復(fù)方中草藥添加劑對斷奶仔豬生產(chǎn)性能、免疫及抗氧化能力的影響

胡 健，王 燕

（江蘇奧邁生物科技有限公司，南京 211225）

在現(xiàn)代養(yǎng)豬生產(chǎn)中，為了提高母豬的生產(chǎn)效率和畜欄的利用率，普遍采用的是早期斷奶技術(shù)（一般采用3～5周齡斷奶）。但由于仔豬的消化系統(tǒng)和免疫器官發(fā)育尚不完善。早期斷奶后，來自于外界環(huán)境因素的改變，可引起仔豬消化能力不足和免疫力下降，因而會出現(xiàn)食欲下降、消化不良、煩躁不安、腹瀉、飼料轉(zhuǎn)化率低、生長緩慢等一系列問題，被稱之為“早期斷奶綜合征”。如何提高仔豬的免疫功能，減少仔豬腹瀉是提高斷奶仔豬生產(chǎn)性能中亟待解決的一大課題。單純應(yīng)用抗生素防治可以降低斷奶仔豬的發(fā)病率，但是抗生素長期、大量使用或濫用會導(dǎo)致抗藥性、耐藥性和藥物殘留，并可能會通過食物鏈危及到食品安全和人類健康。因此尋找安全、無污染的抗生素替代品作為飼料添加劑已是當(dāng)務(wù)之急。中草藥飼料添加劑作為一種純天然的“綠色”添加劑，其中含有的氨基酸、揮發(fā)油、多糖類、維生素、生物堿等生物活性成分能有效預(yù)防細(xì)菌和病毒性疾病的發(fā)生，并且能夠緩解畜禽的應(yīng)激反應(yīng)、提高機體的免疫力，是一種既無抗藥性和耐藥性，也無藥害殘留、無污染的一類天然產(chǎn)品。

本試驗結(jié)合仔豬斷奶時期特殊的生理特點和中草藥的功能特性，研發(fā)針對解決斷奶仔豬生長緩慢和腹瀉率高等問題的中草藥添加劑配方，通過測定仔豬的生產(chǎn)性能、腹瀉率以及對血清中免疫球蛋白、細(xì)胞因子和抗氧化酶活性，來驗證該配方的有效性，以期提高養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟效益。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與飼養(yǎng)管理

選擇平均體重相近8±0.5 kg、健康狀況良好的（32±2）日齡斷奶的大白仔豬90頭。按照豬場常規(guī)的飼養(yǎng)管理程序和免疫程序進(jìn)行，豬舍采用的是半開放式、地面是漏縫地板結(jié)構(gòu)，獨立可調(diào)式料槽，按壓乳頭式飲水器，仔豬基礎(chǔ)日糧為玉米-豆粕型全價配合飼料，粉料型。每日添料兩次，保證自由采食，自由飲水。每日早晚各清掃豬舍兩次，觀察豬的采食、生長發(fā)育、腹瀉等情況。

1.2 試驗設(shè)計

將90頭仔豬隨機分為5組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)6頭豬。5個組分別為：空白對照組（基礎(chǔ)日糧），中草藥組Ⅰ（基礎(chǔ)日糧+0.1%中草藥），中草藥組Ⅱ（基礎(chǔ)日糧+0.3%中草藥添加劑）；中草藥組Ⅲ（基礎(chǔ)日糧+0.5%中草藥添加劑）；抗生素組（基礎(chǔ)日糧+0.5%金霉素+0.5%吉他霉素）。

1.3 試驗時間及地點

試驗于2017年5月～6月于江蘇沭陽禾嘉牧業(yè)有限公司進(jìn)行，試驗期28 d。

1.4 中草藥復(fù)方添加劑配方

本產(chǎn)品是由江蘇奧邁生物科技有限公司研制，配方已獲得發(fā)明專利（申請?zhí)枺?01710367538.X），按重量份數(shù)計，主要由以下中草藥原料組成：麥冬8～14份、牛至4～8份、冬青葉6～16份、銀杏葉3～7份、益母草8～14份、艾葉10～20份、馬鞭草7～13份、鴨跖草8～16份、魚腥草6～12份、忍冬9～13份、甘草3～7份、淮山藥4～8份、麥芽3～7份、枳實5～10份、蒲公英4～6份、山楂10～20份、板藍(lán)根8～16份。經(jīng)低溫超微粉碎步驟粉碎至粒徑為10～12 μm的超微顆粒并采用噴霧干燥法得到的粉末狀復(fù)方中草藥添加劑。

