陸英不同部位水提液抗炎鎮(zhèn)痛作用的比較研究

鐘衛(wèi)華，羅 輝，蘇丹丹，梁生林

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陸英不同部位水提液抗炎鎮(zhèn)痛作用的比較研究

鐘衛(wèi)華1，羅 輝2，蘇丹丹2，*梁生林2

（1．井岡山大學(xué)附屬醫(yī)院，江西，吉安 343000；2．井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)部，江西，吉安 343000）

比較陸英不同部位水提液的抗炎鎮(zhèn)痛作用。采用二甲苯致小鼠耳腫脹炎癥模型，研究陸英不同部位水提液灌胃給藥對急性炎癥的作用。采用熱板法和醋酸扭體法致痛，研究陸英不同部位水提液灌胃給藥的鎮(zhèn)痛作用。與模型組相比，陸英根與莖葉水提液高、低劑量（10.0、5.0 g生藥/kg）組顯著抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹（< 0.01）。陸英根與莖葉水提液高、低劑量（10.0、5.0 g生藥/kg）組給藥后明顯延長熱板所致小鼠的痛閾值，與模型組和自身給藥前比較差異極顯著（< 0.01）；陸英根與莖葉水提液高、低劑量（10.0、5.0 g生藥/kg）組明顯減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，與模型組比較差異極顯著（< 0.01）。陸英根水提液高、低劑量組給藥后與相同劑量的莖葉水提液相比，差異顯著（< 0.05、< 0.01）。陸英根與莖葉水提液灌胃給藥均具有抗炎、鎮(zhèn)痛作用，且根水提液抗炎鎮(zhèn)痛作用強于莖葉水提液。

陸英；根與莖葉水提液；抗炎；鎮(zhèn)痛；比較

陸英為忍冬科接骨木屬植物陸英 Lindl.，以根、莖及葉入藥。全年可采，洗凈切碎，曬干或鮮用[1]。全國中草藥匯編謂：陸英根具有散瘀消腫、祛風(fēng)活絡(luò)的功效，用于跌打損傷、扭傷腫痛、骨折疼痛、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛等；莖、葉具有利尿消腫、活血止痛，用于腎炎水腫、腰膝酸痛、跌打腫痛等[1]。中藥大辭典謂：陸英根具有祛風(fēng)利濕、活血解毒，主治頭風(fēng)痛、腰腿痛、跌打骨折等；莖葉具有祛風(fēng)除濕、舒筋活血的功效，用于風(fēng)濕痹痛、跌打損傷等[2]?？梢?，陸英根與莖葉都可用于跌打損傷、風(fēng)濕骨痛等的治療?，F(xiàn)代藥理研究表明，陸英具明顯抗炎[3]、鎮(zhèn)痛[3-5]、保肝[6-8]等作用，但陸英根與莖葉在抗炎鎮(zhèn)痛作用方面是否有差異，尚未見報道。本研究采用小鼠耳腫法炎癥模型，以及小鼠熱板法、醋酸扭體法疼痛模型，探討陸英根與莖葉水提液灌胃給藥的抗炎鎮(zhèn)痛作用，比較根與莖葉在抗炎鎮(zhèn)痛方面是否有差異，旨在為陸英的臨床合理應(yīng)用及進一步開發(fā)利用提供實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物與試劑

陸英采于江西吉安，經(jīng)井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)系周秋貴副教授鑒定為忍冬科接骨木屬植物L(fēng)indl.；阿司匹林片，拜耳醫(yī)藥保健有限公司（進口分裝），規(guī)格0.1 g/片，批號BJ04931；鹽酸嗎啡注射液，東北制藥集團公司沈陽第一制藥廠，規(guī)格10 mg/mL ，批號080701-2；二甲苯，中國上海試劑一廠，批號20120201；36%醋酸，上海松江佘山化工廠。

1.2 動物

昆明種小鼠，清潔級，體質(zhì)量(18~22) g，雌雄兼?zhèn)洌?16只，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，許可證號：SCXK(湘)2011-0003。

1.3 儀器

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52A，上海亞榮生化儀器廠；循環(huán)水式多用真空泵SHB-ⅢA，上海豫康科教儀器設(shè)備有限公司；RB-200智能熱板儀，成都泰盟軟件有限公司；YLS-25A電動耳腫打耳器，濟南益延科技發(fā)展有限公司；JA2003N 電子天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司。

