白細胞分類人工鏡檢與全自動血細胞分析儀檢查結(jié)果的比較

（大連大學(xué) 門診部，遼寧 大連 116622）

0 引言

對于早期發(fā)現(xiàn)和診斷全身性疾病，血常規(guī)測定是不可或缺的手段之一，可以反映出骨髓造血系統(tǒng)、血液循環(huán)系統(tǒng)和貧血等相關(guān)疾病情況[1,2]。作為機體免疫細胞之一的白細胞（White blood cell，WBC），在機體發(fā)生炎癥或其他疾病時，其分類計數(shù)是血液學(xué)檢驗的重要參考項目。報道顯示，WBC分類計數(shù)結(jié)果的可靠性是臨床疾病診斷和治療的重要依據(jù)[3]。傳統(tǒng)的人工顯微鏡鏡檢是常用的WBC分類法，但其操作費時費力、步驟繁瑣，近些年已被全自動血細胞分析儀所取代，后者極大地降低了工作強度，但臨床上對其結(jié)果是否準確仍有爭議全自動血細胞分析儀 Sysmex XN-10[B4]融合了激光技術(shù)和電阻抗法，把核酸熒光染色和半導(dǎo)體流式激光技術(shù)有機結(jié)合，進行全血細胞計數(shù)和白細胞分類[4,5]，大大減輕了檢驗人員的工作強度，但實際工作中儀器分類干擾因素很多，使結(jié)果產(chǎn)生偏差。本文以此為出發(fā)點，對我部新生入學(xué)體檢標本和大醫(yī)三院門診患者血常規(guī)標本的兩種結(jié)果進行比較，現(xiàn)匯報如下。

1 材料與方法

1.1 一般材料

選取我部2017年9月新生入學(xué)體檢血液標本75例用于檢測。另選大醫(yī)三院2017年8月至9月門診血常規(guī)檢測的患者126例，男性75 例，女性51例，二者比例1.47:1，年齡在12～68歲，平均41.4±4.5歲，選擇其中MO百分率在15%～25%的血液標本43例用于檢測。首診疾病為：急性單核細胞白血病、傳染性單核細胞增多癥、粒細胞減少癥、脾功能亢進、急性胃腸炎、流行性出血熱、貧血待查、急性粒細胞白細胞病和發(fā)熱待查等。

1.2 試劑與儀器

EDTA-K2真空抗凝管（德國Greiner Bio-One公司），人工鏡檢染色用瑞氏-姬姆薩染液（BASO珠海），Olympus CX31光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）；Sysmex XN-10[B4]全自動血細胞分析儀（帶原裝配套試劑、校準物和質(zhì)控品）。

1.3 檢查方法

對照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第4版），以抗凝血制備血涂片，用瑞氏-姬姆薩染色。參照CLSI-H20A2文件，由兩名副主任檢驗師，用雙盲法對展開較好、顏色適中和分散均勻的體尾交接處的白細胞進行分類檢測。取2張血片，每張分類100個白細胞取均值，鏡下注意辨別NE、LY、BA、EO和MO等各種細胞，同時觀察是否存在異常、幼稚細胞和其它非正常細胞。

用EDTA-K2真空抗凝管采集2ml靜脈血（防止溶血、凝集等發(fā)生），輕輕顛倒混勻8次后置室溫存放，用Sysmex XN-10[B4]全自動血細胞分析儀進行檢測，全部檢測在2hr內(nèi)完成。Sysmex XN-10[B4]血細胞分析儀報警內(nèi)容有：原始細胞、原始淋巴細胞、幼稚細胞、異形淋巴細胞、有核細胞和核左移等[6]。人工顯微鏡復(fù)檢標準：2.0×109/L＜WBC＜2.5×109/L、NE＞85%、LY＞65%、BA＞1.5%和EO＞6.5%。

1.4 觀測指標

①新生入學(xué)體檢血標本兩種分類方法WBC結(jié)果比較。血涂片用人工顯微鏡分類和Sysmex XN-10[B4]血細胞分析儀分類。

②門診血常規(guī)MO為15%～25%的血標本兩種分類方法WBC結(jié)果比較。對MO百分率在15%～25%的血液標本43例進行人工鏡檢分類和血細胞分析儀分類，把二者WBC分類結(jié)果進行比較。

③人工鏡檢結(jié)果和儀器報警提示的比較。計算公式：靈敏度=真陽性/真陽性+假陰性，特異度=真陰性/真陰性+假陽性；假陰性率=1-靈敏度，假陽性率=1-特異度。按儀器報警內(nèi)容進行人工顯微鏡復(fù)檢，得出儀器檢測的陰性率、陽性率和特異度、靈敏度[7,8]。

1.5 質(zhì)量控制

Sysmex公司提供的高、中和低值e-Check配套質(zhì)控品進行室內(nèi)質(zhì)控，原裝配套試劑。同時參加大連市臨床檢驗中心室間質(zhì)控，均取得較好的成績，從而確保了本次研究結(jié)果的準確性和可靠性。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

統(tǒng)計學(xué)分析用SPSS17.0軟件進行。正態(tài)分布的計量資料用X±S表示，非正態(tài)分布的資料用秩和檢驗，頻數(shù)比較用X2檢驗，組間比較用t檢驗，用單因素方差進行多組間均數(shù)比較，P＜0.05被認為有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 新生入學(xué)體檢標本人工鏡檢與儀器法WBC分類的比較

新生入學(xué)體檢標本人工鏡檢與儀器法檢測的中性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞的百分率比較，均無顯著性差異（P＞0.05）；嗜酸粒細胞、嗜堿粒細胞兩組比較，有顯著性差異（P＜0.05）（表1）。