1.5 飼糧組成

基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平 DM

1.6 樣品采集

于試驗的0、7、14和28 d每天7:00～8:00，保證仔豬空腹情況下，采用前腔靜脈法采血，每個重復(fù)組隨機選擇3頭采樣，采血5 mL，待凝血后，使用超低溫離心機于3 000 r·min-1時，離心15 min，使分離血清，分裝、備用。用于檢測仔豬血清中免疫指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)。

1.7 測定指標(biāo)及方法

1.7.1 生產(chǎn)性能的測定

試驗開始后記錄各處理每個重復(fù)組每周采食量,并分別于試驗開始后0、7、14和28 d空腹稱重，計算出各階段以及全期平均日增重、日采食量和料重比。

每日仔細(xì)觀察斷奶仔豬糞便情況，以重復(fù)為單位進(jìn)行一記錄腹瀉情況，根據(jù)腹瀉仔豬耳標(biāo)號進(jìn)行持續(xù)天數(shù)統(tǒng)計，以便進(jìn)行腹瀉率的統(tǒng)計計算。腹瀉率計算公式見式1。豬腹瀉發(fā)生的時間與次數(shù)，1 d 1頭仔豬發(fā)生腹瀉記為1頭次。

1.7.2 血清免疫球蛋白的測定

利用免疫透射比濁法測定血清樣本中的lgG、lgM、lgA濃度，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。利用CX4型自動血液分析儀進(jìn)行測定。

1.7.3 血清中細(xì)胞因子的測定

利用ELISA法測定血清樣本中的白介素6（IL-6）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的濃度，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.7.4 血清中抗氧化酶活性的測定

利用ELISA法測定血清樣本中的丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和總抗氧化能力（T-AOC），試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.8 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件One Way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計分析，并進(jìn)行Duncan's多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)方中草藥添加劑對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響

復(fù)方中草藥添加劑對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響見表2。

由表2可知，在初始體重保持一致的條件下，中草藥Ⅱ組（0.3%）28 d后的末重顯著高于空白對照組（P＜0.05），而中草藥Ⅰ組（0.1%）、中草藥Ⅲ組（0.5%）及抗生素組與空白對照組相比差異不顯著（P＞0.05），且這幾組也無顯著的組間差異。中草藥Ⅱ組（0.3%）和中草藥Ⅲ組（0.5%）的平均日增重和平均日采食量均顯著高于空白對照組和中草藥Ⅰ組（0.1%）（P＜0.05），而中草藥組Ⅰ組（0.1%）和抗生素組的平均日增重和平均日采食量與空白對照組相比均無顯著差異；通過對料肉比的計算結(jié)果可見，中草藥Ⅱ組（0.3%）的料肉比最低。中草藥Ⅱ組（0.3%）和中草藥Ⅲ組（0.5%）的第2和4周采食量均顯著高于空白對照組和中草藥組Ⅰ組（0.1%）（P＜0.05）。

復(fù)方中草藥添加劑對斷奶仔豬腹瀉率的影響見表3。

由表3可知，與空白對照組相比，中草藥Ⅲ組（0.5%）和抗生素組的腹瀉率均顯著降低（P＜0.05），而中草藥Ⅰ組（0.1%）和中草藥Ⅱ組（0.3%）與空白對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 復(fù)方中草藥添加劑對斷奶仔豬血清中免疫球蛋白水平及細(xì)胞因子濃度的影響

復(fù)方中草藥添加劑對斷奶仔豬血清中免疫球蛋白濃度的影響見表4。

由表4可見，中草藥Ⅲ組（0.5%）的仔豬血清中的IgG濃度顯著高于空白對照組（P＜0.05）和中草藥Ⅰ組（0.1%）（P＜0.05）?？瞻讓φ战M、中草藥Ⅰ組（0.1%）和抗生素組的仔豬血清中的IgG濃度差異不顯著（P＞0.05）。IgA和IgM在各組間均無顯著差異。

