高脂血癥通過系膜細胞-足細胞軸加重IgA腎病腎小管間質(zhì)病變

高原 楊林 王建榮 楊萬霞 傅淑霞 張麗萍

河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院腎內(nèi)科（石家莊050000）

IgA腎病是導致我國青壯年患者腎衰竭的主要病因，為國內(nèi)最常見的原發(fā)性腎小球疾?。?］。目前研究發(fā)現(xiàn)影響IgA腎病預后的因素可能為男性、年齡、蛋白尿、高血壓、高尿酸、脂代謝異常、胰島 素 抵 抗（IR）、肥胖等［2?3］。IgA腎病患者體內(nèi)普遍存在脂質(zhì)代謝紊亂，高脂血癥可引起足細胞損傷誘發(fā)蛋白尿、腎小球硬化等加重疾病進展。雖然IgA腎病是腎小球系膜細胞增殖性病變，但近年研究表明腎小管間質(zhì)損傷較小球病變更能提示疾病的進展，系膜細胞?足細胞?腎小管上皮細胞間的相互作用可能是造成IgA腎病腎小管間質(zhì)損傷的機制之一［4］。IgA腎病發(fā)病機制目前尚不明確。脂代謝紊亂對腎臟的損害作用正逐步得到重視，但其通過系膜細胞?足細胞軸加重IgA腎病腎小管間質(zhì)病變的研究目前尚少，故本文通過檢測IgA腎病患者足細胞表面特異性標記物WT1、腎組織腫瘤壞死因子α（TNF?α）、白細胞介素 6（IL?6）的表達變化，擬探討高脂血癥在IgA腎病患者腎小管間質(zhì)損害中的意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象 我科收治的59例IgA腎病患者，其中男32例，女27例，平均（41.83±9.94）歲。均除外紫癜性腎炎、狼瘡性腎炎等繼發(fā)性IgAN。59例患者均施以經(jīng)皮腎活檢術(shù)，腎活檢組織經(jīng)升汞?苦味酸固定，切片厚度 2 μm，分別行 HE、PAS、PASM和Masson三色染色。由病理醫(yī)師在單盲情況下觀察病理形態(tài)學改變。腎臟腫瘤切除術(shù)后，遠離病灶部位的腎臟組織11例作為正常組織對照。并詳細收集了所有患者腎活檢時臨床病理資料。

1.2 腎小球系膜細胞增殖程度判定 在光學顯微鏡計算機圖象分析系統(tǒng)屏幕上，按Katafuchi IgAN積分標準［5］：腎小球系膜細胞增殖程度積分（1?4分）按系膜細胞區(qū)域占腎小球總面積之比計算。

1.3 腎小管間質(zhì)病變程度判斷 按照牛津分型腎小管間質(zhì)損傷程度進行分型。

1.4 免疫組織化學法染色 鼠抗人WT1抗體（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司）、鼠抗人TNF?α抗體、鼠抗人IL?6抗體（河北博海生物工程開發(fā)有限公司）；按說明書操作，主要觀察腎組織TNF?α、IL?6、WT1的表達部位及強度。通過IMS計算機圖像分析軟件計算每張切片400倍 TNF?α、IL?6、WT?l的陽性面積與該視野面積的比值，取其平均值。

1.5 圖像采集 按每個腎小球平均WT1的陽性細胞數(shù)目表示W(wǎng)T1表達陽性的細胞數(shù)。每張切片400倍通過IMS計算機圖像分析軟件計算TNF?α、IL?6陽性面積與該視野面積的比值，取其平均值。

1.6 放射免疫分析法 禁食12 h后留取晨尿10 mL，離心15 min，收集上清液，行尿β2微球蛋白測定。

1.7 統(tǒng)計學方法 使用IBM SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析。對所有計量資料進行正態(tài)性及方差齊性檢驗。符合正態(tài)分布的計量資料采用±s表示，兩組間比較采用兩樣本t檢驗。多組間比較采用方差分析，用Pearson相關(guān)分析分析腎組織WT?1、TNF?α、IL?6的表達與臨床、病理資料間的相關(guān)性，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 IgAN患者與對照組的腎組織WT1、TNF?α、IL?6表達比較 IgAN腎小球WT1表達較對照組減少明顯（P＜0.05），而TNF?α、IL?6在腎小管間質(zhì)表達較對照組明顯增多（P＜0.05）。見表1圖1。

