4株蠟蚧輪枝菌對扶桑綿粉蚧的致病力測定＊

方大琳

（云霄縣林業(yè)局，福建 漳州 363300；）

扶桑綿粉蚧（Phenacoccus solenopsis），半翅目（Hemiptera）、綿粉蚧亞科（Phenacoccinae）、綿粉蚧屬（Phenacoccus），為全國農(nóng)業(yè)、林業(yè)植物檢疫性有害生物，2008年6月首次在我國廣州扶桑上被采集并確定為扶桑綿粉蚧[1]。目前，福建省已有多個縣（區(qū)）發(fā)現(xiàn)該蟲的分布。

扶桑綿粉蚧的寄主十分廣泛，包括了多種經(jīng)濟作物、園林植物、果樹及雜草等[2]。該蟲主要以若蟲和成蟲群居于寄主植物的莖、花蕾和葉腋處取食[3]，使其失水干枯，長勢衰弱，亦可造成花蕾脫落；分泌的蜜露誘發(fā)的煤污病可導致葉片脫落，嚴重時可造成植株成片死亡[4]。

蠟蚧輪枝菌（Verticillium lecanii)是一種能寄生于蚜蟲、介殼蟲、粉虱等多種昆蟲和螨類等害蟲的蟲生真菌[5]，具有對人畜環(huán)境安全且害蟲不易產(chǎn)生耐藥性等化學農(nóng)藥不具備的優(yōu)點。筆者已在實驗室篩選出4株能成功侵染扶桑綿粉蚧的菌株，本文將以扶桑綿粉蚧雌成蟲進行定量的點滴接種，對其致病力進行測定，以期篩選出對該蟲具有較高致病力的菌株，為利用蟲生真菌防治扶桑綿粉蚧提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試蟲源

供試的扶桑綿粉蚧雌成蟲6月中旬采集于福建農(nóng)林大學校園內(nèi)扶桑的枝條上。

1.2 供試菌株

供試的菌株來自福建農(nóng)林大學昆蟲生態(tài)學實驗室，分別為V17、V20、V3450和V4060，已通過試驗證實均能成功侵染扶桑綿粉蚧。菌株來源及原寄主信息見表1。菌株保存于4℃的冰箱中，取出后在PDA培養(yǎng)基上活化備用。

表1 4株蠟蚧輪枝菌的地理來源

1.3 孢子懸浮液的制備

將菌株接種到PDA平板上，在26±1℃和10L:14D光照條件下于智能人工氣候箱中培養(yǎng)8d，待菌株產(chǎn)孢后，分次加入0.02%吐溫-80無菌水，用接種針輕輕刮下菌絲和分生孢子，并用干凈的錐形瓶收集菌懸液。用漩渦振蕩器充分震蕩錐形瓶使孢子分散，用無菌的棉花和針筒濾去菌絲和其他雜質(zhì)。用血球計數(shù)板在顯微鏡下計算孢子濃度，并用含0.02%吐溫-80的無菌水配制成1.0×108個/mL的高濃度孢子懸浮液備用。

1.4 菌株對扶桑綿粉蚧雌成蟲的致病力測定

采集扶桑嫩綠枝條，洗凈后作為致病力測定試驗中蟲體的食物來源，用浸濕的棉花團包裹枝條末端，再用保鮮膜包裹以減少葉片的水分流失。將枝條置于規(guī)格為500 mL一次性塑料杯子中，分別挑選長勢一致的扶桑綿粉蚧雌成蟲移至枝條上。將每個菌株分別配制成1.6×107、8.0×106、4.0×106、2.0×106、1.0×106個/mL等5個梯度的孢子懸浮液，按每頭蟲1.0 μL的量將孢子懸浮液接種于蟲體表面，每個處理采用120頭蟲并設3個重復，以塑料薄膜和橡皮筋將杯口封住防止其逃逸，并用針扎孔以便透氣。將塑料杯置于26±1℃、10L:14D、相對濕度75%的人工氣候培養(yǎng)箱中，每天檢查并記錄蟲體的死亡數(shù)，連續(xù)觀察9d。將死亡的蟲體移出保濕培養(yǎng)，根據(jù)蟲體表面是否覆蓋菌絲確定是否為有效致死。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

