蛋氨酸鉻對鯉糖代謝相關(guān)酶活性及IR、GLUT2和SGLT基因表達(dá)的影響

崔培，尹帥，孫金輝，程鎮(zhèn)燕，白東清，喬秀亭，張寶龍，翟勝利

( 1.天津農(nóng)學(xué)院 水產(chǎn)學(xué)院，天津市水產(chǎn)生態(tài)與養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384；2.天津晨輝飼料有限公司，天津 301800)

糖類是廉價且重要的能源物質(zhì)，不僅為機(jī)體提供能量，而且參與合成非必需氨基酸[1]。在飼料中添加適量的糖類不僅可以節(jié)約蛋白質(zhì)，降低飼料成本，同時還能減少氨氮的排放，減輕對水體環(huán)境的污染[2]。魚類被認(rèn)為是“先天的糖尿病體質(zhì)”，其對糖類的利用能力遠(yuǎn)不如陸生動物[3]，飼料中糖水平超過一定限度會導(dǎo)致魚類生長遲緩，抗病力減弱，甚至死亡[4-5]。因而，如何提高魚類對糖類的利用能力已成為其營養(yǎng)學(xué)的研究重點(diǎn)。

鉻是一種人體和動物體必需的微量元素，在機(jī)體內(nèi)主要以三價鉻離子(Cr3+)的形式存在。鉻毒性小，在肝臟組織中含量較高[6-7]。鉻在機(jī)體中主要影響糖代謝過程，是胰島素活性的輔因子和葡萄糖耐量因子。目前，鉻作為營養(yǎng)素在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的研究已經(jīng)取得一些成果，研究表明，在飼料中添加適宜水平的Cr3+可以有效促進(jìn)草魚Ctenopharyngodonidellus[8]、團(tuán)頭魴Megalobramaamblycephala[9]、大黃魚Larmichthyscrocea[10]、虹鱒Oncorhynchusmykiss[11]、凡納濱對蝦Litopenaeusvannamei[12]和中華絨螯蟹Eriocheirsinensis[13]的生長性能，提高羅非魚Oreochromisniloticus×Oreochromisaureus[14]、條紋鱸Moronesaxatilis[15]的糖利用能力，還可增強(qiáng)莫桑比克羅非魚[16]、虹鱒[17]免疫機(jī)能，此外，Cr3+還能有效改善魚體應(yīng)激狀態(tài)[18-19]。

鯉是中國重要的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖魚類，具有抗病力和生活力強(qiáng)等特點(diǎn)。目前，已有學(xué)者在用Cr3+促進(jìn)鯉生長和加強(qiáng)飼料利用方面做了一些研究[20-21]，但有關(guān)Cr3+影響鯉糖利用能力的研究較少，且這些研究所使用的鉻源多是無機(jī)鉻鹽，而動物對無機(jī)鉻的利用率遠(yuǎn)低于有機(jī)鉻，有機(jī)鉻的生物活性也更強(qiáng)[22-23]。蛋氨酸鉻(CrMet)是蛋氨酸與Cr3+的螯合物，能夠有效緩解礦物元素之間的拮抗競爭作用，更有利于鉻的吸收。筆者前期研究了不同Cr3+水平對鯉生長、血液指標(biāo)和部分免疫指標(biāo)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，0.8 mg/kg Cr3+組獲得最優(yōu)生長性能和免疫力[24]。為進(jìn)一步探討Cr3+對鯉糖利用能力的影響，本試驗(yàn)在飼料中添加不同水平蛋氨酸鉻，檢測其對鯉糖代謝相關(guān)酶活力及其基因表達(dá)的影響，旨在為探究鉻促進(jìn)鯉糖代謝的機(jī)理提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

CrMet購自湖北拓楚慷元醫(yī)藥化工有限公司，有效含量為99%，Cr3+含量為80%。試驗(yàn)用鯉購自天津晨輝飼料有限公司。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)飼料的制備 以酪蛋白為蛋白源，大豆油為脂肪源，糊精為糖源，CrMet為鉻源，基礎(chǔ)飼料配方為：豆油6.0%、預(yù)混物1.0%、氯化膽堿0.2%、微晶纖維素19.0%、羧甲其纖維素鈉2.0%、磷酸二氫鈣1.8%、糊精35.0%，在基礎(chǔ)飼料中添加Cr3+水平分別為0(對照)、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mg/kg(飼料)，制成7種純化飼料。所有飼料原料均過80目篩，原料逐級放大混勻后，用雙螺桿制粒機(jī)制成顆粒飼料，飼料自然風(fēng)干后保存?zhèn)溆谩ｏ暳铣Ｒ?guī)營養(yǎng)組成見表1。

