高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測雞蛋中氟蟲腈及其代謝物的殘留

龔 勇，樸秀英，孫豐收，崔 凱，廖先駿，李富根*

(1.農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所，北京 100125；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)環(huán)境毒理研究中心，山東 泰安 271001；3.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與營養(yǎng)研究所，江蘇 南京 210014)

氟蟲腈是一種苯基吡唑類殺蟲劑，對害蟲以胃毒作用為主，也有觸殺和一定的內(nèi)吸作用。其作用機(jī)制為阻礙昆蟲γ-氨基丁酸控制的氯化物代謝，對蚜蟲、葉蟬、鱗翅目幼蟲、蠅類和鞘翅目等害蟲具有很高的殺蟲活性。氟蟲腈在1987年由原法國羅納-普朗克公司研發(fā)，1994年進(jìn)入中國市場。對耐菊酯類、氨基甲酸酯類農(nóng)藥的害蟲有高敏感性，也可用于防治人畜生活環(huán)境害蟲和貓、狗等體外的跳蚤和虱等寄生蟲[1]。

目前國內(nèi)檢測動物源基質(zhì)中氟蟲腈及其代謝物殘留量前處理方法主要有固相萃取柱凈化[2]、QuEChERS凈化[3]，本方法采用GPC進(jìn)行凈化，凈化效果好，抗基質(zhì)干擾性強(qiáng)，靈敏度高，能達(dá)到殘留分析要求的各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：配有電噴霧離子源(ESI)；凝膠滲透色譜儀；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；氮?dú)獯蹈蓛x；分析天平；組織搗碎儀；離心機(jī)等其他實(shí)驗(yàn)室設(shè)備。

1.2 主要試劑 乙腈為色譜純，乙酸乙酯、環(huán)己烷、無水硫酸鈉為分析純，乙酸為優(yōu)級純；標(biāo)準(zhǔn)品由農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所提供。

1.3 樣品前處理

1.3.1 提取 稱取10 g雞蛋試樣(精確至0.01 g)于250 mL提取瓶中，加入70 mL乙酸乙酯-環(huán)己烷溶液(1:1)，加入20 g無水硫酸鈉，用高速組織搗碎機(jī)在15 000 r/min，勻漿1.5 min，全部倒入100 mL離心管中，4 000 r/min離心5 min，取上清液30 mL，40℃水浴旋蒸至低于5 mL，轉(zhuǎn)移至離心試管中用乙酸乙酯-環(huán)己烷溶液(1:1)定容至10 mL，待凈化。

1.3.2 凈化 儀器：凝膠滲透色譜儀；凈化柱：530 mm×20 mm，內(nèi)裝BIO-Beads S-X3填料22 g；流動相：乙酸乙酯-環(huán)己烷(1:1)；流速：5 mL/min；進(jìn)樣量：5 mL；開始收集時間：7 min；結(jié)束收集時間：10 min。

將待凈化樣品轉(zhuǎn)移至樣品管中，進(jìn)樣后收集7～10 min的餾分，取2 mL用氮?dú)獯蹈桑儆靡译嫒芙舛ㄈ葜? mL，過0.22 μm有機(jī)濾膜后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行檢測。

1.4 儀器分析條件

1.4.1 色譜參考條件 色譜柱：C18，100 mm×2.1 mm，粒徑5 μm，或相當(dāng)者；流動相：A為乙酸水(0.05%)溶液，B為乙腈，梯度洗脫程序(表1)；流速：0.2 mL/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣體積：10 μL。

表1 梯度洗脫程序(VA+VB)

1.4.2 質(zhì)譜參考條件 離子源：電噴霧離子源；掃描方式：負(fù)離子掃描；噴霧電壓：3 000 V；毛細(xì)管溫度：350℃；鞘氣(N2)：20 psi；輔助氣(N2)：10 psi；碰撞氣氬氣：1.5 mTorr；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)，多反應(yīng)監(jiān)測條件(表2)。

表2 氟蟲腈及其代謝物的多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)條件

相關(guān)譜圖(圖1-3)，每組自上至下依次為氟蟲腈、氟甲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈亞砜的譜圖。

圖1 雞蛋空白譜圖

圖2 標(biāo)樣譜圖(0.01 ppm)

圖3 添加回收譜圖(0.01 mg/kg)

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 準(zhǔn)確稱取一定量的標(biāo)準(zhǔn)品(精確至0.01 mg)，以乙腈溶解并稀釋，配制成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為0.000 1、0.000 5、0.001、0.01 和0.1 mg/L，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析測試，結(jié)果顯示氟蟲腈及其代謝物的峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，線性方程為氟蟲腈y=14 973 348.420 2x+16 924.035 4，相關(guān)系數(shù)R2=0.998 4；氟甲腈y=67 230 873.147 2x+84 723.195 8，R2=0.998 3；氟蟲腈砜y=40 289 281.585 6x+46 939.677 6，R2=0.998 5；氟蟲腈亞砜y=38 578 439.296 9x+60 909.559 6，R2=0.997 2。

2.2 添加回收 在雞蛋樣品中分別添加氟蟲腈及其代謝物的標(biāo)樣，做0.002、0.02、0.5 mg/kg，3個濃度的添加回收，每個添加濃度重復(fù)5次，充分混勻后靜置2 h，用上述方法檢測。氟蟲腈在雞蛋中添加0.002～0.5 mg/kg，回收率為86.6%～108%，變異系數(shù)為3.4%～15.9%;氟甲腈在雞蛋中添加0.002～0.5 mg/kg，回收率為80.7%～114.3%，變異系數(shù)為3.9%～10.2%;氟蟲腈砜在雞蛋中添加0.002～0.5 mg/kg，回收率為82%～110.6%，變異系數(shù)為6.5%～12.5%;氟蟲腈亞砜在雞蛋中添加0.002～0.5 mg/kg，回收率為85.8%～110%，變異系數(shù)為5.6%～11.4%。符合農(nóng)藥殘留分析方法要求?；厥章始跋鄬?biāo)準(zhǔn)偏差(表3)。

表3 回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

續(xù)表

2.3 定量限 在上述條件下，根據(jù)添加回收試驗(yàn)，氟蟲腈及其代謝物在雞蛋中的定量限為0.002 mg/kg。

3 結(jié)論

采用乙酸乙酯-環(huán)己烷(1:1)提取，GPC凈化，液質(zhì)檢測，建立了雞蛋中氟蟲腈及其代謝物的檢測方法，并對方法的回收率和精密度進(jìn)行了探究。本方法氟蟲腈及其代謝物在3個添加水平下，回收率在80.7%～114.3%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.4%～15.9%之間，符合《農(nóng)藥殘留檢測方法國家標(biāo)準(zhǔn)編制指南》(農(nóng)業(yè)部2386號公告)要求[4]，可滿足雞蛋中氟蟲腈及其代謝物檢測的需求。