2 方法

2.1 陸英水提液的制備

2.1.1 陸英根水提液的制備[3-4]

取切成小段的干燥陸英根200 g，用蒸餾水浸泡0.5 h，加10倍量蒸餾水（第一次多加2倍量）用文火煎煮3次，第1次為1 h，第2、3次均為0.5 h。合并3次煎出液，靜置去渣，濃縮為浸膏狀，貯存?zhèn)溆?。用時用蒸餾水配制。

2.1.2 陸英莖葉水提液的制備[3-4]

取切成小段的干燥陸英莖葉200 g，用蒸餾水浸泡0.5 h，加10倍量蒸餾水（第一次多加2倍量）用文火煎煮3次，第1次為1 h，第2、3次均為0.5 h。合并3次煎出液，靜置去渣，濃縮為浸膏狀，貯存?zhèn)溆?。用時用蒸餾水配制。

2.2 陸英水提液的抗炎鎮(zhèn)痛實驗

2.2.1 耳腫法抗炎實驗[9-10]

72只雌雄各半昆明種小鼠，按性別和體質(zhì)量隨機均分為6組：模型組（蒸餾水，10 mL /kg），阿司匹林片（0.5 g/kg）陽性對照組，陸英根水提液高、低劑量（10.0、5.0 g生藥/kg）組，陸英莖葉水提液高、低劑量（10.0、5.0 g生藥/kg）組。陸英的給藥劑量參考中藥大辭典成人每日用量30~60 g，按動物與人體的每千克體質(zhì)量等效劑量折算系數(shù)（10倍）換算成小鼠的劑量，約為5.0~10.0 g/kg。小鼠均灌胃給藥，給藥容量均為10 mL/kg，1次/d，連續(xù)給藥5 d。末次給藥后1 h，用0.05 mL二甲苯均勻涂抹每只小鼠左耳廓兩面致炎，右耳作對照。30 min后脫頸處死小鼠，沿耳廓基線剪下雙耳，用直徑8 mm耳腫打耳器分別在左右耳的同一部位沖下圓形耳片，電子天平稱質(zhì)量，以兩耳片的質(zhì)量差作為耳腫脹度，計算腫脹抑制率。

耳腫脹度＝左耳片質(zhì)量－右耳片質(zhì)量

耳腫脹抑制率（%）＝（模型組腫脹度－給藥組腫脹度）/模型組腫脹度×100%

2.2.2 熱板法鎮(zhèn)痛實驗[9,10]

水溫（55 ±0.1）℃，記錄小鼠從放入熱板至出現(xiàn)舔后足反應(yīng)所需時間（s），小于5s或大于30s或跳躍的都棄之不用。取篩選合格的雌性小鼠72只，按體質(zhì)量隨機均分為6組，除陽性對照組為嗎啡溶液（0.02 g/kg）外，其余各組同“2.2.1”項。將每只小鼠正常痛閾值各測2次，每次間隔10 min，取其平均值為給藥前正常痛閾值。給藥除陽性對照組皮下注射鹽酸嗎啡溶液2天外，其余各組同“2.2.1”項。末次給藥后30、60、90、120 min各測小鼠痛閾值，如果用藥后放入熱板60 s仍無反應(yīng)，即將小鼠取出，其痛閾值按60 s計算。

2.2.3 醋酸扭體法鎮(zhèn)痛實驗[9-10]

小鼠72只，雌雄各半，按性別和體質(zhì)量隨機均分為6組，組別及給藥同“2.2.1”項。末次給藥后1 h，各鼠均腹腔注射0.6%醋酸0.2 mL/只（醋酸溶液臨用前配制）。記錄各組小鼠腹腔注射后20 min內(nèi)扭體反應(yīng)（腹部收縮內(nèi)凹、伸展后肢）次數(shù)，并計算抑制率。