表1 75例新生入學(xué)體檢標本人工鏡檢與儀器法WBC分類的比較

2.2 門診患者MO為15%～25%的標本人工鏡檢與儀器法WBC分類的比較

門診血常規(guī)檢查的患者126例中單核細胞占15%～25%的標本43例，用人工鏡檢和儀器法檢測的中性粒細胞、單核細胞和嗜酸粒細胞的百分率比較，均無顯著性差異（P＞0.05）；儀器法檢測的淋巴細胞和嗜堿粒細胞百分率高于人工鏡檢法，二者比較有顯著性差異（P＜0.05）（表2）。

表2 43例門診血常規(guī)MO為15%～25%的標本人工鏡檢與儀器法WBC分類的比較

2.3 人工鏡檢結(jié)果與儀器報警的比較

以人工鏡檢法作為白細胞分類的金標準，對126例門診患者的血常規(guī)結(jié)果進行比較。結(jié)果顯示：Sysmex XN-10[B4]測定的結(jié)果報警53例，經(jīng)人工顯微鏡復(fù)查確定真陰性為64例、真陽性為41例。計算得出：儀器白細胞分類計數(shù)的特異度為78.95%，假陽性率為21.05%，靈敏度為82.36%，假陰性率為17.64%（表3）。

表3 人工鏡檢結(jié)果與儀器報警的比較（例數(shù)）

3 討論

據(jù)報道，全自動血細胞分析儀目前可以完成每小時150例標本的檢測[9]。這一速度對提高檢驗結(jié)果的準確性和疾病的診斷效率、為患者爭取黃金治療時間意義重大，成為各醫(yī)療機構(gòu)檢驗科必備的檢測儀器。Sysmex全自動血細胞分析儀XN-10[B4]，融合了半導(dǎo)體激光、電阻抗和流式細胞等技術(shù)。光源采用半導(dǎo)體激光，具有消耗功率小、啟動快和壽命長的特點。白細胞計數(shù)采用先進的核酸熒光染色和流式激光原理，使白細胞計數(shù)不受巨大血小板、血小板簇、難溶紅細胞和細胞碎片的干擾。在檢測低值白細胞樣本時，儀器可自動或人工轉(zhuǎn)換至低值白細胞模式，使白細胞檢測顆粒數(shù)比普通檢測模式增加3～5倍，使檢測結(jié)果更加準確。這一設(shè)備還可以對胸腹水、腦脊液和關(guān)節(jié)腔積液等體液進行白細胞和紅細胞計數(shù)。白細胞分類采用的是激光光源、流式原理和細胞核酸熒光染色技術(shù)。這些先進技術(shù)的運用，在很大程度上降低了檢驗人員的工作強度。然而，日常工作中尤其在標本量大的新生體檢時，對于異常標本，完全依靠儀器檢測而忽視白細胞的人工顯微鏡鏡檢，會引起疾病的漏診和誤診。這是因為，血細胞分析儀在進行白細胞分類計數(shù)和全血細胞分析時，在原始細胞、幼稚細胞、單核細胞、巨大血小板、有核紅細胞和異型淋巴細胞等的形態(tài)分辨方面存在缺陷，從而無法對它們進行準確的分類，導(dǎo)致結(jié)果的假陰性或假陽性，造成鏡檢結(jié)果與儀器結(jié)果的差別大，相關(guān)性低。

本研究顯示，75例新生入學(xué)體檢標本人工鏡檢分類和儀器分類測得的NE、LY和MO的百分率，均無顯著性差異，而BA和EO的百分率有顯著性差異，這可能是由于BA在大多數(shù)標本中所占百分比較低，對分類的結(jié)果影響有限造成的。說明在新生體檢工作中，白細胞分類的人工鏡檢和XN-10[B4]檢查的結(jié)果同樣準確可靠。對門診血常規(guī)檢查的患者126例中單核細胞占15%～25%的標本43例，分別進行人工鏡檢分類和儀器分類，測得NE、MO和EO的百分率比較，均無顯著性差異（P＞0.05），但是儀器法測得LY和BA的百分率卻高于人工鏡檢法（P＜0.05）。上述結(jié)果形成的原因是：MO百分率為15%～25%多見于粒細胞缺乏癥恢復(fù)期、多發(fā)性骨髓瘤和傳染性單核細胞增多癥等疾病，這類患者標本中的原始、幼稚和異常細胞在溶血素的作用下，其細胞漿顆粒大小、染色質(zhì)疏松程度和細胞體積等特征均與單核細胞相似，儀器測定時會把這樣特點的細胞誤認作淋巴細胞[10]。同時，一些特殊疾病如活動性肺結(jié)核和急性感染恢復(fù)期、長期服用藥物等，其細胞表面電荷發(fā)生改變，這樣的細胞與正常血液標本的細胞相比體積會增大，也是造成上述結(jié)果的原因。有報道顯示，造成假陰性的細胞常為嗜酸和嗜堿性粒細胞[11,12]。導(dǎo)致假陽性的細胞常有：幼稚白細胞和異型淋巴細胞等。通過與人工鏡檢分類法比較，得出Sysmex XN-10[B4]白細胞分類計數(shù)特異度為78.95%，假陽性率為21.05%，靈敏度為82.36%，假陰性率為17.64%。

綜上，用Sysmex全自動血細胞分析儀XN-10[B4]進行白細胞分類測定時，對儀器報警結(jié)果應(yīng)重新采集標本進行復(fù)檢，尤其對血液病患者和WBC總數(shù)異常者，更要進行人工顯微鏡復(fù)檢。而人工鏡檢是血細胞形態(tài)學(xué)檢查的金標準，只有把人工鏡檢和儀器測定相結(jié)合，才能為臨床診斷提供準確的檢驗結(jié)果。