Parkin基因甲基化對(duì)鼻咽癌早期診斷及預(yù)后判斷的價(jià)值評(píng)價(jià)

陳曉鴻，趙淼，曾冬梅，黃穗華

（1. 廣東省深圳市中山大學(xué)附屬第八醫(yī)院，深圳 518033；2. 廣東省深圳市龍崗區(qū)耳鼻喉醫(yī)院，深圳 518000）

鼻咽癌屬于臨床發(fā)病率較高的惡性腫瘤，多見(jiàn)于我國(guó)南方。鼻咽癌早期多無(wú)典型臨床表現(xiàn)，待確診往往病情已經(jīng)發(fā)展至中晚期，轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)較高。目前，鼻咽癌多通過(guò)經(jīng)由化療進(jìn)行治療，而部分鼻咽癌患者局部惡變程度較高，故建議放化療聯(lián)合治療方案，但鼻咽癌早期確診仍為目前相關(guān)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重點(diǎn)研究課題。目前，癌癥組織Parkin基因甲基化相關(guān)報(bào)道很少[1,2]。本研究選擇2010年1月-2014年12月在我院及合作醫(yī)院接受治療的鼻咽癌患者52例、鼻咽良性病變組65例，以及同期體檢健康志愿者60例，對(duì)比三組病理結(jié)果；鼻咽癌組跟蹤隨訪36個(gè)月，觀察并分析復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移情況，獲得一定研究成果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年1月-2014年12月在我院接受治療的鼻咽癌患者52例、鼻咽良性病變組65例，選擇同期在我院接受健康體檢的正常人志愿者60例。鼻咽癌組52例中，男38例，女14例，年齡22歲-78歲，年齡平均（44.63±7.28）歲，TNM分期，T2者14例（26.92%），T3者30者（57.69%），T4者8例（15.38%）；N分期，N1者23例（44.23%），N2者22例（42.31%），N3者7例（13.46%）；貧血4例（7.69%），無(wú)貧血48例（92.31%）。鼻咽良性病變組65例，男41例，女25例，年齡21歲-75歲，年齡平均（43.17±7.65）歲；鼻炎22例（33.85%），鼻竇炎12例（18.46%），鼻息肉10例（15.38%），咽炎15例（23.08%），其他6例（9.68%）。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）臨床資料完整，參照人民衛(wèi)生出版社于2013年出版的《鼻咽癌診斷和治療》（王躍建主編）、鄭州大學(xué)出版社于2015年《實(shí)用耳鼻咽喉頭頸外科診斷與治療學(xué)》（王亮、婁衛(wèi)華、葉放蕾主編），結(jié)合臨床表現(xiàn)，明確相應(yīng)診斷；（2）意識(shí)清楚，精神系統(tǒng)正常；（3）對(duì)本研究?jī)?nèi)容知情，自愿參與，并同意醫(yī)院簽訂知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）無(wú)心肝腎等重要臟器嚴(yán)重疾病；（2）血液系統(tǒng)疾病、傳染性疾?。唬?）依從性較差。對(duì)照組60例，男35例，女25例，年齡20歲-73歲，年齡平均（42.85±7.44）歲；入院后接受血尿常規(guī)、理化檢驗(yàn)，X線等影像學(xué)檢查，檢查結(jié)果顯示均無(wú)明顯異常；意識(shí)清楚，精神系統(tǒng)正常，無(wú)認(rèn)知障礙，依從性較好；對(duì)本研究?jī)?nèi)容知情同意，自愿參與，并同醫(yī)院簽訂知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 檢驗(yàn)方法 三組受檢者經(jīng)活檢，分別獲取鼻咽癌組織、鼻咽良性病變組織、正常鼻咽組織樣本，同時(shí)在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取外周循環(huán)血液樣本5 mL；經(jīng)DNA提取試劑處理樣本，獲取三組受檢者DNA；三組DNA分為兩份，其中一份滴入反應(yīng)緩沖液、S-腺苷甲硫氨酸、CpG甲基化酶，加入蒸餾水，在37oC條件下置于孵育箱內(nèi)，對(duì)三組受檢者DNA進(jìn)行亞硫酸氫鹽方面的修飾，并以此作為鼻咽樣本甲基化樣本的對(duì)照品。另外一份鼻咽癌及鼻咽良性病變受檢者DNA，經(jīng)之前甲基化樣本對(duì)照組，再次進(jìn)行亞硫酸氫鹽修飾；所有DNA樣本中已甲基化者及未甲基化者分別在不同條件下完成PCR擴(kuò)增，并經(jīng)電泳試驗(yàn)分析。剩余一份健康志愿者外周循環(huán)血DNA作為對(duì)照。

1.2.2 鼻咽癌治療方案 鼻咽癌患者采用調(diào)強(qiáng)適形放療聯(lián)合順鉑方案進(jìn)行治療；放療范圍包括頸部引流區(qū)及鼻咽癌性病灶，經(jīng)三維適形照射治療進(jìn)行放療方案，詳見(jiàn)表1。順鉑，每7 d治療1次，共治療7次，用藥劑量33 mg/m2。持續(xù)4周后觀察復(fù)查影像學(xué)檢查，若發(fā)生腫瘤惡化，則改換其他治療方案。隨訪36個(gè)月，觀察并記錄生存率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 22.0軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，采用卡方檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

鼻咽癌組52例表達(dá)Parkin基因甲基化者40例（76.92%）；鼻咽良性病變組及健康對(duì)照組均未發(fā)現(xiàn)Parkin基因甲基化表達(dá)，三組間甲基化率數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

鼻咽癌患者52例均獲得隨訪，隨訪時(shí)間36個(gè)月；檢出Parkin基因甲基化者40例，3年生存率47.50%（19/40），未檢出Parkin基因甲基化者12例，3年生存率66.67%（8/12）；未檢出Parkin基因甲基化者36個(gè)月生存率稍高于檢出者，數(shù)據(jù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.358,P=0.243）。

