安41135.443.222.4四川眉山42328.556.518.5四川江油102910.052.838.2貴州畢節(jié)111218.053.219.8湖北當(dāng)陽(yáng)111229.537.61.5廣西靈川111719.864.815.4

2.3 發(fā)芽率測(cè)定方法建立

不同切段處理發(fā)芽率見(jiàn)表5，結(jié)果表明，切段為5 cm長(zhǎng)度的短根發(fā)芽率極顯著高于10，15，20 cm。推測(cè)切斷處理打破了種莖頂端生長(zhǎng)素對(duì)側(cè)芽發(fā)育的抑制，從而提高了種莖發(fā)芽率。因而確定了魚(yú)腥草種莖的發(fā)芽率測(cè)定適宜的分段長(zhǎng)度為5 cm，對(duì)各批樣品分規(guī)格切段為5 cm，進(jìn)行發(fā)芽率等指標(biāo)測(cè)定。

編號(hào)四川廣漢917四川江油1009湖北當(dāng)陽(yáng)1020浙江蕭山1022湖南懷化1023廣西象山1023云南建水1024貴州威寧1025四川江油1114細(xì)種莖17.3±3.5b24.4±4.8a22.0±5.8a—23.2±4.7b23.8±5.1a25.4±4.9a20.6±3.9b23.3±6.3a中種莖20.2±4.1a25.6±3.6a20.8±4.4a27.2±6.824.9±5.2ab24.7±5.3a27.0±6.7a22.0±4.6ab25.3±5.8a粗種莖20.7±4.4a24.7±4.5a21.5±6.0a29.5±5.725.4±4.6a20.6±5.8b26.5±6.0a22.6±4.6a24.5±6.0a

注：不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(p<0.05)

切段長(zhǎng)度(cm)四川江油1009四川江油1114547.3±5.1A44.9±5.8A1031.7±5.1B23.4±5.1B1520.0±1.7C11.6±2.8B2013.0±3.0C12.9±4.6B

注：不同大寫(xiě)字母表示差異極顯著(p<0.01)。

2.4 發(fā)芽率等質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定結(jié)果

2016年樣品中(表6)，廣西象山1023干燥失重較低，該樣品郵寄時(shí)間長(zhǎng)，收到時(shí)外觀已失水褐變，四川江油1114樣品采收后露天放置2 d，細(xì)和中種莖失水導(dǎo)致發(fā)芽發(fā)根率較低，干燥失重低，提示種莖采挖后應(yīng)包裝保濕保存并及時(shí)運(yùn)輸。2017年樣品中(表7)，四川江油3282、四川江油3283、四川安州405樣品為多年生種莖，發(fā)芽率低，發(fā)芽和根率低；四川雅安411、四川眉山423樣品種莖采集時(shí)已經(jīng)過(guò)萌發(fā)，種莖發(fā)芽率低，發(fā)芽和根率低。

不同規(guī)格種莖的發(fā)芽率、百節(jié)鮮重有顯著性差異，而發(fā)芽和根率、干燥失重?cái)?shù)據(jù)差異不大。多數(shù)樣品粗種莖與細(xì)種莖發(fā)芽率有顯著性差異，粗種莖與中種莖發(fā)芽率沒(méi)有顯著性差異，但粗種莖發(fā)芽的芽長(zhǎng)和芽粗明顯大于中種莖。

2.5 數(shù)據(jù)分析

2016年收集種莖樣品采收時(shí)間一致，整體各指標(biāo)較好，采用2016年樣品數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。由聚類(lèi)分析(圖1)可知，廣西象山1023不同規(guī)格種莖聚在一起，其發(fā)芽率、干燥失重較低，該樣品作為不合格種莖參考；細(xì)四川廣漢917、細(xì)云南建水1024、細(xì)四川江油1114各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果作為三級(jí)種莖分級(jí)參考；中四川廣漢917、中四川江油1009、中浙江蕭山1022、中湖北當(dāng)陽(yáng)1020、中云南建水1024、中湖南懷化1023、中貴州威寧1025各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果作為二級(jí)種莖分級(jí)參考；粗浙江蕭山1022、粗湖南懷化1023、粗貴州威寧1025、粗云南建水1024、粗四川江油1114各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果作為一級(jí)種莖分級(jí)參考。相關(guān)分析(表8)表明，生活力與干燥失重極顯著正相關(guān)，表明種莖越新鮮，水分充足，生活力越好。發(fā)芽率與發(fā)芽和根率顯著正相關(guān)。發(fā)芽率與百節(jié)鮮重極顯著正相關(guān)，表明越粗的種莖鮮重越重，發(fā)芽率越高，按莖徑粗細(xì)分級(jí)可行。綜合聚類(lèi)和相關(guān)分析結(jié)果，結(jié)合樣品實(shí)際進(jìn)行判定，形成魚(yú)腥草種莖分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(表9)。