表1試驗(yàn)飼料的常規(guī)營養(yǎng)組成

Tab.1 Approximate nutrient composition of the experimental dietsw/%

分別采用105 ℃烘干恒重法、凱氏微量定氮法、索式抽提法和馬弗爐550 ℃灼燒法測定水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和灰分含量。

1.2.2 試驗(yàn)設(shè)計 試驗(yàn)于天津晨輝飼料有限公司養(yǎng)殖基地進(jìn)行，正式試驗(yàn)開始前先進(jìn)行1周暫養(yǎng)馴化，期間用不添加Cr3+的基礎(chǔ)組飼料投喂，待試驗(yàn)魚適應(yīng)養(yǎng)殖基地環(huán)境后，從中選取健康的體質(zhì)量為(40.95±4.80)g的試驗(yàn)魚，隨機(jī)分為7組，每組設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)60尾魚。于每日8:00和17:00投喂，投喂量為魚體質(zhì)量的3%～4%，投喂后1 h吸去糞便，日換水量為1/3～1/2，養(yǎng)殖容器為800 L藍(lán)色塑料水箱。試驗(yàn)期間，水溫為(28.0±1.0)℃，水體pH為(7.0±0.2)，水中溶解氧≥5.0 mg/L，氨氮≤0.05 mg/L，養(yǎng)殖周期為8周。

1.2.3 樣品采集 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，禁飼48 h，從每箱中隨機(jī)選取10尾魚，用MS-222麻醉后迅速置于冰盤上進(jìn)行解剖，取其肝胰臟，放入液氮中速凍后，轉(zhuǎn)入超低溫冰箱(-80 ℃)中保存，以備進(jìn)行肝胰臟糖代謝酶活性的測定。

余下的試驗(yàn)魚在禁飼48 h后進(jìn)行再投喂，于投喂0、3、6、12、24、48 h時取0(對照)、0.8、3.2 mg/kg Cr3+組試驗(yàn)魚的肝胰臟和腸道，放入液氮中速凍后，轉(zhuǎn)入超低溫冰箱(-80 ℃)中保存，用于糖代謝相關(guān)基因表達(dá)的檢測。

1.2.4 糖代謝酶活力測定 肝胰臟解凍后按質(zhì)量與體積比為1 mg∶9 mL加入預(yù)冷的生理鹽水，使用玻璃勻漿器在冰水浴中制成10% 的組織勻漿液，4 ℃下以4000 r/min離心10 min，取上清液。肝胰臟中己糖激酶(Hexokinase, HK)、丙酮酸激酶(Pyruvate Kinase, PK)、琥珀酸脫氫酶(Succinate Dehydrogenase, SDH)均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測定；磷酸烯醇式丙酮酸激酶(Phosphoenolpyruvate carboxykinase, PEPCK)、磷酸果糖激酶(Phosphofructokinase, PFK)、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(Glucose 6-phosphatedehydrogenase, G6PDH) 活性均采用Elisa試劑盒(Assay Designs公司)測定。

1.2.5 總RNA提取及熒光定量PCR表達(dá)

(1)總RNA提取及cDNA合成。分別取適量肝胰臟、腸道組織(約50 mg)，剪碎后放入玻璃勻漿器中，加2 mL RNAiso Plus研磨組織至完全彌散均勻。按照RNAiso Plus說明書提取鯉肝胰臟RNA。提取RNA過程中使用的離心管、槍頭等耗材均經(jīng)去RNA酶處理。最后加適量DEPC水溶解。利用微量分光光度計測定鯉肝胰臟總RNA的OD260 nm/OD280 nm值，均在1.8～2.1，說明提取出的總RNA純度較高。再利用PrimeScriptTMRT Master Mix試劑盒(TaKaRa)，將肝胰臟中的總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA第一鏈。