檢出Parkin基因甲基化者40例，3年內(nèi)出現(xiàn)胃腸道反應(yīng)23例（57.50%），骨髓抑制13例（32.50%），反射性口腔炎癥19例（47.50%）；未檢出Parkin基因甲基化者12例，3年內(nèi)出現(xiàn)胃腸道反應(yīng)23例（57.50%），骨髓抑制13例（32.50%），反射性口腔炎癥19例（47.50%）；未檢出Parkin基因甲基化者36個(gè)月生存率稍高于檢出者，數(shù)據(jù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.358,P=0.243）。

表1 鼻咽癌放療方案

3 討論

鼻咽癌在耳鼻喉頭頸外科中屬于比較常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈現(xiàn)區(qū)域性分布，歐洲發(fā)病率較低，而在我國(guó)南方，非洲大陸以及南洋地區(qū)發(fā)病率相對(duì)較高，最高可達(dá)到50/10萬(wàn)[3,4]。鼻咽癌早期多無(wú)典型臨床表現(xiàn)，而且患病部位比較隱蔽，因此早期診斷率較低，但誤診率及漏診率較高。不僅如此，當(dāng)患者因出現(xiàn)的癥狀而就診時(shí)，往往已經(jīng)發(fā)展至中晚期。據(jù)臨床調(diào)查顯示，鼻咽癌患者一旦明確診斷，并接受及時(shí)有效治療，則其5年生存率可達(dá)到50%以上。因此，如何在鼻咽癌早期加強(qiáng)檢出率非常重要。

目前，鼻咽癌早期診斷方法主要包括以下幾個(gè)方面：（1）EB病毒：EB病毒是一種皰疹病毒亞種，在人群中感染率較高。目前，普遍支持EB病毒在惡性腫瘤中與鼻咽癌關(guān)聯(lián)最為緊密。醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，EB病毒抗體諸多，比如VCAIgA，雖然無(wú)較高特異性，但敏感性非常高，因此持續(xù)檢測(cè)VCA-IgA抗體，若發(fā)現(xiàn)VCA-IgA異常升高，則代表可能存在腫瘤。由于鼻咽拭子獲取方式并非侵入性，因此可用于常規(guī)檢測(cè)EBV-DNA，現(xiàn)已有學(xué)者提出鼻咽癌通過(guò)NP Screen篩查的方案。（2）影像學(xué)檢查：影像學(xué)檢查主要包括CT、PET-CT、MRI等；其中CT是指CT仿真內(nèi)鏡/動(dòng)態(tài)掃描技術(shù)，二者均屬于CT重建技術(shù)?，F(xiàn)普遍認(rèn)為PET-CT在診斷腫瘤中具有非常重要的臨床意義，但因價(jià)格昂貴，因此推廣難度較高。而MRI則是目前在臨床上應(yīng)用率非常高的影響學(xué)檢查方法之一，而且在檢測(cè)軟組織方面效果較好。（3）內(nèi)鏡檢查：目前多是指纖維鼻內(nèi)鏡、鼻內(nèi)鏡，前者具有靈活度較好、操作便捷、鏡體纖細(xì)等優(yōu)勢(shì)，但因其在活檢時(shí)獲取樣本過(guò)少，因此通過(guò)病理準(zhǔn)確診斷，而后者圖像清晰較高、容易取材等優(yōu)勢(shì)，有學(xué)者支持其在診斷價(jià)值強(qiáng)于纖維鼻內(nèi)鏡，但因無(wú)法準(zhǔn)確定位，故需多次取材。此外，內(nèi)鏡檢查還包括接觸性?xún)?nèi)定、NBI內(nèi)鏡等。（4）基因檢測(cè)：腫瘤細(xì)胞miRNA檢測(cè)在臨床上應(yīng)用還有較大進(jìn)步空間。腫瘤細(xì)胞DNA甲基化在腫瘤發(fā)展過(guò)程中占據(jù)著重要地位，現(xiàn)已有學(xué)者提出利用DNA甲基化預(yù)測(cè)早期腫瘤。此外，基因檢測(cè)還包括RUNX3、PMS2等，需引起足夠的重視。

鼻咽癌在臨床上發(fā)病率較高，若在其發(fā)現(xiàn)、診斷，則其預(yù)后多較好。目前，鼻咽癌診斷目標(biāo)是在準(zhǔn)確診斷的基礎(chǔ)上，提高篩查準(zhǔn)確率。Parkin基因?qū)儆谇拔乃龌驒z測(cè)，在腫瘤發(fā)生發(fā)展中占據(jù)著重要地位。Parkin基因與腫瘤關(guān)聯(lián)主要見(jiàn)于其突變及部分缺失。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，鼻咽癌患者Parkin甲基化率高于鼻咽良病變組及正常人[5]，這與本研究結(jié)果相似。而本研究中，鼻咽癌患者跟蹤隨訪36個(gè)月，證實(shí)未治療前檢出Parkin基因甲基化者3年生存率稍低于未檢出者（P＞0.05）。這表明Parkin基因在甲基化后，不僅有助于提高鼻咽癌診斷準(zhǔn)確率，還能對(duì)其預(yù)后發(fā)揮一定的預(yù)測(cè)作用。

總之，Parkin基因甲基化對(duì)鼻咽癌早期診斷及預(yù)后判斷價(jià)值均良好，在臨床實(shí)際工作中，建議與其他篩查、診斷措施聯(lián)用，以期獲得更高的檢查準(zhǔn)確性，便于及時(shí)制定科學(xué)合理的診療計(jì)劃，有利于患者預(yù)后。