將實驗測得的不同時間不同劑量下的試蟲存活數(shù)在DPS數(shù)據(jù)處理軟件中采用生物測定任務欄里的時間-劑量-死亡率（TDM）模型進行處理和分析，軟件將計算出劑量效應參數(shù)β和時間效應參數(shù)τi，并以此計算出每個時間條件下的致死中濃度（LC50）以及每個濃度條件下的致死中時間（LT50）。軟件還將采用Hosmer-Lemeshow檢驗對模型的擬合度進行檢驗。該模型對生測數(shù)據(jù)進行分析能夠兼顧時間效應與劑量效應，體現(xiàn)試驗數(shù)據(jù)的完整性[6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 扶桑綿粉蚧感染蠟蚧輪枝菌后的死亡情況

扶桑綿粉蚧雌成蟲感染蠟蚧輪枝菌后，一般第2d開始出現(xiàn)少量蟲體死亡，但高劑量下第1d也偶見個別死亡。5 d后出現(xiàn)死亡高峰，之后趨于平緩。試蟲死亡初期蟲體僵硬，繼續(xù)保濕培養(yǎng)1～3 d即有白色菌絲長出，表明死亡蟲體為菌株感染致死。

圖1表明，經(jīng)過4個菌株的孢子懸浮液出來后，扶桑綿粉蚧雌成蟲的累計死亡率總體上隨著孢子劑量的提高和處理時間的延長而上升。V3450以8.0×106個/mL的濃度的累計死亡率最高，為64.17%，而1.6×107個/mL處理的累計死亡率稍低，為63.33%，1.0×108個/mL的累計死亡率最低，為47.5%。V17以1.6×107個/mL的孢子濃度的累計死亡率最高，為61.67%，1.0×108個/mL的累計死亡率最低，僅為40.0%。V4060以1.6×107個/mL的濃度的累計死亡率最高，為60.83%，1.0×108個/mL的累計死亡率最低，為52.50%。V20以8.0×106個/mL的濃度的累計死亡率最高，為70.0%，而1.6×107個/mL處理的累計死亡率稍低，為66.67%，1.0×108個/mL的累計死亡率最低，為59.17%。四個菌株中以V20具有最高的累計死亡率（70.0%），對應的濃度為8×106個/mL。

圖1 蠟蚧輪枝菌對扶桑綿粉蚧雌成蟲的累計死亡率

2.2 蠟蚧輪枝菌對扶桑綿粉蚧致病力的TDM擬合結(jié)果

4個菌株對扶桑綿粉蚧雌成蟲致病力的TDM模型擬合獲得較為理想的結(jié)果，模擬及參數(shù)估計結(jié)果如表2所示。各菌株致病力的參數(shù)估計值的t檢驗均達到顯著水平（P＜0.05），這說明各個菌株對扶桑綿粉蚧的劑量效應與時間效應均顯著。而在用Hosmer&Lemeshow檢驗對模型的擬合性進行檢驗中，在df=8時，χ2=15.51，每個菌株的卡方值均小于15.51，這說明用TDM模型對數(shù)據(jù)的擬合是成功的。其中劑量效應最高的菌株為V17，參數(shù)β值為0.585，最低的菌株為V20。根據(jù)條件死亡率模型的時間效應參數(shù)γj的估計值，試蟲由V3450、V17、V20感染引起的死亡高峰出現(xiàn)在接種后第7d，而V4060引起的死亡高峰在第6d，這與實際觀察結(jié)果一致。