(2)引物設(shè)計。采用Primer Premier 6.0軟件進(jìn)行引物設(shè)計，引物設(shè)計所依據(jù)的基因模板序列均來源于NCBI DNA數(shù)據(jù)庫。引物由蘇州金唯智生物科技有限公司合成。以β-肌動蛋白基因(β-actin)(序列號M24113)作為內(nèi)參基因。引物設(shè)計見表2，其中IR為胰島素受體基因(序列號EU009571.1)，GLUT2為葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體2基因(序列號AF247730.1)，SGLT為鈉/葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體基因(序列號JN867793.1)。

表2 引物設(shè)計Tab.2 Primer design

(3)熒光定量。熒光定量PCR采用SYBR Green染色法，選用SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ試劑盒，在BIO-RAD系統(tǒng)進(jìn)行，采用兩步法。PCR反應(yīng)體系(共20 μL)：SYBR Premix Ex Taq Ⅱ(2×)10 μL，上、下游引物(10 μmol/L)各0.5 μL，cDNA 2 μL，ddH2O 7 μL。

PCR反應(yīng)條件為：95 ℃下預(yù)變性3 min；95 ℃下循環(huán)變性15 s，51～58 ℃下退火復(fù)性15 s，共進(jìn)行40個循環(huán)；72 ℃下再延伸2 min。收集熒光信號，每個樣本重復(fù)3次，目的基因相對表達(dá)量用2-△△Ct法進(jìn)行計算。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±S.D.)表示。采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA)，用Duncan法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同Cr3+水平對鯉肝胰臟糖代謝酶活力的影響

從表3可見：Cr3+添加水平為0.8～1.6 mg/kg時，試驗(yàn)魚肝胰臟HK活力顯著高于其他各組(P<0.05)，而PEPCK活力則顯著低于對照組和3.2 mg/kg Cr3+添加組(P<0.05)；PK活力在Cr3+添加水平為0.2～1.6 mg/kg時，顯著高于對照組和0.1 mg/kg Cr3+添加組(P<0.05)；PFK活力在Cr3+添加水平為0.8～3.2 mg/kg時，顯著高于其他各組(P<0.05)；SDH活力最高值出現(xiàn)在0.8 mg/kg Cr3+添加組，顯著高于對照組、0.1、0.2、1.6、3.2 mg/kg Cr3+添加組(P<0.05)；而Cr3+添加水平對G6PDH活力無顯著性影響(P>0.05)。

表3不同Cr3+水平對鯉肝胰臟糖代謝酶活力的影響

Tab.3EffectsofCr3+levelsonactivitiesofenzymesrelatedtocarbohydratemetabolisminhepatopancreasofcommoncarp

Cr3+/(mg·kg-1)己糖激酶/(U·g-1 prot)HK丙酮酸激酶/(U·g-1 prot)PK磷酸果糖激酶/(U·g-1 prot)PFK 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶/(mU·g-1 prot)G6PDH磷酸烯醇式丙酮酸酸羧激酶/(mU·g-1 prot)PEPCK琥珀酸脫氫酶/(U·mg-1 prot)SDH0 13.21±1.49b11.24±0.09b8.16±1.19b1.65±0.2413.56±1.04a3.34±0.47cd0.1 15.34±1.52b10.61±1.09b7.09±1.37b1.51±0.2211.19±0.56bc3.94±0.65bc0.2 13.66±5.38b16.98±2.89a7.60±1.25b1.51±0.1610.06±1.77bc2.25±0.68d0.4 10.91±2.12b16.34±2.06a8.55±1.44b1.55±0.129.98±0.42ab5.24±0.85ab0.8 25.00±1.70a17.58±0.73a10.81±0.05a1.76±0.339.00±1.70c6.34±0.38a1.6 29.07±6.37a16.84±2.99a10.86±1.08a1.50±0.089.44±0.87c3.68±0.95c3.2 12.67±2.40b15.11±1.60ab11.32±1.30a1.90±0.2012.05±0.30ab4.38±0.38bc

注：同列中標(biāo)有不同小寫字母者表示組間有顯著性差異(P<0.05)，標(biāo)有相同小寫字母者表示組間無顯著性差異(P>0.05)，下同

Note:The means with different letters within the same column are significant differences at the 0.05 probability level, and the means with the same letters within the same column are not significant differences, et sequentia

