種雞場稀釋精液人工輸精技術(shù)*

劉開明 ，朱立軍 ，王壯波

（1.桃源青林回族維吾爾族鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)和農(nóng)村經(jīng)營管理服務(wù)站，湖南 桃源 415700；2.湖南佳牛牧業(yè)科技有限公司，湖南 長沙 410131；3.桃江縣畜牧水產(chǎn)局，湖南 益陽 413400）

湖南年出籠家禽約4億羽，在養(yǎng)殖業(yè)中位居第二。如采用自然交配，則公雞母雞比例為1：10。如果采用人工輸精，則為1：30左右。若將原精稀釋 2～3 倍，則可將公母比例擴大到l：60～90，能充分提高優(yōu)秀種公雞個體的利用率、種蛋受精率，加速良種擴繁，還能大幅度減少種公雞的飼養(yǎng)量，節(jié)約飼料及其它費用開支、提高種雞場的經(jīng)濟效益。

1 器具的準備

1.1 器具 20倍便攜式視屏溫控顯微鏡，冷藏箱，恒溫干燥箱，輸精器，2ml、10ml離心管，載玻片、蓋玻片，衛(wèi)生紙，雞精液稀釋液或0.9%生理鹽水，10μl、1ml移液器及配套槍頭等。

1.2 器具清洗與消毒 需要重復(fù)使用的載玻片、蓋玻片、2ml離心管、移液器槍頭等，使用后立即用清水浸泡（新購器具添加洗滌液浸泡，再用毛刷清洗），清洗干凈，最后 100℃沸水煮30min消毒。包裝后置70℃烘箱或者消毒柜中備用。

2 雞精液稀釋液保存方法

可以選用雞專用精液稀釋液，如HF雞精液稀釋液(發(fā)明專利號ZL201510660641.4，生產(chǎn)許可批文號 Q/OCKA017-2016),應(yīng)將5ml/支的稀釋液在采精前一晚提前從-20℃左右的冷凍室移入冰箱冷藏室解凍備用，稀釋液保存必須防止污染，用干凈塑料袋密封好，尤其是管口保持干凈，再放入冰箱冷凍室保存?zhèn)溆?。如用生理鹽水作稀釋液，則為常溫保存。

3 種公雞采精方法

多采用背腹按摩采精法，具體操作因種雞場設(shè)備和技術(shù)人員而異，常采用雙人站立式和坐式兩種方法?，F(xiàn)以雙人站立式背腹部按摩采精方法介紹如下：

1人保定公雞，1人按摩采精同時接取精液。首先公雞保定者從種公雞籠中用一只手抓住公雞的雙腳，將公雞腹部置于雞籠門沿上，尾部稍抬高。采精者站在保定者左側(cè)，用右手食指與中指或無名指夾住采精杯，采精杯口朝向手背防止雞身上灰塵掉進杯中。采精者左手大拇指和食指自然分開微彎曲，手掌心向下從公雞的背鞍部向尾羽方向由輕到重來回撫摩數(shù)次，同時持采精杯的右手大拇指和其余四指分開，從公雞的腹部向肛門方向緊貼雞體作同步按摩，左右手配合默契。按摩幾次后，公雞很快出現(xiàn)性反射動作，尾部向上翹起，肛門也向外翻，看到生殖器勃起時，左手迅速轉(zhuǎn)向尾下方，用左手拇指和食指迅速跨捏在泄殖腔上兩側(cè)，順勢將泄殖腔周圍羽毛向后壓（這種方法可以避免剪毛），輕輕擠壓，使肛門更明顯地向外翻出，當露出乳狀突起時，一松一緊地施加適當壓力，看到公雞射出乳白色精液時，右手迅速將集精杯口接外流的精液。精液排完后，采精者用吸管將精液吸入集精杯中 （也可將采精杯當集精杯進行連續(xù)采精），而抓公雞的保定助手將公雞關(guān)入籠中，接著換另一羽公雞采精。建議使用帶喇叭口的集精杯，一旦有污染的精液，可趁其在邊沿處時擦掉，有效控制糞便污染。