表6 2016年種莖樣品質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定結(jié)果

編號(hào)發(fā)芽率發(fā)芽和根率百節(jié)鮮重干燥失重細(xì)四川廣漢91726.0±1.7b75.0±6.5a12.6±2.3c79.9±0.2中四川廣漢91742.4±6.9ba82.3±4.5a23.3±2.6b79.7±0.5粗四川廣漢91759.1±2.3a82.3±6.6a33.8±1.9a78.6±0.7細(xì)四川江油100942.4±1.1b82.7±2.1b18.3±0.4c79.9±0.2中四川江油100947.3±5.1ab89.7±3.8a23.3±1.3b79.7±0.7粗四川江油100956.6±6.2a83.7±3.8ab34.3±3.4a78.6±0.6細(xì)湖北當(dāng)陽(yáng)102048.9±7.7b87.8±3.1b12.6±1.1b76.5±1.0中湖北當(dāng)陽(yáng)102062.3±2.2a94.4±1.5a25.4±1.6a79.0±1.7粗湖北當(dāng)陽(yáng)102059.1±4.9ab91.5±2.0ab——中浙江蕭山102253.1±4.4a83.1±0.4a25.4±1.4a85.2±0.6粗浙江蕭山102256.5±2.8a77.3±4.3a47.6±3.4b83.6±1.7細(xì)湖南懷化102372.2±3.0a93.6±2.5a15.7±1.1c75.7±0.6中湖南懷化102373.7±2.9a90.5±0.4ab24.2±1.7b75.7±1.3粗湖南懷化102368.6±6.7a87.5±0.4b38.4±0.4a77.4±0.6細(xì)廣西象山102325.7±4.2b86.1±6.9a14.1±1.3c71.6±1.2中廣西象山102338.1±4.7a80.4±7.3a26.6±0.9b70.2±1.7粗廣西象山102341.7±1.8a84.3±1.2a34.2±0.9a73.0±0.5細(xì)云南建水102427.2±2.8c95.2±4.6a18.4±0.5c83.4±0.4中云南建水102445.8±6.6b95.8±2.7a31.3±2.7b83.5±0.6粗云南建水102457.4±0.7a95.8±2.7a46.8±0.7a82.2±0.4細(xì)貴州威寧102563.0±5.2b93.3±2.6a——中貴州威寧102575.1±2.3a96.0±3.3a23.5±0.8b78.5±2.5粗貴州威寧102571.7±2.7a96.8±0.9a49.4±3.5a77.7±1.4細(xì)四川江油111433.7±9.0a58.2±0.8a13.1±0.1c74.4±0.6中四川江油111444.9±5.8ab76.7±4.5a21.5±0.4b74.5±0.7粗四川江油111467.0±0.4b82.0±3.7b38.3±2.3a77.8±1.0

注：不同小寫(xiě)字母表示同一產(chǎn)地3種規(guī)格種莖差異顯著(p<0.05)，“—”表示獲得的該規(guī)格樣品量少未測(cè)定。下同。

表9 魚(yú)腥草種莖分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

分級(jí)莖徑(mm)凈度(%)生活力發(fā)芽率(%)發(fā)芽和根率(%)百節(jié)鮮重(g)干燥失重(%)一級(jí)≥4≥95染色紅～紫紅≥45≥80≥35≥75二級(jí)≥3≥95染色紅～紫紅≥40≥80≥20≥75三級(jí)≥2.5≥95染色紅～紫紅≥30≥80≥15≥75不合格<2.5—染色粉紅或不染色、節(jié)間褐變<30<80<15<75