抑制率（%）=（模型組扭體反應(yīng)次數(shù)－給藥組扭體反應(yīng)次數(shù)）/模型組扭體反應(yīng)次數(shù)×100%

2.3 統(tǒng)計學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

與模型組相比，陸英根與莖葉水提液高、低劑量（10.0、5.0 g生藥/kg）組均顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹（< 0.01），且耳腫脹抑制率與劑量呈正相關(guān)；阿司匹林片0.5 g/kg對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹也具有顯著抑制作用（< 0.01）。與阿司匹林組相比，陸英根水提液高、低劑量組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（> 0.05）。陸英根與相同劑量莖葉水提液相比，差異顯著（< 0.01），顯示陸英根水提液抗炎作用強于莖葉水提液。結(jié)果見表1。

表1 陸英根與莖葉水提液對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響（，n =12）

注：與模型組比較，**< 0.01；與阿司匹林組比較，&> 0.05；根與相同劑量莖葉水提液比較，△△< 0.01

3.2 對熱板法致小鼠疼痛的影響

與模型組相比，給藥前各組痛閾值比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（> 0.05）；陸英根水提液高、低劑量（10.0、5.0 g生藥/kg）組，給藥后30、60、90、120 min明顯延長熱板所致小鼠的痛閾值（< 0.01），且具劑量依賴性；陸英莖葉水提液高、低劑量（10.0、5.0 g生藥/kg）組，給藥后60、90、120 min明顯延長熱板所致小鼠的痛閾值（< 0.01），也具劑量依賴性；嗎啡溶液（0.02 g/kg）組給藥后30、60、90、120 min顯著延長熱板所致小鼠的痛閾值（< 0.01）。

與自身給藥前相比，陸英根水提液高、低劑量(10.0、5.0 g生藥/kg)組和嗎啡溶液（0.02 g/ kg）組，給藥后30、60、90、120 min明顯延長熱板所致小鼠的痛閾值（< 0.01）；陸英莖葉水提液高、低劑量（10.0、5.0 g生藥/kg）組，給藥后60、90、120 min也明顯延長熱板所致小鼠的痛閾值（< 0.01）。

陸英根水提液高、低劑量組給藥后與相同劑量的莖葉水提液組相比，差異顯著(< 0.05、< 0.01)，顯示陸英根水提液對熱板法所致疼痛的鎮(zhèn)痛作用強于莖葉水提液。結(jié)果見表2。

表2 陸英根與莖葉水提液對小鼠熱板法致痛的鎮(zhèn)痛作用（，n = 12）

注：與模型組比較，**< 0.01；與自身藥前痛閾比較，##< 0.01；根與相同劑量莖葉水提液比較，&&< 0.01，&< 0.05

3.3 對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

與模型組相比，陸英根與莖葉水提液高、低劑量（10.0、5.0 g生藥/kg）組均能明顯減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)（< 0.01），且具有劑量依賴性；阿司匹林片0.5 g/kg給藥后能顯著減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)（< 0.01）。陸英根水提液高、低劑量組給藥后與相同劑量的莖葉水提液組相比，差異顯著（< 0.01），顯示陸英根水提液減少扭體反應(yīng)次數(shù)作用強于莖葉水提液。結(jié)果見表3。

表3 陸英根與莖葉水提液對醋酸致小鼠扭體次數(shù)的影響（，n = 12）

注：與蒸餾水組比較，**< 0.01；根與相同劑量莖葉水提液組比較，&&< 0.01；

4 討論

陸英具祛風(fēng)除濕、舒筋活血等功效，當(dāng)?shù)孛耖g用于風(fēng)濕痹痛、跌打損傷、腰腿痛等的治療。本實驗采用小鼠耳腫法炎癥模型和小鼠熱板法、醋酸扭體法疼痛模型來考察陸英根與莖葉水提液的抗炎鎮(zhèn)痛作用，并比較根與莖葉水提液在抗炎鎮(zhèn)痛作用方面的強弱。

本實驗用二甲苯致小鼠耳廓腫脹是以水腫和滲出為主的急性炎癥反應(yīng)[11]，實驗結(jié)果顯示陸英根與莖葉水提液灌胃給藥均明顯減輕二甲苯所致小鼠耳廓的腫脹，根水提液作用強于莖葉水提液，表明陸英根與莖葉水提液灌胃給藥對急性炎癥具有顯著抑制作用，且根水提液抗炎作用強于莖葉水提液。

