藥膳干預對衰老大鼠骨骼肌抗氧化能力的影響

李 魏 劉曉亭

(遼寧中醫(yī)藥大學，遼寧 沈陽 100847)

肌肉衰減綜合征是一種以老年人骨骼肌質量和骨骼肌力量及功能降低為主要特征的退行性病征，用以描述骨骼肌老化的進程〔1〕。其作為一種增齡性疾病，嚴重影響老年人的身體健康和正常生活，同時還增加老年人跌倒、骨折、糖尿病、肺炎等患病風險。本研究探討藥膳干預對衰老大鼠骨骼肌抗氧化能力的影響。

1 材料與方法

1.1實驗動物及飼養(yǎng) SPF級3月齡健康雄性SD大鼠30只，體重210～240 g,購于遼寧長生生物技術有限公司，許可證號SCXK-(遼)2015-0001。購入后于本學校實驗中心動物房IVC獨立送風飼養(yǎng)系統(tǒng)中在SPF條件下分籠飼養(yǎng)，以國家標準嚙齒類飼料喂養(yǎng)，自由飲食、飲水，溫度21℃±2℃，相對濕度55%±5%。

1.2藥品及試劑 黃芪、黨參、茯苓、白術、甘草購自沈陽市遼河大藥房；氯化鈉注射液購自遼寧民康制藥有限公司；D-半乳糖(gal)美國Genview公司產品；水合氯醛，北京Solarbio有限公司產品；超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒及丙二醛(MDA)試劑盒均購自天津市灝洋生物制品科技有限公司。

1.3衰老大鼠模型的建立 將30只大鼠隨機分為空白組、藥膳組和模型組，每組10只?？瞻捉M每日腹部皮下注射0.9%生理鹽水125 mg/kg，藥膳組和模型組每日腹部皮下注射7.5% D-gal 125 mg/kg，連續(xù)注射6 w〔2〕，建立衰老大鼠模型。將黃芪、黨參、茯苓、白術、甘草放入藥罐，加水浸泡30 min后武火煎煮20 min取汁；然后將粳米下入藥汁中，文火熬制湯汁濃稠，冷卻后濾去殘渣，存放于4℃冰箱保存。藥膳組每日予以藥膳10 ml/kg灌胃，空白組和模型組每日予以米湯10 ml/kg灌胃，持續(xù)4 w。

1.4指標檢測 末次灌胃禁食24 h后，稱大鼠體重，用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，行腹主動脈取血，然后取大鼠一側股直肌肌肉組織，按試劑盒說明檢測血清及骨直肌SOD、GSH-Px和MDA活性。

1.5統(tǒng)計學方法 應用SPSS17.0軟件進行t檢驗。

2 結 果

2.1藥膳干預后各組大鼠一般指標變化 空白組大鼠精神狀態(tài)佳，體毛白有光澤，反應靈敏，飲食排便正常；造模后，藥膳組與模型組大鼠體毛枯黃，有嚴重掉毛現(xiàn)象，喜臥懶動，攝食量減少，大便稀溏；藥膳干預后，藥膳組大鼠精神狀態(tài)好轉，較模型組好動，毛色相對潤澤，攝食增加，二便情況好轉；3組大鼠體重均平緩增加〔空白組(432.82±10.28)g、模型組(437.08±13.34)g、藥膳組(444.83±14.01)g〕，但組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.2各組SOD、GSH-Px活性及MDA含量變化 與空白組相比，模型組血清及股直肌SOD、GSH-Px活性顯著降低，MDA含量顯著增加(P<0.05)；藥膳組血清及股直肌SOD、GSH-Px活性顯著高于模型組，MDA含量顯著低于模型組(P<0.05)，見表1。