表7 2017年種莖樣品質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定結(jié)果

編號(hào)發(fā)芽率發(fā)芽和根率百節(jié)鮮重干燥失重細(xì)四川江油328142.8±4.3b87.2±4.0b21.3±1.8d87.7±0.4中四川江油328160.2±4.8a93.3±1.5a29.2±2.6b85.5±0.9粗四川江油328164.3±6.8a89.2±2.3ab40.7±1.2a85.3±0.6細(xì)四川江油328235.1±4.6b72.4±5.0a21.4±1.3c87.5±0.6中四川江油328249.5±1.7a75.5±4.7a27.6±0.4b86.6±0.1粗四川江油328248.7±4.6a69.1±4.5a40.3±1.8a86.4±1.1細(xì)四川江油328340.0±1.2b72.2±3.8ab22.7±0.6c85.3±0.7中四川江油328346.8±5.1a78.5±2.0a28.6±0.3b86.1±0.7粗四川江油328346.1±2.5ab67.5±3.9b38.7±0.6a87.9±1.0細(xì)四川安州40527.0±4.0c75.1±4.6a17.3±0.1c84.6±0.7中四川安州40536.3±3.9ab79.2±2.2a24.6±0.7b84.2±0.3粗四川安州40538.9±1.6a65.3±5.9b33.3±1.4a85.4±1.2細(xì)四川雅安41116.0±3.1c19.7±4.8b24.3±0.1c—中四川雅安41123.6±4.9ab28.2±4.4a32.4±2.6b87.8±0.5粗四川雅安41127.5±1.6a32.0±2.5a45.0±0.5a—細(xì)四川眉山42320.5±2.5bc66.3±6.9a23.5±0.9c82.7±0.3中四川眉山42323.3±3.4ab60.7±4.0a31.0±0.4b81.7±1.3粗四川眉山42315.2±2.5c41.8±2.5b45.5±1.3a82.2±0.3細(xì)四川江油102938.0±2.1b88.3±3.3a18.2±0.3c80.4±0.1中四川江油102959.9±3.4a93.3±1.1a24.5±0.4b81.6±0.9粗四川江油102961.7±5.1a88.5±5.6a37.9±1.4a80.9±1.2細(xì)貴州畢節(jié)111259.7±3.0a89.7±4.0b18.5±0.9c78.1±0.2中貴州畢節(jié)111266.2±4.7a95.6±1.6a28.2±0.9b79.2±0.3粗貴州畢節(jié)111267.2±8.1a95.8±1.3a39.9±1.0a79.6±1.1細(xì)湖北當(dāng)陽(yáng)111267.3±1.8a91.5±4.7a17.2±0.6b83.7±0.3中湖北當(dāng)陽(yáng)111274.0±5.2a95.6±3.1a23.8±0.8a83.5±1.0細(xì)廣西靈川111742.9±5.8b85.5±2.7b16.7±0.4c74.8±0.6中廣西靈川111759.9±7.5a93.2±3.6a26.9±0.2b75.5±0.9粗廣西靈川111757.7±2.7a94.1±2.0a39.0±0.8a76.1±0.9

表8 種莖5指標(biāo)相關(guān)分析

相關(guān)系數(shù)生活力發(fā)芽率發(fā)芽和根率百節(jié)鮮重干燥失重生活力10.11-0.06-0.050.68**發(fā)芽率0.1110.47*0.51**0.02發(fā)芽和根率-0.060.47*10.240.18百節(jié)鮮重-0.050.51**0.2410.18干燥失重0.68**0.020.180.181

注：“*”表示在0.05水平上顯著相關(guān)，“**”表示在0.01水平上極顯著相關(guān)。

采用建立的種莖分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)2017年樣品進(jìn)行判定，多年生種莖和經(jīng)過(guò)萌發(fā)的種莖發(fā)芽率、發(fā)芽和根率低于相應(yīng)等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，可判定為不合格種莖，其它種莖各規(guī)格均達(dá)到相應(yīng)等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，表明建立的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)可行。

圖1 2016年種莖聚類(lèi)分析圖

2.6 種莖分級(jí)田間試驗(yàn)結(jié)果

不同等級(jí)魚(yú)腥草種莖種植后，不同生長(zhǎng)期生長(zhǎng)指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表10。在苗期，一級(jí)種莖的株高、單株葉數(shù)顯著高于二級(jí)和三級(jí)種莖；隨著植株的生長(zhǎng)，在封行期和花果期，各等級(jí)種莖的株高和單株葉數(shù)差異不顯著；在成熟期，由于植株下部葉片脫落導(dǎo)致葉數(shù)減少，其中三級(jí)種莖脫落最多。各生長(zhǎng)期一級(jí)種莖的單株總?cè)~面積均高于二級(jí)和三級(jí)種莖。不同等級(jí)種莖收獲魚(yú)腥草產(chǎn)量見(jiàn)表11。各等級(jí)種莖地上部分產(chǎn)量無(wú)顯著性差異，可能是成熟期植株在小區(qū)面積上已充分生長(zhǎng)。三級(jí)種莖的地下種莖產(chǎn)量顯著低于一級(jí)和二級(jí)種莖，與成熟期三級(jí)種莖的單株葉數(shù)和總?cè)~面積小一致。以一級(jí)種莖生產(chǎn)的種莖篩選獲得的一級(jí)種莖分布和比重最高，建議生產(chǎn)基地采用一級(jí)種莖用作良種繁育。