表2 復(fù)方中草藥添加劑對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響

表3 復(fù)方中草藥添加劑對斷奶仔豬腹瀉率的影響

表4 復(fù)方中草藥添加劑對斷奶仔豬血清中免疫球蛋白濃度的影響 mg·dL-1

復(fù)方中草藥添加劑對斷奶仔豬血清中細(xì)胞因子水平的影響見表5。由表5可知，對仔豬血清中的TNF-α和IL-6水平的測定發(fā)現(xiàn)，抗生素組的仔豬血清中的IL-6水平在數(shù)值上最高，但與其他組相比差異不顯著。各組的TNF-α水平均無顯著差異（P＞0.05）。

表5 復(fù)方中草藥添加劑對斷奶仔豬血清中細(xì)胞因子水平的影響mg·dL-1

2.3 復(fù)方中草藥添加劑對斷奶仔豬血清中MDA含量及抗氧化酶活性的影響

復(fù)方中草藥添加劑對斷奶仔豬血清中MDA及抗氧化酶活性的影響見表6。

由表6可知，空白對照組的仔豬血清中的脂質(zhì)過氧化標(biāo)志物-MDA的濃度顯著高于抗生素對照組（P＜0.05），而與中草藥的3個濃度梯度組相比并無顯著差異（P＞0.05）。中草藥Ⅱ組（0.3%）和Ⅲ組（0.5%）仔豬血清中的GSH-Px活性均顯著高于空白對照組（P＜0.05）。SOD活性在幾組之間差異不顯著（P＞0.05），而T-AOC的活性在中草藥Ⅲ組（0.5%）最高，但與其他組相比無顯著差異（P＞0.05）。

表6 復(fù)方中草藥添加劑對斷奶仔豬血清中MDA含量及抗氧化酶活性的影響

3 討論

試驗的中草藥配方中，艾葉和魚腥草具有健胃、解毒、退熱、鎮(zhèn)痛、止血等功效，對豬流感的治療具有明顯效果[1-2]。卞榮星等對牛至的研究表明，牛至精油具有很好的控制仔豬腹瀉和促生長的效果[3]。江山等利用含益母草的中草藥飼喂斷奶仔豬，可顯著提高仔豬的生產(chǎn)性能和降低腹瀉率[4]。馬鞭草、冬青葉對治療仔豬白痢的效果明顯[5-6]。黃其春等發(fā)現(xiàn)，銀杏葉提取物可提高斷奶仔豬的生長性能，降低料肉比，顯著降低斷奶仔豬血清尿素氮和血糖濃度，提高血清堿性磷酸酶活性和提高生長相關(guān)激素即血清生長激素和三碘甲腺原氨酸水平，促進(jìn)仔豬生長，并可提高提高斷奶仔豬血液紅細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白質(zhì)量濃度和淋巴細(xì)胞百分率，促進(jìn)血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA和補體C3、C4的生成以及細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ的分泌[7]。研究表明，銀杏提取物能增強斷奶仔豬的免疫功能[8]。鴨拓草具有治療仔豬水腫病等功效[9]。華瑩等研究表明，在斷奶仔豬日糧中添加山楂粉可提高仔豬白細(xì)胞參數(shù)、降低血清中脂質(zhì)過氧化標(biāo)志物MDA濃度，減少由斷奶應(yīng)激造成的氧化應(yīng)激，具有提高日增重，減少腹瀉率等作用[10]。唐才果研究表明，板藍(lán)根可提高仔豬生產(chǎn)性能、增強免疫力、降低仔豬腹瀉[11]。本試驗研究結(jié)果表明，與空白對照組相比，按照0.3%和0.5%添加本復(fù)合中草藥添加劑產(chǎn)品，可顯著提高斷奶仔豬的平均日增重和平均日采食量，且和抗生素組相比也顯著差異，這說明該中草藥的添加，有利于促進(jìn)仔豬采食量的增加，提高增重和飼料轉(zhuǎn)化效率，且0.3%～0.5%的添加效果最佳，可顯著提高飼料轉(zhuǎn)化率，提高仔豬抵抗疾病能力，減少仔豬腹瀉現(xiàn)象的發(fā)生，作用效果與添加抗生素相當(dāng)。