表1 IgAN患者與對照組的腎組織WT1、TNF?α、IL?6表達比較Tab.1 Comparison of the expressions of WT1，TNF?α，IL?6 in renal tissue of IgAN patients and controls ±s

表1 IgAN患者與對照組的腎組織WT1、TNF?α、IL?6表達比較Tab.1 Comparison of the expressions of WT1，TNF?α，IL?6 in renal tissue of IgAN patients and controls ±s

注：與對照組比較，*P＜0.05

組別對照組IgAN組例數(shù)11 59 WT1表達陽性細胞數(shù)目23.3±4.7 18.2±6.5*TNF?α陽性表達率（%）12.20±3.15*27.13±9.64 IL?6陽性表達率（%）10.30±4.11*32.11±8.67

2.2 IgA腎病患者臨床、病理資料比較及腎組織WT1、TNF?α、IL?6表達 隨著IgAN腎小管間質(zhì)病變加重，腎組織WT1表達減少，三酰甘油、尿β2微球蛋白、腎小管間質(zhì)TNF?α、IL?6表達及系膜增生程度越高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2圖2，且三酰甘油與腎小管間質(zhì)損害程度分級呈正相關(guān)（r=0.77，P＜0.01）。

表2 Ig腎病患者臨床、病理資料比較及腎組織WT1、TNF?α、IL?6表達Tab.2 Comparison of clinical and pathological data and expression of WT1,TNF?α,IL?6 in renal tissue of patients with IgA nephropathy ±s

表2 Ig腎病患者臨床、病理資料比較及腎組織WT1、TNF?α、IL?6表達Tab.2 Comparison of clinical and pathological data and expression of WT1,TNF?α,IL?6 in renal tissue of patients with IgA nephropathy ±s

注：與T0比較，*P＜0.05；與T1相比，△P＜0.05

組別T0 T1 T2組別T0 T1 T2例數(shù)20 22 17系膜增生積分1.24±0.27 1.75±0.27*2.83±0.67*△TG（mmol/L）1.05±0.49 1.68±0.68*2.12±0.98*△WT1表達陽性細胞數(shù)目22.53±3.02 19.73±4.22*15.25 ± 3.64*△CHOL（mmol/L）3.9±1.37 3.9±1.10 3.8±1.01 TNF-α陽性表達率（%）15.13±4.01 29.30±9.41*37.29±10.21*△尿β2微球蛋白（mg/L）0.35±0.21 0.78±0.27*1.17±0.44*△IL-6陽性表達率（%）21.01±9.89 37.92±15.06 55.37±24.04*△

2.3 臨床病理指標的相關(guān)分析 IgAN患者三酰甘油與腎組織WT1表達呈負相關(guān)（r=-0.658，P＜0.01）；與腎小管間質(zhì)TNF?α、IL?6表達、系膜增生程度及尿β2微球蛋白呈正相關(guān)（r=0.672，P＜0.01；r=0.713，P＜ 0.01；r=0.519，P＜ 0.05；r=0.543，P＜ 0.05）。