表10 不同等級(jí)種莖生長(zhǎng)指標(biāo)

種莖等級(jí) 苗期 封行期 株高(cm)單株葉數(shù)單株總?cè)~面積(cm2)株高(cm)單株葉數(shù)單株總?cè)~面積(cm2)三級(jí)5.4±0.8b3.8±1.4b90.725.1±1.7a7.5±0.9a367.9二級(jí)5.2±1.5b3.8±1.0b95.324.4±2.7a7.4±0.9a368.4一級(jí)7.3±1.3a5.2±1.4a194.025.7±2.0a7.5±1.1a375.3種莖等級(jí) 花果期 成熟期 株高(cm)單株葉數(shù)單株總?cè)~面積(cm2)株高(cm)單株葉數(shù)單株總?cè)~面積(cm2)三級(jí)41.0±1.6a12.2±1.1a685.964.1±4.5a9.8±1.6b722.3二級(jí)41.8±1.6a13.4±1.3a726.363.8±2.4a12.2±1.9a877.8一級(jí)42.3±1.2a13.3±1.6a745.963.1±4.0a11.9±1.2a913.3

表11 不同等級(jí)種莖收獲魚(yú)腥草小區(qū)產(chǎn)量及各級(jí)莖徑分布情況(kg，%)

種莖等級(jí)地上部分產(chǎn)量種莖產(chǎn)量 一級(jí) 二級(jí) 三級(jí) 莖徑分布比重莖徑分布比重莖徑分布比重三級(jí)16.2±1.8a49.7±1.8b26.517.755.054.518.027.8二級(jí)16.7±0.8a54.2±1.9a26.438.755.552.018.19.3一級(jí)17.2±2.6a56.5±1.9a38.250.352.844.29.05.6

注：不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(p<0.05)。

3 討 論

雖然文獻(xiàn)[4]報(bào)道，魚(yú)腥草可以一年四季隨挖隨種，但是春季經(jīng)過(guò)萌發(fā)的種莖發(fā)芽率低、發(fā)芽和根率低；多年生種莖木質(zhì)化老根多、根條彎曲，發(fā)芽率、發(fā)芽和根率低，多年生地下莖和經(jīng)過(guò)萌發(fā)的地下莖不適宜用作種莖。確需使用萌發(fā)過(guò)或多年生種莖的，建議增加種莖用量。魚(yú)腥草長(zhǎng)期無(wú)性繁殖容易導(dǎo)致病原積累，在發(fā)芽率測(cè)定試驗(yàn)中觀察到部分樣品帶白絹病，表現(xiàn)為節(jié)間暗褐色，軟化腐爛，影響種莖發(fā)芽率、發(fā)芽和根率。撿出腐爛的種莖置于培養(yǎng)皿中保濕培養(yǎng)，可長(zhǎng)出大量白色絲狀菌絲體，最終形成似油菜籽的褐色菌核。目前魚(yú)腥草種莖多為農(nóng)戶自留種或異地引種，播種前種莖需進(jìn)行藥劑浸泡消毒。

本研究建立了魚(yú)腥草種莖切斷為短段測(cè)定發(fā)芽率、百節(jié)鮮重的方法，采用莖徑作為分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，莖徑粗表明種莖營(yíng)養(yǎng)儲(chǔ)備好，新鮮水分足，發(fā)芽率等各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)好，在生產(chǎn)中推廣直觀易行?？紤]到不同產(chǎn)地種質(zhì)資源、環(huán)境、栽培技術(shù)的差異，生產(chǎn)實(shí)踐中進(jìn)行種莖選擇時(shí)，建議根據(jù)各地具體情況選擇適宜的等級(jí)的種莖進(jìn)行大田生產(chǎn)。如各產(chǎn)地種莖普遍二級(jí)種莖比例高，推薦二級(jí)種莖用于大田生產(chǎn)，一級(jí)種莖比例少，推薦用作良種繁育；對(duì)于較細(xì)的種源種莖，如湖北當(dāng)陽(yáng)種莖(≥4 mm的粗種莖比例低于5%)，大田生產(chǎn)可用二級(jí)和三級(jí)種莖；普通種源種莖不推薦小于3 mm的種莖用于大田生產(chǎn)。