不同藥劑對南方根結(jié)線蟲的室內(nèi)毒力測定

李秋捷，陸秀紅，黃金玲，張禹，劉志明*，曾東強(qiáng)*

(1.廣西大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，廣西 南寧 530003； 2.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)研究所，廣西 南寧 530007)

根結(jié)線蟲病是重要農(nóng)作物病害之一，據(jù)孔祥義[1]的文獻(xiàn)記載，南方根結(jié)線蟲(Meloidogyneincognita)是引起農(nóng)作物根結(jié)線蟲病的主要種群。目前對根結(jié)線蟲病的防治主要以化學(xué)藥劑為主[2-3]。以高效、低毒、對環(huán)境友好為特點的新型非熏蒸類殺線蟲劑正不斷出現(xiàn)，并且逐漸取代上一代高毒性的殺線蟲劑藥劑。本試驗主要通過測定氟吡菌酰胺等4種殺線劑對南方根結(jié)線蟲的毒力，為根結(jié)線蟲的相關(guān)的防治研究以及田間防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

41.7%氟吡菌酰胺懸浮劑(拜耳作物科學(xué)有限公司)，75%噻唑膦乳油(河北三農(nóng)農(nóng)用化工有限公司)，200 g·L-1丁硫克百威乳油(蘇州富美實植物保護(hù)劑有限公司)，1.8%阿維菌素乳油(中國農(nóng)科院植保所廊坊農(nóng)藥中試廠)。

試驗對象為南方根結(jié)線蟲2齡幼蟲。從廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院溫室中的辣椒根部分離出南方根結(jié)線蟲的卵塊，經(jīng)單卵塊接種在辣椒上純化培養(yǎng)后，采集病根，挑取卵囊進(jìn)行孵化，獲得大量南方根結(jié)線蟲2齡幼蟲。

1.2 方法

1.2.1 藥劑的密度測量

試驗需要測定的LC50為質(zhì)量濃度，使用藥劑均以毫升為計量單位，需要測定密度進(jìn)行體積-質(zhì)量換算。將50 mL燒杯放置在千分天平上，去皮，然后將上述藥劑各加1 mL至燒杯中，記錄質(zhì)量，計算出各藥劑的密度。

1.2.2 藥液的配制

將41.7%氟吡菌酰胺懸浮劑用水稀釋成5、2.5、1.25、0.625和0.312 5 mg·L-1，75%噻唑膦乳油稀用水釋成100、50、25、12.5、6.25 mg·L-1，將200 g·L-1丁硫克百威乳油用水稀釋成1 200、600、300、150、75 mg·L-1，將阿維菌素乳油用水稀釋成0.08、0.04、0.02、0.01和0.005 mg·L-1。

1.2.3 線蟲懸浮液的制備

從根結(jié)線蟲病發(fā)病較為嚴(yán)重的辣椒的根部挑取根結(jié)線蟲卵囊置于培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿放置卵囊100個。培養(yǎng)皿置于恒溫箱中以25 ℃進(jìn)行孵化。每24 h在體視顯微鏡下使用一次性滴管收集根結(jié)線蟲至20 mL西林瓶中，制備線蟲懸浮液，根結(jié)線蟲懸浮液的濃度約為400頭·mL-1。

1.2.4 藥劑毒力的測定

取24孔細(xì)胞培養(yǎng)板(6×4)，每孔滴入線蟲懸浮液0.5 mL。每列為1個濃度處理，重復(fù)4次，各孔滴入藥液0.5 mL，使各藥劑在孔板中的濃度為41.7%氟吡菌酰胺懸浮劑2.5、1.25、0.625、0.312 5、0.156 3 mg·L-1，75%噻唑膦乳油50、25、12.5、6.25、3.125 mg·L-1，200 g·L-1丁硫克百威乳油600、300、150、75、32.5 mg·L-1，1.8%阿維菌素乳油0.040、0.020、0.010、0.005、0.002 5 μg·L-1。

1.3 根結(jié)線蟲的死亡判斷與統(tǒng)計分析

1.3.1 死亡判斷

可從線蟲形態(tài)來對根結(jié)線蟲的死亡做出快速判斷，死亡的線蟲身體僵直或有呈角度的彎折，未死亡的根結(jié)線蟲蟲體有呈弧度的彎折(圖1～2)。若從根結(jié)線蟲的形態(tài)無法明確判斷線蟲的死亡與否，可采用針刺法進(jìn)行判斷。

圖1 未死亡的根結(jié)線蟲

1.3.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

使用Excel對數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄與整理，使用IBM SPSS Statistics 23對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。處理24、48 h后，使用倒置顯微鏡觀察孔板內(nèi)線蟲的死亡情況，記錄根結(jié)線蟲總數(shù)以及死亡數(shù)，計算校正死亡率。

圖2 死亡的根結(jié)線蟲

2 結(jié)果與分析

2.1 藥劑密度

由表1可知，本次試驗中1.8%阿維菌素乳油對南方根結(jié)線蟲的毒力最高，并且明顯高于75%噻唑膦及200 g·L-1丁硫克百威。

表1 4種藥劑的密度

2.2 毒力

由表2可知，24、48 h處理的1.8%阿維菌素乳油對南方根結(jié)線蟲的LC50分別為0.009 785和0.008 481 μg·L-1；41.7%氟吡菌酰胺懸浮對南方根結(jié)線蟲的毒力低于1.8%阿維菌素乳油，但明顯高于75%噻唑膦乳油以及200 g·L-1丁硫克百威乳油；200 g·L-1丁硫克百威乳油對南方根結(jié)線蟲的毒力明顯低于上述藥劑。

表2 4種殺線蟲劑對根結(jié)線蟲的毒力測定運算結(jié)果

75%噻唑膦乳油與200 g·L-1丁硫克百威乳油對南方根結(jié)線蟲24、48 h毒力相差較大。75%噻唑膦乳油24、48 h的毒力分別為35.036、20.302 mg·L-1，丁硫克百威乳油的24、48 h毒力分別為567.777、171.374 mg·L-1。上述2種藥劑的48 h毒力明顯高于24 h毒力。

3 討論

1.8%阿維菌素乳油對南方根結(jié)線蟲表現(xiàn)出較高毒力，24h和48h處理對南方根結(jié)線蟲的LC50分別為0.009785和0.008481μg·L-1，該結(jié)果與已有試驗結(jié)果有較大差異。朱衛(wèi)剛等[4]測定的1.8%阿維菌素乳油對南方根結(jié)線蟲的LC50為1.48mg·L-1，張俊龍等[5]測定的1.8%阿維菌素乳油對南方根結(jié)線蟲的LC50為14.926mg·L-1，這可能是南方根結(jié)線蟲不同地域抗藥性水平有差異所致，需要更進(jìn)一步的試驗證實。鄒雅新等[6]測定的1.8%阿維菌素乳油對南方根結(jié)線蟲處理24和48h的LC50分別為0.00851和0.00734mg·L-1，與本次試驗的測定結(jié)果相近。另外，相對于75%噻唑膦乳油和200g·L-1丁硫克百威乳油而言，41.7%氟吡菌酰胺懸浮劑對南方根結(jié)線蟲也表現(xiàn)出了較高的毒力。