3 討論

IgA腎病脂代謝紊亂可導致腎小球足細胞損傷，促進腎小球硬化而加重疾病進展。環(huán)氧化酶2能破壞腎臟足細胞低密度脂蛋白受體的負反饋調(diào)節(jié)、從而上調(diào)低密度脂蛋白受體表達、誘發(fā)足細胞損傷［6］。王莉等［7］發(fā)現(xiàn)辛伐他汀能降低小鼠足細胞CXCL16表達，減少細胞內(nèi)脂質(zhì)物質(zhì)儲存；增加nephrin蛋白表達，進而減輕足細胞損傷。1982年，MOORHEAD 等［8］首次提出，腎小球基底膜損傷使脂蛋白脂肪酶激活劑喪失導致高脂血癥，并能損傷腎小球系膜細胞、腎小管上皮細胞等，最終加重腎臟疾病進展。系膜細胞是Ig A腎病患者受損的主要細胞。系膜細胞釋放的TNF?α可激活腎小管上皮細胞、在系膜細胞?足細胞軸中起著非常重要的作用［9］。有體外研究發(fā)現(xiàn)IgAN患者腎小球系膜細胞釋放的TNF?α，能誘發(fā)足細胞以自分泌方式分泌TNF?α增多，同時還上調(diào)了足細胞中TNF?αR1和TNF?αR2，TNF?α與TNF?αR1結(jié)合后，就能刺激IL?6分泌增多［10］。本文結(jié)果也發(fā)現(xiàn)1gAN患者三酰甘油與系膜增生程度、腎組織TNF?α、IL?6表達呈正相關(guān)，與足細胞WT1表達呈負相關(guān)。

圖1 腎組織WT?1的表達（×400）Fig.1 Expression of WT?1 in renal tissue（× 400）

圖2 TNF?α、IL?6在IgA腎病不同等級腎小管間質(zhì)中的表達（× 400）Fig.2 Expression of TNF?α,IL?6 in renal tubulointerstitium of different grades in IgA nephropathy（× 400）

近年研究表明腎小管間質(zhì)損害是IgAN預后的獨立危險重要因素，但脂代謝紊亂在腎小管間質(zhì)病變中的作用目前研究尚少，本文還發(fā)現(xiàn)IgAN患者三酰甘油與與腎組織WT1表達呈負相關(guān)，與腎組織TNF?α、IL?6表達及尿β2微球蛋白呈正相關(guān)，且三酰甘油與腎小管間質(zhì)損害程度分級呈正相關(guān)，Ig A腎病發(fā)病機制可能是系膜細胞的激活、系膜細胞?足細胞交互作用和足細胞損傷。IL?6、TNF?α是多效促炎癥細胞因子，也是炎性介質(zhì)網(wǎng)絡(luò)關(guān)鍵成分，IL?6能直接增加 TGF?β1表達、增強TGF?β1?Smad信號通路而促進IgA腎病間質(zhì)纖維化的發(fā)生［11］。IL?6也可以通過促進細胞黏附分子表達致炎性細胞聚集而刺激成纖維細胞增殖。IL?6還能誘發(fā)系膜細胞增殖并增加膠原合成、促進腎間質(zhì)纖維化。TNF?α的高表達，也能誘發(fā)腎小管上皮細胞合成FN和蛋白多糖、促進成纖維細胞形成［12］。還有試驗研究發(fā)現(xiàn)，阿托伐他汀能抑制3?羥基?3?甲基戊二酰輔酶A還原酶介導的細胞內(nèi)膽固醇合成，減少 IL?1β、TNF?α、IL?6 等細胞因子的表達［13］，降低這些細胞因子對腎臟疾病的損傷而延緩CRF進展。另有研究發(fā)現(xiàn)L?HDL組腎小管萎縮及間質(zhì)纖維化受損程度顯著高于血脂正常組［14］。LDL、氧化低密度脂蛋白能刺激纖維連接蛋白mRNA合成，并促進腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化、加重腎間質(zhì)纖維化［15］?；颊叱掷m(xù)高脂血癥狀態(tài)可以損傷腎小管上皮細胞，誘發(fā)和加重腎間質(zhì)纖維化［16］。體外實驗表明阿托伐他汀明顯減少腎間質(zhì)損傷，可能與抑制 TGF?β1等表達有關(guān)［17］。

高脂血癥引起腎臟損害是一個慢性過程，在IgA腎病的發(fā)生、發(fā)展過程中常伴隨存在，但缺乏特異性的癥狀與體征，往往臨床上容易被忽視。國外一項隨訪研究提示高三酰甘油血癥是Ig AN進展的獨立危險因素［18］，Ig AN脂代謝紊亂可能通過系膜細胞?足細胞軸加重腎小管間質(zhì)病變、促進腎間質(zhì)纖維化。