4 精液質(zhì)量檢測

4.1 精液的外觀檢測 正常公雞精液的顏色為乳白色，不透明，精液略帶腥味。如果精液顏色混有血液則呈粉紅色，混有糞便呈黃褐色，混有尿酸鹽呈白色棉絮狀，混有大量透明液的呈清水狀，有病無精子的呈黃水狀，精液顏色異常者均不宜輸精。種公雞射精量在0.2～1.0ml左右，平均射精量為0.4ml，主要依雞的品種、年齡、生理狀況、光照制度、飼養(yǎng)與管理條件而不同，同時與公雞使用制度和采精的熟練程度有關(guān)。

4.2 顯微鏡檢測方法

4.2.1 原精液檢測 用2ml離心管采集公雞精液，每輪采集（5～10）只公雞，控制在 30min內(nèi)檢測完，檢測完一批后再繼續(xù)下一輪采集。取載玻片置于32℃顯微鏡恒溫板上預(yù)熱至恒溫，吸7～12μl于載玻片上，選取5個不同部位的視野進行密度與活力評定，判定標準如下：

活力評定分3級：“A”，即大群精子像開水煮沸，或呈云霧狀旋窩、波浪狀翻滾；“B”，即大群精子呈快速直線前進運動，形成許多條抖動的S形曲線；“C”，即大群精子游動速度較慢，或者呈旋轉(zhuǎn)、轉(zhuǎn)圈運動。“B”以上等級精液判定為合格。

密度評定也分3級：“密”，指在顯微鏡下，整個視野完全被精子沾滿，幾乎看不到精子間的空隙和單個精子個體的運動情況，此時精子的密度每毫升為40億以上；“中”，指視野中精子之間有相當于1個精子長度的明顯空隙，可見到單個精子的活動，此時精子密度每毫升為20億～40億；“稀”，指視野內(nèi)精子之間的空隙很大，稀疏分散，能容納2個或者2個以上精子，精液密度每毫升為20億以下。

4.2.2 稀釋精液檢測 根據(jù)待檢公雞數(shù)量，準備含稀釋液的2ml離心管，并根據(jù)公雞所在欄舍位置在管上標記對應(yīng)編號，置于室溫。手緊握含稀釋液（0.5ml）的2ml離心管，每只公雞單獨采集精液(0.5ml左右)，采完后搖勻，放入冷藏箱，依次采完所有公雞，帶入顯微鏡室集中檢測。

為了不影響正常輸精，也可以在每只公雞的2ml離心管只留下一定量稀釋后精液 （如0.2ml）并冷藏，其余抽取到集精杯中用于輸精。

從冷藏箱中拿出稀釋精液，輕輕搖勻，按以上方法進行檢測，密度按原精方法判斷，活力在0.7以上為合格，判定方法方法見表1。

表1 雞精子活力等級判定表

種公雞開始采精時，即25周齡左右檢測1次；使用至中期，即60周齡左右檢測1次；或者根據(jù)生產(chǎn)需要隨時檢測。對于原精液檢測不合格的，應(yīng)稀釋后檢測，如果稀釋后檢測仍不合格的，應(yīng)隔天稀釋后復(fù)檢。對于復(fù)檢不合格的，應(yīng)加強飼養(yǎng)管理或淘汰處理。

5 精液稀釋程序

5.1 預(yù)熱方法 精液稀釋的原則是“等溫及時溫和稀釋”。采用34℃左右水浴或者恒溫箱預(yù)熱20～30min，或者提前至少30min將稀釋液放入貼膚口袋中預(yù)熱（冬天上身貼近皮膚口袋，夏天為貼近皮膚褲袋），稀釋液越貼近皮膚接近體溫越好，稀釋時稀釋液與雞精液的溫差不超過3℃。稀釋后就沒有必要保溫了。

5.2 稀釋液用量 輸精工作人員應(yīng)根據(jù)當天需要進行人工輸精的母雞數(shù)，按原精與稀釋液1:1～2的比例計算稀釋液量進行。

5.3 精液稀釋方法 可以采用以下兩種方式進行稀釋：

5.3.1 先加稀釋液后采精 按指定稀釋倍數(shù)，先將已經(jīng)預(yù)的稀釋液倒入容量為10ml的集精管中，再逐步采集相應(yīng)體積的精液，精液與稀釋液自然混勻。