表2 蠟蚧輪枝菌對扶桑綿粉蚧雌成蟲致病力的TDM模型參數(shù)估計

2.3 不同菌株對扶桑綿粉蚧的劑量效應對比

根據(jù)TDM模型考察不同時間下劑量效應值，結(jié)果見圖1。經(jīng)過處理后，每個菌株的lg（LC50）均隨著接種時間的延長而降低，如菌株V3450、V17在接種后第4d的lg（LC50）分別為8.96和 8.56，第 9d 分別為 6.19 和 5.10。在前 4d 里，V17 的 lg（LC50）最低，表現(xiàn)出較強的致病力，V4060的數(shù)值最高，致病力最弱，另外兩個菌株居中；但在之后的5d里V17漸漸失去優(yōu)勢，反而前4d表現(xiàn)一般的V20在之后體現(xiàn)了較高的致病力。

2.4 不同菌株對扶桑綿粉蚧的時間效應對比

根據(jù)TDM模型考察不同劑量下的時間效應值，結(jié)果見表3。隨著濃度的上升，菌株對扶桑綿粉蚧的LT50均減小，表明濃度越大，致使50%蟲體死亡所需要的時間越短。在5個濃度梯度下，4個菌株的LT50從高到低排列，基本一致，V20所需要的時間最短，V4060次之，V3450再次之，V17所需要的時間最長。因此在4個菌株中，V20表現(xiàn)出了比其他4個菌株更強的致病力。

圖2 蠟蚧輪枝菌對扶桑綿粉蚧雌成蟲的LT50

表3 蠟蚧輪枝菌對扶桑綿粉蚧雌成蟲LT50(d)

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié)論

（1）4個菌株中除V17原寄主不詳外，其余3個菌株的原寄主均為半翅目粉虱，而扶桑綿粉蚧亦屬于半翅目害蟲，這應是蠟蚧輪枝菌具有一定的寄生?；缘捏w現(xiàn)，但不同來源的蠟蚧輪枝菌對扶桑綿粉蚧的致病力存在一定的差異。

（2）本實驗采用TDM模型分析蠟蚧輪枝菌對扶桑綿粉蚧的致病力，從各菌株處理下的死亡率模型參數(shù)估計值上看，4個菌株隨著孢子濃度的升高，總體對試蟲的累計死亡率均上升，對濃度上升最敏感的菌株為V17，最不敏感的菌株為V20。但同一孢子濃度條件下，V20均具有最高的累計死亡率，在8.0×106個/mL的濃度下可達70.0%。從劑量效應和時間效應兩方面考察菌株的lg（LC50）和LT50，V20表現(xiàn)出比其他三個菌株更強的致病力。

3.2 討論

目前對于扶桑綿粉蚧防控技術(shù)的研究主要在化學防治和生物防治上，但利用蟲生真菌防治該蟲的研究很少，僅閆鵬飛、袁盛勇等人測定了1株蠟蚧輪枝菌和1株球孢白僵菌對該蟲的致病力[7-9]，紅河學院的蠟蚧輪枝菌MZ041024菌株在3.0×108個孢子/mL的濃度下對雌成蟲的LT50為4.87d，而球孢白僵菌MZ041016在2.0×108個/mL的濃度下對雌成蟲的LT50為6.48 d。由于試驗設計中孢子濃度不一致，暫無法與這兩個菌株的致病力進行比較。

扶桑綿粉蚧受蟲生真菌侵染后，菌株將在蟲體表面長出分生孢子粉，而該蟲具有聚集為害的習性，這有利于菌株的大范圍侵染，從而達到更持久，更廣泛的防治效果。但該蟲體表附有粉狀蠟質(zhì)物，這為菌株的侵染帶來一定的阻力，因此篩選侵染力更好，致病力更強的菌株具有十分重要的意義。

致謝：福建農(nóng)林大學植物保護學院王聯(lián)德教授為本論文提供了試驗平臺，并對試驗和數(shù)據(jù)分析進行了悉心指導，在此表示感謝！