表1 各組血清及股直肌SOD、GSH-Px活性及MDA含量比較

與空白組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05

3 討 論

中醫(yī)學認為，脾主運化、主統(tǒng)血、主四肢肌肉，是“氣血生化之源”、“后天之本”，在中醫(yī)論著中有諸多論述?！端貑柤ⅰの迮K生成篇》曰：“脾主運化水谷之精，以生養(yǎng)肌肉，故主肉”?！短绞セ莘健吩唬骸捌⑽刚撸戎?，化為氣血，氣血充盛，營衛(wèi)流通，潤養(yǎng)身形，榮于肌肉也”，說明全身肌肉都有賴于脾胃運化的水谷精微及營養(yǎng)滋潤，如脾胃鍵運，則肌肉豐滿、壯實，四肢強勁有力。若脾失健運，則肌肉瘦削，甚或痿廢，進而導致肌肉衰減綜合征的發(fā)生?，F(xiàn)代醫(yī)學角度認為，脾主肌肉四肢、主運化的功能與線粒體為細胞各項生命活動供應能量、為肌肉收縮提供能量的功能在某種程度上是相似的，脾主肌肉亦是通過線粒體的功能來實現(xiàn)的〔3〕。劉友章等〔4〕研究發(fā)現(xiàn)，長期脾虛模型大鼠線粒體含量減少，結構遭到破壞。而通過四君子湯復健后，其線粒體含量增加，結構恢復也接近正常，證實脾與線粒體的相關性。

現(xiàn)代醫(yī)學認為，活性氧自由基(ROS)與肌肉衰減綜合征的發(fā)生有密切聯(lián)系。在骨骼肌衰老的過程中產生大量的自由基，導致骨骼肌氧化損傷，使骨骼肌細胞膜、線粒體及內質網(wǎng)等發(fā)生結構與功能改變，進而影響Ca2+轉運，導致骨骼肌的收縮功能發(fā)生變化〔5〕。正常情況下，機體內有一整套完整的ROS防御系統(tǒng)，即包括SOD、GSH-Px、過氧化氫酶(CAT)及谷胱甘肽轉移酶(GST)等在內的酶促防御系統(tǒng)，其能夠快速清除體內多余的ROS,使機體組織免受危害。SOD為活性氧的第一道防線，其水平影響機體的抗氧化能力。SOD活性降低將導致自由基堆積，而大量氧自由基可攻擊生物膜中不飽和脂肪酸，導致脂質過氧化物，如MDA的增加，進而加劇細胞膜的損傷。GSH-Px的主要作用是清除脂類氫過氧化物,保護細胞膜結構和功能完整，保護機體免受損害。SOD、GSH-Px活性及MDA含量對監(jiān)測組織的抗氧化水平及氧化損傷起重要作用。

線粒體是產生氧自由基的部位,同時也是自由基的重要攻擊目標,過高的自由基水平使線粒體受到的損傷不斷累積,導致肌細胞抗氧化能力降低，細胞完整性遭到破壞，進而導致骨骼肌的能量供應不足、功能紊亂及肌肉衰減綜合征的發(fā)生，線粒體功能正常與否直接決定骨骼肌細胞生理功能的強弱。

肌肉衰減綜合征在中醫(yī)學屬于“痿證”的范疇，其病因病機多為脾胃虧虛，肌肉衰減綜合征治療原則應為補脾益氣，調理脾胃。而脾與線粒體在某種程度上又極為相似。本實驗將營養(yǎng)支持與藥物治療相融合，選取補氣健脾經(jīng)典方劑-四君子湯中的黨參、茯苓、白術、甘草四味藥，加上補氣生肌的黃芪及粳米等組成新的藥膳方，對衰老大鼠進行藥膳灌胃，進而觀察骨骼肌抗氧化能力的變化。

本文結果顯示，與空白組相比，模型組血清、股直肌中SOD和GSH-Px活性降低，MDA含量增加，這是因為D-gal致衰老大鼠與自然衰老大鼠衰老程度相似〔6～8〕，所以模型組大鼠因為年齡的增加，出現(xiàn)了骨骼肌抗氧化能力降低，骨骼肌細胞膜結構和功能完整性受損，導致體內氧化損傷增加，產生大量氧自由基。而高水平的氧自由基又作用于線粒體，造成線粒體損傷〔9〕,進而導致骨骼肌質量和骨骼肌力量及功能的降低，促進了肌肉衰減綜合征的發(fā)生。同時模型組大鼠抗氧化能力的降低及氧化損傷的增加，也反過來證實了注射D-gal制備衰老動物模型這一方法的可靠性與可行性。而通過藥膳干預后，結果說明通過補脾益氣能夠提高線粒體的抗氧化能力，減輕體內的氧化損傷，減少骨骼肌的損傷，進而延緩肌肉衰減綜合征的發(fā)生。本實驗表明，通過補脾益氣藥膳對衰老大鼠進行干預，可提高衰老大鼠的抗氧化能力，減輕氧化損傷，從而延緩骨骼肌的衰老，減緩肌肉衰減綜合征的發(fā)生。