性病門診患者人乳頭瘤病毒（HPV）感染情況及其病毒亞型分布分析

楊靜

【摘 要】目的：分析我院性病門診患者人乳頭瘤病毒（HPV）感染情況及其亞型分布。方法以我院2015年9月至2016年11月婦科門診1216例患者為研究對(duì)象，采集全部研究對(duì)象的宮頸分泌物，采用PCR-反向點(diǎn)雜交法進(jìn)行HPV-DNA檢測，將檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：1216例樣本中共檢測出HPV陽性324例，感染率為26.64%。其中，高危型感染294例，低危型感染30例；單一感染占總陽性數(shù)的78.39%，單一感染與多重感染人數(shù)差異顯著，P<0.05；在年齡分布方面，峰值集中在20～40歲。結(jié)論：不同型別HPV的致癌能力和后果有差異，HPVl6、18型很容易引起具有侵襲性或惡性程度高的宮頸癌；年輕女性HPV感染率高，且感染年齡分布有年輕化趨勢。

【關(guān)鍵詞】人乳頭瘤病毒；感染率；亞型；分布

Abstract Objective： To analyze the infection status and subtype distribution of human papillomavirus （HPV） in sexually transmitted diseases outpatients in our hospital. Methods in our hospital from September 2015 to November 2016 1216 cases of gynecological clinic patients as the research object， collecting all the cervical secretions of the research object， HPV-DNA was detected by PCR- reverse dot blot hybridization method， the detection results were analyzed. Results： HPV positive was detected in 324 of 1216 samples， with an infection rate of 26.64%. Among them， 294 cases of high-risk infection， 30 cases of low risk of infection； single infection accounted for the total number of positive 78.39%， the number of single infection and multiple infection had significant difference， P<0.05； in the age distribution， the peak concentrated in the 20～40 years old. Conclusion： the carcinogenic ability and consequences of different types of HPV were different， HPVl6， 18 are easily caused by invasive or high malignant degree of cervical cancer； the high rate of HPV infection and the infection of young women， younger age distribution.

Key words： Human papillomavirus；Infection rates；Subtypes；Distribution

【中圖分類號(hào)】R36.231 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1672-3783（2018）06-03--01

人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是一種無包膜的雙連閉環(huán)DNA病毒，屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬。HPV可通過性行為、密切接觸、母嬰等方式傳播。HPV感染可引發(fā)多種腫瘤，特別容易引發(fā)女性宮頸癌，不同的型別引起不同的臨床表現(xiàn)，另外還有外陰癌、陰莖癌、肛門癌、前列腺癌、膀胱癌、直腸癌、口腔癌、扁桃體癌等。目前已分離出130多種，其中約40種與宮頸癌和癌前病變有關(guān)。HPV感染具有一定的地域性，不同國家與地區(qū)感染分型不同。本研究通過PCR-反向點(diǎn)雜交法，對(duì)2016年9月至2016年 11月我院婦科門診1216例患者進(jìn)行HPV-DNA 的檢測，探討其感染情況并分析其亞型分布，結(jié)果如下。

對(duì)象與方法

一、對(duì)象

1.研究對(duì)象

2015年9月至2016年 11月我院婦科門診患者1216例，年齡20～71歲，平均41.69歲。所有病例均采用 PCR-反向點(diǎn)雜交法進(jìn)行HPV-DNA的檢測并分型。

2.樣本采集

不能在患者月經(jīng)期采集，且采集對(duì)象在48小時(shí)內(nèi)無性行為，沒有對(duì)陰道使用藥物或沖洗。醫(yī)生通過窺陰器暴露宮頸，先拭去宮頸口分泌物，再采用專用拭子探入患者宮頸口內(nèi)2～3cm，按順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)3～4周以獲得足夠的脫落細(xì)胞，然后取出置于盛有1mL無菌生理鹽水的樣本管中，作上標(biāo)記，儲(chǔ)藏于-20℃條件環(huán)境中。兩周內(nèi)檢測，實(shí)驗(yàn)操作前要振蕩搖勻。

二、儀器及試劑

采用達(dá)安基因股份有限公司（廣州）生產(chǎn)的HPV分型基因檢測試劑盒，試劑盒包括DNA提取液、聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase chain reaction，PCR）的反應(yīng)液、Taq酶、陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品、雜交中和液、變性液、洗液、顯色液、酶標(biāo)原液、基因芯片。同時(shí)對(duì)19種基因亞型HPV進(jìn)行分析，其中高危型16種：16、53、58、52、31、33、56、39、68、18、66、51、35、59、45、6、11、43亞型和 CP8304 型，低危型HPV 3種：6、11、43 型。

三、方法

實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照HPV分型檢測試劑盒說明書進(jìn)行，具體步驟如下：（1）抽提樣本DNA。（2） PCR擴(kuò)增：首先93℃熱作用3min使DNA變性，然后在63℃退火，使引物與DNA模板結(jié)合，最后在72℃延伸，保持7min。（3）PCR產(chǎn)物雜交：把PCR 產(chǎn)物置于醫(yī)用核酸分子快速雜交儀中，與分型雜交膜條進(jìn)行雜交及酶標(biāo)顯色。（4）觀察結(jié)果：采用肉眼觀察，HPV分型雜交膜上有19種基因型，并設(shè)有質(zhì)控點(diǎn)。若質(zhì)控點(diǎn)陽性，其他點(diǎn)陰性，則結(jié)果判定為陰性。質(zhì)控點(diǎn)陽性，再根據(jù)膜條HPV分型分布圖確定HPV病毒類型。