血清中的SOD可能催化自由基的歧化反應(yīng)，GSH-Px可清除脂質(zhì)過氧化物，而T-AOC代表著血清中氧化酶系統(tǒng)的活性，這些抗氧化酶活性可有效保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整性，是機體內(nèi)重要的抗氧化系統(tǒng)的主要構(gòu)成[12]。MDA是生物體內(nèi)自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，MDA的大量堆積會引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合，且具有細(xì)胞毒性。體內(nèi)MDA含量可間接反應(yīng)機體的氧化應(yīng)激狀態(tài)[13]。試驗結(jié)果表明，抗生素組中的MDA水平顯著低于空白對照組，而中草藥的3個不同濃度試驗組中的MDA水平和抗生素組相比無顯著差異，說明中草藥起到了與抗生素類似的作用，可緩解機體的氧化應(yīng)激水平。另外，中草藥Ⅱ組（0.3%）和Ⅲ組（0.5%）血清中的GSH-Px活性均顯著高于空白對照組，卻與抗生素對照組相比，無顯著差異，且中草藥Ⅱ組（0.3%）和Ⅲ組（0.5%）之間也無顯著差異。說明中草藥具有提高血清抗氧化酶活性的作用，增強斷奶仔豬對機體內(nèi)自由基的清楚能力，減少自由基對機體的損傷，且按照0.3%～0.5%的添加量來添加，可發(fā)揮最優(yōu)效果。但是，這些中草藥成分對自由基的清除機理尚需要進(jìn)一步的探索。

免疫球蛋白指具有抗體活性的動物蛋白，主要存在于血清中，可以在一定程度上反映其對外界病原菌和病毒的抵抗能力[14]。IgA、IgG、IgM是機體內(nèi)幾種主要免疫球蛋白，可保護(hù)機體免受外界病原菌和病毒等的感染，并降低動物腸道疾病的發(fā)生率[15]。IgG是斷奶仔豬血清中初級免疫應(yīng)答中最持久、最重要的抗體類型，是初級免疫應(yīng)答中最持久、最重要的抗體，在抗感染中起到主力軍的作用，可促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬作用的發(fā)揮、可與病毒抗原結(jié)合使其失去對宿主細(xì)胞結(jié)合的能力[16]。本研究表明，中草藥Ⅲ組（0.5%）的仔豬血清中的IgG濃度顯著高于空白對照組和中草藥Ⅰ組（0.1%），且中草藥Ⅲ組與抗生素組相比，IgG濃度差異不顯著，這說明按照0.5%的添加量，可顯著提高仔豬血清的免疫球蛋白水平，并可以與使用抗生素達(dá)到同等水平，這也證實了該中草藥可替代部分抗生素，可增強仔豬的免疫能力。本產(chǎn)品中含有多糖、黃酮等生物活性成分，均具有免疫增強作用，可能是中草藥飼料添加劑中的有效成分具有多個發(fā)揮作用的靶點有關(guān)。而血清中的細(xì)胞因子IL-6和TNF-α均可反應(yīng)機體的免疫機能，其中，IL-6可反應(yīng)機體的的體液免疫水平，而TNF-α則TNF-α是一種參與機體免疫反應(yīng)的促炎癥細(xì)胞因子，主要由單核/巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，是一種多功能的多肽類細(xì)胞因子，可參與機體多種生理和免疫過程[17]。本研究中雖然未發(fā)現(xiàn)這兩種細(xì)胞因子在幾個組中存在顯著差異，但是根據(jù)以往的研究來看，中草藥添加劑對于提高仔豬的免疫能力方面起到非常重要的作用，通過提升豬瘟抗體水平、提高血清總蛋白濃度、免疫球蛋白IgG及補體C3水平發(fā)揮作用[18-19]。后續(xù)試驗也將重點關(guān)注中草藥對提高仔豬免疫能力的影響。

4 結(jié)論

試驗結(jié)果表明，在飼糧中添加中草藥飼料添加劑提高了斷奶仔豬的平均日增重、平均日采食量，提高了仔豬血清免疫球蛋白，降低仔豬腹瀉率，以添加量0.5%效果最好。