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    牛乳中酪蛋白的提取以及鑒定

    2018-08-20 01:57:24
    現(xiàn)代食品 2018年13期
    關(guān)鍵詞:酪蛋白過敏原光度

    (揚(yáng)州大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,江蘇 揚(yáng)州 225127)

    牛奶是最古老的天然飲料之一,被譽(yù)為“白色血液”[1]。酪蛋白是牛奶中的主要蛋白,占牛奶中蛋白質(zhì)總量的80%[2-3],且是牛奶中主要的過敏原。本實(shí)驗(yàn)以牛奶中的酪蛋白為研究對象,通過對目標(biāo)蛋白的分離純化,進(jìn)行電泳分析鑒定[4-5]。為牛奶過敏蛋白的檢測以及標(biāo)準(zhǔn)品的制備,提供一定的基礎(chǔ)性研究。

    1 實(shí)驗(yàn)方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)原料與試劑

    原料:科迪純牛奶,伊利純牛奶,揚(yáng)大巴氏鮮牛奶。

    試劑:丙酮、酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)品等均為國產(chǎn)分析純試劑;十二烷基硫酸鈉(SDS)、溴酚藍(lán)、考馬斯亮藍(lán)R250、蛋白Marker等,購自上海生物工程股份有限公司。

    1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

    臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)、H5-6多頭磁力加熱攪拌器、微型垂直電泳系統(tǒng)、凝膠電泳成像儀、臺(tái)式pH計(jì)、電子天平、恒溫水浴鍋、脫色搖床。

    1.3 酪蛋白粗提和純化

    將3種牛奶倒入離心瓶中低溫離心去脂肪,過濾得脫脂奶,調(diào)節(jié)pH至4.6;后在4 ℃條件下離心獲沉淀為酪蛋白;加入等量的丙酮進(jìn)一步脫脂,抽濾清洗,留樣電泳分析。將樣品置于透析袋透析36 h后,取出進(jìn)行冷凍干燥。

    1.4 蛋白含量測定以及電泳分析

    以蛋白質(zhì)的含量為橫坐標(biāo),光吸收值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。稱取3種牛奶樣品中粗提的和純化的蛋白測量吸光度值,計(jì)算樣品中蛋白質(zhì)濃度,并采用SDS-PAGE進(jìn)行鑒定分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 樣品蛋白含量測定

    通過檢測標(biāo)品吸光度,可建立一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,即y=0.027 9x+0.071 8(R2=0.999 3),帶入樣品蛋白的吸光度值測出各樣品蛋白濃度,見表1。

    表1 樣品蛋白濃度表

    由標(biāo)準(zhǔn)曲線方程以及樣品蛋白的吸光度值測得樣品中的蛋白濃度,可以得出3種樣品的粗提蛋白濃度均小于純化后的蛋白濃度,而在純化蛋白中科迪鮮奶的蛋白濃度最高,粗蛋白中伊利鮮奶的蛋白濃度最高。

    2.2 SDS-PAGE分析

    將純化后的酪蛋白組分進(jìn)行SDS-PAGE分析,用凝膠成像與分析系統(tǒng)對電泳圖進(jìn)行光密度掃描,結(jié)果以28 kD區(qū)帶處蛋白條帶含量最為明顯。查閱相關(guān)文獻(xiàn)[1]并結(jié)合圖1可知,酪蛋白為牛奶中主要的過敏原蛋白組分。

    圖1 樣品的SDS-PAGE分析圖

    3 結(jié)論

    通過提取純化酪蛋白,以及SDS-PAGE電泳分析的結(jié)果,驗(yàn)證了酪蛋白是牛奶中的主要過敏原蛋白,與其他文獻(xiàn)[6]報(bào)道相符。酪蛋白的提取條件為4 ℃離心,pH 4.6,此條件下可得的酪蛋白濃度為2.02 mg/mL。

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