5.3.2 先采精再加稀釋液 用10ml離心管采集4ml精液后，再緩緩倒入相應(yīng)體積的稀釋液，用集精管蓋蓋住管口，輕輕顛倒混勻6次左右，觀察混合精液顏色是否均勻，如不均勻要繼續(xù)顛倒混勻。

5.4 稀釋精液品質(zhì)要求與注意事項 稀釋后活力，不低于0.8。輸精量，采用稀釋精液輸精時，一次輸精有效精子數(shù)不低于0.43億，1：1稀釋的輸精量不低于 0.03ml，1：2稀釋的輸精量不低于0.035ml。如果種雞場采用異地或遠距離輸精時，應(yīng)將稀釋后精液密閉于離心管中，管中留有約1/3空間，5℃左右冷藏運輸，途中避免劇烈顛簸，4h內(nèi)完成輸精。

6 母雞輸精技術(shù)

6.1 輸精方法 母雞輸精操作一般為兩人協(xié)作完成，一人抓雞并翻肛，一人輸精。兩人輸精操作時，負責抓雞員用左手握住母雞的雙腳，將雙腳拉至籠門外，使雞的胸部貼于籠門下緣，以增加母雞腹腔內(nèi)壓力。抓雞員用右手大拇指和食指橫跨泄殖腔上下兩側(cè)，用大拇指擠壓腹部使母雞產(chǎn)生腹壓，肛門會自然外翻，當看到粉紅色陰道時（輸卵管的開口在泄殖腔的左側(cè)），就可將吸有一定量精液的吸管插入陰道約1.5cm深，并迅速輸入精液，隨即讓翻肛的手離開，抽出輸精管即可。抓雞人員松開右手，左手將母雞推回籠內(nèi)。輸精后的吸嘴用脫脂棉擦拭消毒，再吸入精液等待給下1只母雞輸精。

6.2 輸精時應(yīng)注意事項

6.2.1 輸精過程中要保持雞舍環(huán)境安靜，降低公雞和母雞的驚恐，減少應(yīng)激。

6.2.2 在給種雞輸精時人員要固定。翻肛用力不能太猛，輸精時動作要輕緩，插入輸精管不要用力過大，損傷母雞和造成輸卵管發(fā)炎。

6.2.3 輸精時遇到子宮內(nèi)有硬殼蛋時動作要輕，而且要將輸精管偏向一側(cè)緩慢插入輸精。防止將輸卵管內(nèi)的蛋擠破，造成輸卵管炎或腹膜炎。

6.2.4 由于稀釋的精液粘稠性降低，很容易造成精液倒流，輸精時助手要放松對母雞腹部壓力，防止稀釋精液倒流。

6.2.5 母雞一般每間隔4～5d輸精1次，如果母雞是首次輸精，那么建議第二天繼續(xù)輸精一次，輸精后48h后收集種蛋。每次輸精應(yīng)在大部分母雞產(chǎn)完蛋后進行，一般在下午3～5點較好。因為這段時間母雞基本都已產(chǎn)蛋，子宮內(nèi)無蛋時輸精才會得到較高的受精率。如提前輸精，因子宮里有硬殼蛋，會影響精子在輸卵管逆向運動，使種蛋受精率明顯下降。

7 小結(jié)

種雞場采用稀釋精液進行人工輸精時，盡量進行公雞精液顯微鏡檢測，保證每只公雞精液都是合格的。采用本文的精液檢測方案，可以檢測原精，可以不影響正常輸精，可以一天檢測幾百只公雞精液。采用本文精液稀釋技術(shù)，比原精輸精節(jié)約公雞飼養(yǎng)量，同時降低采精勞動強度，減少公雞育成費用，又增加母雞籠位，還可提高種受精率；一輪使用4ml一支的稀釋液，再采集4ml精液，免去了繁瑣的定量吸液操作，也更容易混勻；采用體溫預(yù)熱稀釋液，免去繁瑣的水浴加熱等，這些改進可以達到種雞場推廣精液稀釋技術(shù)不需額外增加人員的目的。