2.2 禁食再投喂后不同Cr3+水平對鯉糖代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

2.2.1 Cr3+水平對鯉肝胰臟IR基因表達(dá)的影響 從表4可見：禁食再投喂后，各組試驗(yàn)魚肝胰臟中IRmRNA表達(dá)量均在12 h時達(dá)到峰值，其中，對照組、3.2 mg/kg Cr3+添加組的IRmRNA表達(dá)量在12 h時顯著高于其他時間點(diǎn)(P<0.05)；0.8 mg/kg Cr3+添加組的IRmRNA表達(dá)量在12 h時顯著高于0、3、6、48 h時(P<0.05)，但與24 h時相比無顯著性差異(P>0.05)。3、12 h時，0.8 mg/kg Cr3+添加組IRmRNA表達(dá)量顯著高于3.2 mg/kg組(P<0.05)，但與對照組均無顯著性差異(P>0.05)；24、48 h時，0.8 mg/kg Cr3+組IRmRNA表達(dá)量顯著高于對照組和3.2 mg/kg組(P<0.05)。

表4 禁食再投喂后不同Cr3+水平下鯉肝胰臟IR表達(dá)變化情況

注：標(biāo)有不同小寫字母表示同組內(nèi)不同時間點(diǎn)有顯著性差異(P<0.05)；標(biāo)有不同大寫字母表示相同時間點(diǎn)不同組間有顯著性差異(P<0.05)；標(biāo)有相同字母者表示組間有顯著性差異(P>0.05)，下同

Note: Means with different letters are significant differences at different time in the same group；means with different capital letters are significant differences in different groups at the same time, and means with same letters are not significant differences, et sequentia

2.2.2 Cr3+水平對鯉肝胰臟GLUT2基因表達(dá)的影響 從表5可見：禁食再投喂后，不同Cr3+水平組鯉肝胰臟中GLUT2 mRNA表達(dá)量均隨投喂時間的延長而呈先上升后下降的趨勢，對照組鯉肝胰臟GLUT2 mRNA表達(dá)量在3、6 h時顯著高于12、24、48 h時(P<0.05)；0.8 mg/kg Cr3+添加組鯉GLUT2 mRNA表達(dá)量在6 h時達(dá)到峰值，且顯著高于除12 h外的其他各時間點(diǎn)(P<0.05)；3.2 mg/kg Cr3+添加組鯉GLUT2 mRNA表達(dá)量峰值也出現(xiàn)在6 h時，且顯著高于除3 h外的其他各時間點(diǎn)(P<0.05)。3 h時，0.8、3.2 Cr3+mg/kg 添加GLUT2 mRNA表達(dá)量均顯著高于對照組(P<0.05)；而6 h時,各組間均無顯著性差異(P>0.05)；12、24、48 h時，0.8 mg/kg Cr3+添加組GLUT2 mRNA表達(dá)量顯著高于對照組和3.2 mg/kg Cr3+添加組(P<0.05)。

表5禁食再投喂后不同Cr3+水平下鯉肝胰臟GLUT2表達(dá)變化情況

Tab.5TheGLUT2expressioninhepatopancreasofcommoncarprefeddietscontainingdifferentlevelsofCr3+afterfasten

Cr3+/(mg·kg-1)0 h3 h6 h12 h24 h48 h00.83.21.00±0.00ab1.00±0.00d1.00±0.00b1.11±0.05Ba1.17±0.08Acd1.35±0.03Aa1.21±0.22Aa1.92±0.29Aa1.42±0.32Aa0.82±0.01Bb1.71±0.19Aab0.99±0.03Bb0.84±0.05Bb1.38±0.10Abc0.95±0.05Bb0.55±0.02Cc1.11±0.03Acd0.81±0.02Bb

2.2.3 Cr3+水平對鯉腸道SGLT表達(dá)的影響 從表6可見：禁食再投喂后，不同Cr3+水平組鯉腸道中SGLTmRNA表達(dá)量均在12 h時達(dá)到峰值，其中，對照組和3.2 mg/kg Cr3+組SGLTmRNA表達(dá)量顯著高于其他各時間點(diǎn)(P<0.05)，0.8 mg/kg Cr3+添加組表達(dá)量顯著高于除6 h外的其他各時間點(diǎn)(P<0.05)；各時間點(diǎn)下，不同水平蛋氨酸鉻處理后鯉腸道中SGLTmRNA表達(dá)量均無顯著性差異(P>0.05)。

