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    ELISA檢測(cè)豬尿中β-受體激動(dòng)劑類藥物影響因素研究

    2018-08-23 01:15:04李延山劉慶偉卞大偉徐國榮李洪根王小柱劉映雪張志遙
    關(guān)鍵詞:考星倫特羅尿樣

    李延山,劉慶偉,卞大偉,徐國榮,李洪根,王小柱,劉映雪,張志遙,田 穎

    (1.遼寧省畜產(chǎn)品安全監(jiān)察所,遼寧沈陽 110003;2.遼寧省黑山縣畜牧獸醫(yī)局,遼寧黑山 121400)

    β-受體激動(dòng)劑(俗稱“瘦肉精”)對(duì)畜產(chǎn)品安全和人類健康造成了極大威脅和影響,一直是人們關(guān)注的焦點(diǎn)。經(jīng)過多年的治理,非法使用“瘦肉精”行為得到有效遏制。但受利益驅(qū)使,少數(shù)不法生產(chǎn)經(jīng)營者違法使用“瘦肉精”問題始終難以根除,特別是生豬養(yǎng)殖、運(yùn)輸和屠宰等環(huán)節(jié)“瘦肉精”都有不同程度地檢出[1-2]。加強(qiáng)生豬養(yǎng)殖、運(yùn)輸和屠宰等環(huán)節(jié)“瘦肉精”的監(jiān)管,把住基層監(jiān)管的第一道關(guān)口,是有效遏制“瘦肉精”非法使用的關(guān)鍵一環(huán)。完善基層檢測(cè)手段是準(zhǔn)確及時(shí)完成工作任務(wù)的有力保障。在我們多年來的“瘦肉精”監(jiān)督檢測(cè)工作中發(fā)現(xiàn),采用ELISA檢測(cè)β-受體激動(dòng)劑類藥物中鹽酸克侖特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇的過程中,經(jīng)常出現(xiàn)不同程度的陽性率,有的經(jīng)過質(zhì)譜方法確證后結(jié)果為陰性[3-4]。這種ELISA檢測(cè)結(jié)果的不確定性一直困擾著基層監(jiān)督檢測(cè)人員,既耗時(shí)、耗力,又造成大量的浪費(fèi),給基層監(jiān)督工作帶來極大的不便,嚴(yán)重影響工作效率,為摸清干擾因素,完善基層“瘦肉精”監(jiān)督檢測(cè)手段,提高工作效率。我們針對(duì)生豬飼養(yǎng)中常用藥物及添加劑檢測(cè)進(jìn)行了干擾因素研究。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 藥物 替米考星預(yù)混劑(100 g/kg)、復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉、氟苯尼考粉(100 g/kg)、蛋氨酸鉻、ZnSO4·H2O,大連三儀動(dòng)物藥品有限公司提供。

    1.1.2 試驗(yàn)用動(dòng)物 健康生長(zhǎng)育肥豬,體重為50 kg~60 kg。

    1.1.3 試劑盒 克倫特羅酶聯(lián)免疫試劑盒、萊克多巴胺酶聯(lián)免疫試劑盒、沙丁胺醇酶聯(lián)免疫試劑盒,北京維德維康生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

    1.2 方法

    選擇體重為50 kg~60 kg的生長(zhǎng)育肥豬33頭,隨機(jī)分為6組。復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉(下稱H)組6頭、氟苯尼考粉(下稱F)組6頭、替米考星預(yù)混劑(下稱T)組5頭、蛋氨酸鉻(下稱C)組5頭、ZnSO4·H2O(下稱Z)組6頭,空白(下稱B)組5頭。分別對(duì)應(yīng)飼喂含有復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉(每天1次,飼喂?jié)舛?.2 g/kg),氟苯尼考粉(100 g/kg)(每天2次,飼喂?jié)舛?.3 g/kg),替米考星預(yù)混劑(100 g/kg)(每天1次,飼料中4 g/kg),蛋氨酸鉻(每天3次,按Cr元素計(jì)算飼料中150 mg/kg),ZnSO4·H2O(每天3次,按Zn元素計(jì)算飼料150 mg/kg),空白對(duì)照(每天3次)的飼料,并于連續(xù)飼喂3 d后的1、6、12、24 h時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行豬尿液采集,并將采集的尿液置于4℃冷藏備檢。

    2 結(jié)果

    結(jié)果見表1~表3??藗愄亓_最低檢測(cè)限為0.5 μg/mL。檢測(cè)結(jié)果表明,替米考星預(yù)混劑(100 g/kg)、復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉、氟苯尼考粉(100 g/kg)和蛋氨酸鉻、ZnSO4·H2O對(duì)ELISA檢測(cè)豬尿中克倫特羅無陽性結(jié)果出現(xiàn)(表1)。

    萊克多巴胺最低檢測(cè)限為0.5 μg/mL。檢測(cè)結(jié)果表明,替米考星預(yù)混劑(100 g/kg)、復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉、氟苯尼考粉(100 g/kg)和蛋氨酸鉻、ZnSO4·H2O對(duì)ELISA檢測(cè)豬尿中萊克多巴胺無陽性結(jié)果出現(xiàn)(表2)。

