肝門部膽管癌組織中PIWIL4蛋白表達(dá)及其臨床意義

劉起勝龔宗躍鄒 艷徐筱紅劉 懷曹寅生

肝門部膽管癌是發(fā)病率最高的一種膽管癌，但其發(fā)病原因及機(jī)制仍未完全明確。有研究[1]指出，在肝門部膽管癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，PIWI蛋白發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。而PIWIL4屬PIWI家族中的一員，其表達(dá)量與卵巢癌、肝癌等腫瘤的發(fā)生有著密切的關(guān)系，但對(duì)于其在肝門部膽管癌方面的相關(guān)研究報(bào)道極為少見(jiàn)。鑒于此，本研究擬采用SP免疫組化法檢測(cè)PIWIL4蛋白的表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征的相關(guān)性。

1　資料與方法

1.1一般資料 收集2001年1月-2017年3月期間湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院經(jīng)手術(shù)切除的40例肝門部膽管癌癌組織及癌旁組織標(biāo)本，其男23例，女17例,年齡24～77歲，平均年齡（49.63±6.50）歲。所有標(biāo)本收集后均即刻進(jìn)行液氮速凍處理并存于-80 ℃冰箱中備用。

1.2實(shí)驗(yàn)方法 將40例肝門部膽管癌癌組織及癌旁組織制片，按照SP免疫組化試劑盒（購(gòu)于上海研卉公司）說(shuō)明書完成SP免疫組化染色操作，以檢測(cè)組織中PIWIL4蛋白的陽(yáng)性表達(dá)狀況。每張切片在BX43-12P02顯微鏡（奧林巴斯）下隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野，每視野計(jì)數(shù)≥100個(gè)細(xì)胞。若切片經(jīng)蘇木素復(fù)染后，在顯微鏡下見(jiàn)胞質(zhì)呈棕黃色、褐黃色顆粒狀則為PIWIL4陽(yáng)性細(xì)胞。PIWIL4蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要根據(jù)細(xì)胞染色深淺程度和PIWIL4陽(yáng)性細(xì)胞百分比來(lái)綜合判斷，①染色程度：若染色為深褐色則3分，棕黃色則2分，淡黃則為1分，未染色的為0分。②PIWIL4陽(yáng)性細(xì)胞百分比大于70%為3分，在36%～70%之間為2分，6%～35%之間則為1分，小于6%為0分。若①×②得分在0～2分之間則為陰性（-），3分以上的判為陽(yáng)性（+）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 選用SPSS23.0軟件，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以%表示，用卡方檢驗(yàn)；計(jì)量數(shù)據(jù)以（x± s）表示，用t檢驗(yàn)。P＜0.05代表差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

2.1PIWIL4蛋白在肝門膽管癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況 PIWIL4蛋白在肝門部膽管癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率60.0%（24/40），在癌旁組織中為32.50%（13/40）。兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.084，P=0.014）。

2.2肝門膽管癌組織中PIWIL4蛋白表達(dá)與相關(guān)病理特征的相關(guān)性 肝門部膽管癌組織中PIWIL4蛋白陽(yáng)性表達(dá)與細(xì)胞分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但與腫瘤大小、病理類型差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1　肝門膽管癌組織中PIWIL4蛋白表達(dá)與相關(guān)病理特征的相關(guān)性

3　討 論

近年越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)[2～3]，PIWI家族中的PIWIL4基因與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切的聯(lián)系，其能夠激活I(lǐng)L6/STAT3信號(hào)通路，靶向調(diào)控凋亡抑制蛋白Bcl-xl，促使細(xì)胞增殖與抑制凋亡，參與癌癥的發(fā)生[2～3]。目前對(duì)于PIWIL4基因的研究主要集中在乳腺癌、卵巢癌、舌鱗癌研究中[4]，而對(duì)于其在肝門膽管癌組織中的表達(dá)狀況及相關(guān)作用的研究報(bào)道則較為少見(jiàn)。

本研究為進(jìn)一步明確PIWIL4蛋白表達(dá)在肝門膽管癌病變中的作用，收集40例肝門膽管癌組織癌患者的癌病灶組織及癌旁組織進(jìn)行免疫組化和RT-PCR法檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肝門部膽管癌組織中PIWIL4蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為60.0%，明顯高于癌旁組織的32.50%，與袁媛等[5]的研究報(bào)道基本一致，提示PIWIL4蛋白在肝門膽管癌組織中呈高表達(dá)，其原因有可能是PIWIL4基因具有癌基因的活性，參與了肝門膽管癌的發(fā)生、發(fā)展。此外，本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)肝門部膽管癌組織中PIWIL4蛋白表達(dá)水平均與TNM分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、細(xì)胞分化程度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但與腫瘤大小、病理類型差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在實(shí)際臨床中，癌灶分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期三種臨床病理因素與肝門部膽管癌的惡性度具有密切的聯(lián)系，故從上述結(jié)果來(lái)看PIWIL4蛋白表達(dá)水平會(huì)隨著肝門部膽管癌的惡性度增加而升高。

總之，PIWIL4基因在肝門部膽管癌組織中呈高表達(dá)，且PIWIL4蛋白表達(dá)上調(diào)在肝門部膽管癌中的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中發(fā)揮著重要作用，可將其作為判斷肝門部膽管癌病情進(jìn)展的主要指標(biāo)之一。