四、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理

采用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，對(duì)于多型感染者，各亞型的陽性率重復(fù)計(jì)算，感染率的差別分析采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義。

結(jié)果

一、HPV的感染率

全部樣本感染具體情況如表1。1216例樣本中共檢測出HPV陽性324例，感染率為26.64%。其中，高危型感染294例，感染率為24.18%；低危型感染30例，感染率為2.47%。部分型別間感染率差異顯著，P<0.05。

二、不同年齡組HPV的感染率

把1216例患者按10歲為間隔單位分組，感染者年齡分布情況如表2。從表2可以看出，31～40歲組感染率最高，占31.48%；其次是41～50歲組，占29.01%；20～30歲組占20.68%；51～60歲組占15.12 %；大于61歲組占3.70%。部分年齡組間差異顯著，P<0.05。

三、HPV感染亞型的單純感染與多重感染情況分析

1216例樣本中HPV 高危及低危亞型單純感染及多重感染情況如表3。在324例陽性中，單一感染所占比例最高，為78.39%，雙重感染占18.76%，三重感染占2.47%。單純感染與多重感染間差異顯著，P<0.05。

討論

宮頸癌是婦女疾病中一種很常見的惡性腫瘤，有調(diào)查數(shù)據(jù)顯示全球每年新發(fā)宮頸癌患者40萬至50萬例，其中我國人數(shù)約為12萬，接近全球女性宮頸癌新發(fā)病例的三分之一。人乳頭瘤病毒（HPV）感染是宮頸癌和癌前病變的主要原因，在宮頸癌患者的癌變組織中檢測出HPV的患者超過90%。以往有研究顯示，HPVl6、18型很容易引起具有侵襲性或惡性程度高的宮頸癌，調(diào)查數(shù)據(jù)中HPVl6、18型約占到70%，由此，感染l6、18型HPV的女性宮頸癌發(fā)病率很高，還有一些高危型（如普遍的皮膚型HPV感染）是與疣狀表皮發(fā)育不良或其他惡性腫瘤有關(guān)，本研究與此基本相符。HPV感染具有一定的地域性，根據(jù)前人研究，我國宮頸癌的高發(fā)地區(qū)HPV感染率高達(dá)20%，其他低發(fā)地區(qū)HPV的感染率不超過10%。

HPV是球形DNA病毒，可以使人體正常細(xì)胞永生化，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖，然后使感染部位發(fā)生病變。其病變機(jī)理為HPV感染后連續(xù)不斷地刺激角化細(xì)胞，同時(shí)激活有絲分裂增殖的腫瘤基因，使腫瘤基因持續(xù)表達(dá)然后生成腫瘤。女性生殖道感染HPV的現(xiàn)象非常普遍，有數(shù)據(jù)顯示正常女性的HPV感染率為20%～47%，本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果為陽性率26.64%，符合相關(guān)研究的數(shù)據(jù)。HPV的傳播方式以性接觸傳播為主，可導(dǎo)致CA、宮頸癌、肛門肛管癌、扁桃體癌、口腔癌等疾病。不同型別的HPV侵犯的組織部位不同，感染后引起的臨床病癥也不同，低危型會(huì)導(dǎo)致尋常疣、扁平疣、跖疣等，高危型很容易誘發(fā)宮頸癌、直腸癌、口腔癌、扁桃體癌等。

HPV感染率與年齡關(guān)系較大，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)，發(fā)達(dá)國家HPV感染峰值一般出現(xiàn)在25歲以下，然后隨年齡的增加呈下降趨勢，在發(fā)展中國家里HPV感染的年齡分布曲線呈U型。本次實(shí)驗(yàn)中，20～40歲人群為感染率高峰，50歲以上女性感染率接近20%，感染年齡分布有年輕化趨勢。根據(jù)SELLORS的研究，年輕女性HPV感染率很高的主要原因是在20歲前開始性生活和沒有固定的性伙伴，年齡較大出現(xiàn)的感染高峰是因?yàn)镠PV具有潛伏性，婦女在感染后，機(jī)體免疫力隨年齡的增長而下降，從而病毒再次被激活引起感染。根據(jù)以往研究，HPV感染以單一感染為主，單一感染約占總感染人數(shù)的3/4。本次研究中，單一感染占總陽性數(shù)的78.39%，與相關(guān)研究數(shù)據(jù)接近。多重感染中，以二重感染為主，三重及以上感染較少，多重感染所載病毒量更多，更容易發(fā)生宮頸癌。

本次實(shí)驗(yàn)通過PCR-反向點(diǎn)雜交法檢測樣本的HPV感染情況并分型，此技術(shù)在國內(nèi)運(yùn)用廣泛，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。PCR-反向點(diǎn)雜交法對(duì)DNA純度要求低，特異性強(qiáng)，靈敏度高，操作簡便、快速，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。將PCR法運(yùn)用于HPV感染檢測，可以完成宮頸癌及癌前病變等高風(fēng)險(xiǎn)人群的初次篩選，對(duì)控制HPV感染具有重要意義，及早預(yù)防與治療，降低宮頸癌的發(fā)生。

參考文獻(xiàn)

王巧剛，蔣錦文，陳黎亞.浙江省東陽地區(qū)女性人乳頭瘤病毒感染現(xiàn)狀及其亞型分布的調(diào)查研究[J].現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2017，29（05）：657-659.

梁培琴.宮頸高危型人乳頭瘤病毒感染危險(xiǎn)因素的研究[D].南方醫(yī)科大學(xué)，2016.

沈紅，程濤，王芳，白松.滇東北地區(qū)4682例女性人乳頭瘤病毒感染及其亞型分型分布調(diào)查[J].昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，36（03）：23-25.