表6 禁食再投喂后不同Cr3+水平下鯉腸道SGLT表達(dá)變化情況

3 討論

3.1 Cr3+對鯉糖代謝酶活力的影響

Cr3+通過調(diào)節(jié)葡萄糖代謝酶影響機(jī)體葡萄糖代謝。糖酵解是包括魚類在內(nèi)的所有生物有機(jī)體唯一的葡萄糖分解途徑。HK是肝胰臟利用葡萄糖的第一限速酶，它能催化葡萄糖生成葡萄糖-6磷酸，其活性受葡萄糖-6-磷酸的抑制，這一反應(yīng)保證進(jìn)入細(xì)胞的葡萄糖能立即被磷酸化，其活性高低決定了機(jī)體糖代謝和胰島素分泌的幅度[25]。除HK外，PK也是控制糖酵解途徑速率的關(guān)鍵酶。PK催化的反應(yīng)是葡萄糖生成丙酮酸的最后一步反應(yīng)，即催化磷酸烯醇式丙酮酸轉(zhuǎn)化成丙酮酸。本試驗(yàn)中，在飼料中添加0.8 mg/kg Cr3+后，HK、PFK和PK活性均較對照組及低水平Cr3+組顯著升高，說明Cr3+能夠刺激魚體糖酵解過程，加速葡萄糖的分解代謝。張宏馨等[26]研究發(fā)現(xiàn)，給糖尿病小鼠灌喂富鉻酵母水溶液后，其HK活力顯著升高，與本試驗(yàn)結(jié)果相類似。而Ahmed 等[20]對鯉的研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加CrCl3對其HK活力無影響，與本試驗(yàn)結(jié)果不同，其原因可能是由于試驗(yàn)采用的鉻源不同造成的，本試驗(yàn)中使用的是氨基酸螯合鉻，一般認(rèn)為，在生理環(huán)境中，有機(jī)鉻的生物活性和穩(wěn)定性遠(yuǎn)高于無機(jī)鉻[27]，無機(jī)鉻的吸收率僅為1%～3%[28]，而有機(jī)鉻的吸收率可達(dá)10%～25%[29]，而且氨基酸螯合鉻還能夠有效緩解礦物元素間的拮抗競爭作用，因而，本試驗(yàn)結(jié)果可能因?yàn)樵囼?yàn)魚吸收更多的Cr3+所致。潘慶等[30]對奧尼羅非魚的研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)吡啶羧酸鉻處理后，試驗(yàn)魚肝胰臟PFK活力顯著升高，也與本試驗(yàn)結(jié)果相類似。

PEPCK作為糖異生關(guān)鍵的限速酶，能催化草酰乙酸在磷酸烯醇式丙酮酸轉(zhuǎn)移[31]。研究發(fā)現(xiàn)，Cr3+一方面在機(jī)體內(nèi)形成核酸衍生物直接抑制PEPCK活性[32]；另一方面又可以通過提高胰島素效率而進(jìn)一步間接抑制活性。本試驗(yàn)中，在飼料中添加0.8、1.6 mg/kg的Cr3+時有效降低了PEPCK活性，與喬偉[33]對大鼠的研究結(jié)果相一致。SDH是三羧酸循環(huán)(TCA)的限速酶之一，研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)Cr3+處理后，大鼠骨骼肌細(xì)胞SDH活性顯著升高，分析其原因可能是Cr3+通過增強(qiáng)胰島素的生物學(xué)功能，進(jìn)而提高胰島素對SDH活性的影響[33]。本試驗(yàn)結(jié)果與上述結(jié)果相類似，在飼料中添加0.8 mg/kg Cr3+后，鯉肝胰臟的SDH活性顯著升高，說明Cr3+有助于促進(jìn)鯉葡萄糖分解代謝功能，提高葡萄糖轉(zhuǎn)化為能量的利用效率。本試驗(yàn)中，當(dāng)Cr3+添加水平為3.2 mg/kg時，HK、PK、PEPCK和SDH活性均回到與對照組相似水平，說明Cr3+添加量過多，反而會對鯉的糖利用能力產(chǎn)生負(fù)面影響。G6PDH是糖代謝的磷酸戊糖途徑的關(guān)鍵酶。本試驗(yàn)中，Cr3+未對G6PDH產(chǎn)生顯著影響，這與Pan等[34]對羅非魚的研究結(jié)果相一致。