    沙丁胺醇最低檢測(cè)限為0.5 μg/mL。H組采集豬尿樣24份,假陽性結(jié)果7份,分別分布于6 h尿樣1份,12 h尿樣4份,24 h尿樣2份,假陽性率29.17%;F組采集豬尿樣24份,假陽性結(jié)果2份,全部分布于12 h后,假陽性率8.3%;T組采集豬尿樣20份,假陽性結(jié)果2份,全部分布于12 h后,假陽性率10%(圖1)。上述結(jié)果表明,替米考星預(yù)混劑(100 g/kg)、復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉、氟苯尼考粉(100 g/kg)對(duì)ELISA檢測(cè)豬尿中沙丁胺醇均有假陽性結(jié)果出現(xiàn)。飼料添加劑蛋氨酸鉻、ZnSO4·H2O對(duì)ELISA檢測(cè)沙丁胺醇無假陽性結(jié)果出現(xiàn)。

    表1 藥物、飼料添加劑對(duì)豬尿中克倫特羅ELISA檢測(cè)結(jié)果的影響

    表2 藥物、飼料添加劑對(duì)豬尿中萊克多巴胺ELISA檢測(cè)結(jié)果的影響

    綜上所述,替米考星預(yù)混劑(100 g/kg)、復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉、氟苯尼考粉(100 g/kg)對(duì)ELISA檢測(cè)豬尿中克倫特羅、萊克多巴胺無假陽性影響,對(duì)檢測(cè)沙丁胺醇有不同程度的假陽性影響。其影響程度為復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉(29.17%)>替米考星預(yù)混劑(10.0%)>氟苯尼考粉(8.3%)。飼料添加劑蛋氨酸鉻、ZnSO4·H2O對(duì)ELISA檢測(cè)豬尿中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇均無假陽性影響。

    3 討論

    沙丁胺醇為苯乙醇胺類β-受體激動(dòng)劑,分子母核中有2個(gè)呈弱酸性的酚羥基(-OH),可與磺胺氯噠嗪鈉中的-NH2發(fā)生反應(yīng)。從而使包被的沙丁胺醇消耗量增大,洗滌后殘留的抗原抗體復(fù)合物減少,進(jìn)而使結(jié)果假陽性率增多。這與本試驗(yàn)結(jié)果基本一致[5-6]。氟苯尼考和替米考星藥物也呈現(xiàn)假陽性,這與曹玉美等[7]的研究結(jié)果基本一致。尿液成分和藥物代謝過程較為復(fù)雜,具體原因仍需探究。

    表3 藥物、飼料添加劑對(duì)豬尿中沙丁胺醇ELISA檢測(cè)結(jié)果的影響

    克倫特羅、萊克多巴胺組未檢測(cè)到假陽性尿樣。說明上述3種獸藥在本試驗(yàn)中對(duì)ELISA檢測(cè)克倫特羅、萊克多巴胺未造成干擾。究其原因,可能與本試驗(yàn)未篩選到可能造成干擾的藥物或不同階段動(dòng)物代謝變化等原因,有待今后進(jìn)一步研究。

    楊照海[8]認(rèn)為,飼料中金屬離子含量太高會(huì)影響抗原抗體的結(jié)合,硫酸鋅會(huì)干擾尿樣的鹽酸克倫特羅檢測(cè),但在本試驗(yàn)中未見相同結(jié)果?,F(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道中對(duì)離子影響產(chǎn)生假陽性的報(bào)道較少,需進(jìn)一步確證。

    通過上述分析,一方面目前用于“瘦肉精”殘留快速檢測(cè)的ELISA 準(zhǔn)確性受環(huán)境、人員、工藝、畜種等多種因素制約,產(chǎn)生假陽性的原因也不盡相同[9-12]。本試驗(yàn)中選用的5種常用獸藥及飼料添加劑具有一定代表性但并不全面,會(huì)有一些干擾因素并未發(fā)現(xiàn)或找到。另一方面,在基層監(jiān)督檢驗(yàn)工作中,檢驗(yàn)人員應(yīng)不斷強(qiáng)化自身素質(zhì),盡量減少實(shí)驗(yàn)誤差,提高結(jié)果的準(zhǔn)確性。此外,在抽樣檢測(cè)前還應(yīng)詢問查證用藥記錄,盡可能避免在上述3種容易引起假陽性藥物的休藥期內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)過程中一旦出現(xiàn)疑似陽性,必須通過液相色譜-質(zhì)譜法等確證方法進(jìn)行確證,保證檢測(cè)結(jié)果的科學(xué)性與嚴(yán)謹(jǐn)性,從而為畜產(chǎn)品安全保駕護(hù)航[13-17]。

    圖1 ELISA檢測(cè)豬尿沙丁胺醇假陽性率比較

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