紙片法及B-P平板法定量檢測食品中金黃色葡萄球菌的臨床對照研究

毛漫漫

（遼寧省遼陽縣疾病預防控制中心檢驗科，遼寧 遼陽 111200）

金黃色葡萄球菌在自然界中普遍存在，是日常生活中最為常見的一種致病菌，特別是在食品中，是引起毒素型食物中毒的主要原因。在人類日常食品中存在的金黃色葡萄球菌數(shù)量超出一定范圍，可導致食用者有出現(xiàn)發(fā)熱、腹瀉、惡心及嘔吐等臨床表現(xiàn)，嚴重者還可導致食用者死亡[1]。本文主要分析了不同檢測方法在金黃色葡萄球菌檢測方面的應用價值，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料：選擇當?shù)厥袌黾俺袃鹊纳狻⑹烊庵破?、生牛奶、豆制品、水產(chǎn)品及糕點各40份作為樣品。用B-P培養(yǎng)基、平板計數(shù)瓊脂、金黃色葡萄球菌快速檢驗測試片、營養(yǎng)肉湯、BHI（腦心浸液）肉湯、卵黃亞碲酸鉀增菌劑、鮮兔血漿、革蘭染液與抗凝劑進行試驗。試驗設備包括無菌工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡、振蕩器、水浴箱、天平、無菌均質杯以及移液槍等。

1.2 方法

1.2.1 樣品制備：B-P平板計數(shù)法操作內容：在無菌環(huán)境下將樣品25 g放入無菌均質杯（已提前裝入磷酸緩沖稀釋液225 mL），轉速為每分鐘8000 r均質120 s，樣品均液為1∶10的固樣質量比，使用平板計數(shù)實施測定，為了保證測定準確定，每稀釋度重復操作2次。

1.2.2 B-P平板法：根據(jù)標準SNT0172-2010中進出口食品金黃色葡萄球菌檢驗方法中的相關內容進行操作，將試驗菌過夜培養(yǎng)的肉湯培養(yǎng)物采用生理鹽水進行稀釋，將合適菌濃度涂布于Baird-Parker平板上，取1 mL進行接種，在接種后48 h對可疑菌落進行挑取，將其置入BHI肉湯中，菌液在各培養(yǎng)基中的濃度為100～1000 cfu/mL，在36 ℃環(huán)境下進行24～48 h培養(yǎng)，觀察其菌株情況并計數(shù)。

1.2.3 紙片法：在上層膜掀開后的測試片正中間使用移液槍將1 mL樣品均液垂滴上去，隨后緩慢的將上層膜覆蓋上，保證接觸面內無氣泡，并使用壓板對壓板液進行輕壓，確保樣品液能在圓形培養(yǎng)面上均勻的覆蓋，至少靜置1 min待膠體凝固后在14～36 ℃條件下進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為22～24 h。若無菌落或均為暗紫紅色菌落，可視為測試完成。若為黑色或者藍綠色可疑菌落，可于34～36 ℃環(huán)境下繼續(xù)加入確認反應片，進行1～3 h培養(yǎng)后觀察結果。金黃色葡萄球菌全部為暗紫紅色菌落；確認片應用后，計數(shù)全部有或沒有菌落的粉紅色暈圈，可視為革蘭桿菌或者其他，不進行計數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學處理：數(shù)據(jù)資料用SPSS19.5進行統(tǒng)計分析，計量資料用（±s）表示，用t檢驗；計數(shù)資料用（%）表示，用χ2檢驗，P＜0.05表示有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 兩種測定方法金黃色葡萄球菌檢出率比較：紙片法金黃色葡萄球菌檢出率為31.67%，B-P平板法金黃色葡萄球菌檢出率為20.42%，兩組數(shù)據(jù)對比差異顯著（χ2=7.886，P=0.000），見表1。

2.2 兩種檢測方法檢測時長、成本及其他指標比較：紙片法與B-P平板法相比，操作度更為簡便，計數(shù)準確度高、勞動強度小，檢測時間較短，但成本高，見表2。

3 討 論

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），隸屬于葡萄球菌屬，是人類常見的一種病原菌，抵抗力較強，屬于典型的革蘭陽性菌。該病原菌對營養(yǎng)要求不高，但耐鹽性較高，所以容易造成乳品、水產(chǎn)品以及肉類污染[2]。金黃色葡萄球菌具有很強的致病力，經(jīng)金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的耐熱腸毒素可造成食用者出現(xiàn)食物中毒，在細菌性食物中毒總發(fā)生率中排第三，僅次于沙門氏菌與副溶血性孤菌造成的食物中毒事件發(fā)生率[3]。

表2 兩種檢測方法檢測時長、成本及其他指標比較

表1 對比兩種測定方法金黃色葡萄球菌檢出情況

B-P平板法、紙片法、MPN計數(shù)法及顯色培養(yǎng)基計數(shù)法等是定量檢測食品中金黃色葡萄球菌的主要方法，本文重點分析了B-P平板法、紙片法在食品中金黃色葡萄球菌檢測的應用價值。紙片法金黃色葡萄球菌檢出率為31.67%，明顯高于B-P平板法20.42%的檢出率，兩數(shù)據(jù)對比差異顯著（P＜0.05）。因B-P平板法需要在接種后48 h對其平板進行觀察，并將可疑的菌落轉種到BHI肉湯中培養(yǎng)18～24 h后實施血漿凝固酶試驗，最后才能計數(shù)，所以檢測時間較長。而紙片法具有操作簡易、計數(shù)準確度高、勞動強度小的優(yōu)勢，但具有成本高的特點。除此之外，紙片法在判讀期間因為深紫紅色菌落和較淺的黑色菌落顏色相近，所以分辨難度大，該類顏色識別錯誤現(xiàn)象在速度食品及肉類食品中較為常見，需要相關人員緊跟時代進步研發(fā)出選擇性更強的培養(yǎng)基，從而提高結果判讀的準確性，降低試驗成本。

綜上所述，紙片法檢測食品中金黃色葡萄球菌，檢出率較高，雖然檢測成本高，但具有易于操作、檢測時間短、計數(shù)準確性高等優(yōu)勢，所以在檢測行業(yè)具有較高的推廣價值。