3.2 Cr3+對鯉糖代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

糖類物質(zhì)被魚類攝入體內(nèi)后，被腸道消化酶分解為葡萄糖。葡萄糖被吸收進(jìn)入血液后，使血糖濃度升高，促使胰島素分泌并作用于肝臟組織靶細(xì)胞，從而激活胰島素信號通路[35]，且葡萄糖進(jìn)入肝臟后的過程必須經(jīng)過胰島素信號通路來完成[36]。胰島素會與細(xì)胞膜上的特異性受體IR相結(jié)合，將信號由胞外傳遞到胞內(nèi)，使得處于胞漿的小囊泡內(nèi)的GLUT轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜上，將胞外的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)至胞內(nèi)，完成葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)。目前，已有學(xué)者研究了Cr3+影響哺乳動物糖代謝的作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)Cr3+可通過增加IR的數(shù)量，提高其活性，加快GLUT的轉(zhuǎn)膜速率，進(jìn)而影響葡萄糖在機(jī)體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)過程[37]。Miranda等[38]對大鼠的研究發(fā)現(xiàn)，與不添加Cr3+的對照組相比，Cr3+處理后其IRmRNA的表達(dá)量顯著升高。此外，體外試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，在大鼠骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)液中添加Cr3+可以顯著提高IR和GLUT4 mRNA的表達(dá)量[39]。孫敏敏等[40]研究了不同鉻源及水平對羅非魚IR和GLUT2基因表達(dá)的影響，結(jié)果顯示，在飼料中添加不同水平的酵母鉻(CrY)、吡啶羧酸鉻(CrP)對IR基因表達(dá)無明顯影響，但在飼料中添加0.8 mg/kg CrP 和 0.8 mg/kg CrY能顯著提高羅非魚肝臟組織GLUT2 基因的表達(dá)。筆者前期研究了不同Cr3+水平對鯉生長、血液指標(biāo)以及部分免疫指標(biāo)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，0.8 mg/kg Cr3+組獲得最優(yōu)生長性能及免疫力，結(jié)合本試驗(yàn)糖代謝酶活性結(jié)果，選擇0.8、3.2 mg/kg Cr3+組檢測IR、GLUT2和SGLT基因表達(dá)情況，得出與上述試驗(yàn)相類似的結(jié)果；禁食再投喂后3、12、24、48 h時，0.8 mg/kg Cr3+添加組試驗(yàn)魚GLUT2 mRNA表達(dá)量均顯著高于對照組，而隨Cr3+添加水平升高至3.2 mg/kg，禁食再投喂后12、24、48 h時，GLUT2 mRNA的表達(dá)量反而顯著降低；此外，在禁食再投喂后12、48 h時，0.8 mg/kg Cr3+添加組IRmRNA表達(dá)量較對照組也顯著升高。

有研究表明，吸收葡萄糖主要是通過腸道黏膜的鈉/葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體(SGLT)，它是協(xié)助葡萄糖吸收的主要蛋白，對葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體(GLUT)的吸收具有重要意義[37]。已有研究發(fā)現(xiàn)，飼料中糖的種類與含量、Na+，以及胰島素樣生長因子 (IGF)、蛋白激酶、養(yǎng)殖動物的年齡與健康狀況等均會影響SGLTmRNA的表達(dá)[38-43]。聶國興等[44]在羅非魚飼料中添加木聚糖酶，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，適宜水平的木聚糖酶能上調(diào)前腸SGLTmRNA的表達(dá)，促進(jìn)葡萄糖吸收，從而提高尼羅羅非魚的生長速度。而本試驗(yàn)中不同水平Cr3+處理后未對SGLTmRNA產(chǎn)生影響，說明Cr3+可能不具有調(diào)控SGLT基因的作用，其原因還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，以蛋氨酸鉻為鉻源時，在飼料中添加0.8 mg/kg Cr3+能提高糖酵解途徑酶活性，降低糖異生途徑酶活性，誘導(dǎo)IR、GLUT2基因的相對表達(dá)量，促進(jìn)鯉的糖代謝作用。