小鼠熱板實驗是通過一定強度的溫度（55℃）刺激小鼠足部以產(chǎn)生疼痛反應(yīng)。常以熱刺激開始至出現(xiàn)舔后足反應(yīng)的時間為測痛指標(biāo)[9]，并以此評價藥物的鎮(zhèn)痛作用。熱板反應(yīng)有高位中樞參與[12]。小鼠醋酸扭體實驗是通過腹腔注射醋酸刺激小鼠腹膜引起腹膜炎癥而產(chǎn)生疼痛，表現(xiàn)為腹部內(nèi)凹、軀干與后肢伸張、臀部高起等扭體反應(yīng)[10]。小鼠醋酸扭體實驗是篩選弱鎮(zhèn)痛藥的一種敏感、簡便、重復(fù)性好的方法[12]。實驗結(jié)果顯示陸英根與莖葉水提液灌胃給藥能明顯延長熱板法所致小鼠的痛閾值，明顯減少醋酸刺激所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，根水提液作用強于莖葉水提液，這表明陸英根與莖葉水提液灌胃給藥對溫度和醋酸刺激導(dǎo)致的疼痛具有明顯鎮(zhèn)痛作用，且根水提液鎮(zhèn)痛作用強于莖葉水提液。

綜上所述，陸英根與莖葉水提液灌胃給藥對急性炎癥具有良好的抑制作用，對物理性和炎性疼痛也具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，且根水提液作用強于莖葉水提液?？蔀槠涿耖g治療風(fēng)濕痹痛、跌打損傷、腰腿痛提供了藥理學(xué)理論基礎(chǔ)，治療時選用根煎服比選用莖葉煎服進行治療效果更好，也為其綜合開發(fā)利用提供了實驗依據(jù)。其抗炎鎮(zhèn)痛的活性成份及作用機制等有待進一步研究。

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COMPARISON ON THE ANTI-INFLAMMATORY AND ANALGESIC EFFECTS OF THE WATER EXTRACTS FROM DIFFERENT PARTS OF

ZHONG Wei-hua1, LUO Hui2, SU Dan-dan2,*LIANG Sheng-lin2

(1. Affiliated Hospital of Jinggangshan University, Ji’an, Jiangxi 343000, China; 2. Health Science Center, Jinggangshan University, Ji’an, Jiangxi 343000, China)

To compare the anti-inflammatory and analgesic effects of the water extracts from different parts of.The anti-inflammatory animal model were used in researching the effects of the water extracts from different parts ofon acute inflammation. The acute model were xylene-induced ear swelling. Meanwhile, the analgesic effects of that extracts were observed by hot plate and acetic acid writhing test.Compared with the model group, high and low doses (10.0, 5.0 g/kg) of water extracts ofroot and stem leaf could significantly inhibit ear swelling in mice (< 0.01). Moreover, the pain threshold with hot plate method was significantly prolonged (< 0.01) compared with the model group and the data before the drugs administration of high and low doses (10.0, 5.0 g/kg) of water extracts ofroot and tem leaf. And the writhing number was reduced (< 0.01) when contrasted to the model group after extracts administration. However, there were substantial variations in the root water extract group and the same dose of stem leaf water extract in high and low concentrations (< 0.05,< 0.01).root and tem leaf water extracts possesses the anti-inflammatory and analgesic effects, and root water extracts have better effects.

; root and tem leaf water extracts; anti-inflammatory; analgesic; comparison

1674-8085(2018)03-0088-05

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2018.03.018

2018-01-17；

2018-03-16

國家科技支撐計劃項目子課題項目（2012BAC11B02-6）；國家自然科學(xué)基金項目（31460488）

鐘衛(wèi)華(1976-)，女，江西吉安人，副主任醫(yī)師，主要從事B超臨床工作(E-mail: 269568714@qq.com);

羅 輝(1971-)，男，江西吉水人，副教授，碩士，主要從事生物化學(xué)教學(xué)科研(E-mail: luohui9898@163.com);

蘇丹丹(1995-)，女，貴州銅仁人，井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)專業(yè)2014級本科班(E-mail: 315830147@qq.com);

*梁生林(1962-)，男，江西吉安縣人，教授，主要從事中草藥藥理及毒理研究(E-mail: slliang1962@163.com).