甘肅不同產(chǎn)地甘肅黃芩解熱、抗炎的研究*

孫向陽(yáng), 羅小明, 王琳萍

(臨夏回族自治州人民醫(yī)院,甘肅 臨夏 731100)

甘肅黃芩ScutellariarehderianaDiels作為唇形科植物黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi的替代藥材使用，具有較久的使用歷史[1-2], 主要功效為清熱燥濕、瀉火解毒、止血安胎，是十大隴藥之一，甘肅省為甘肅黃芩的主產(chǎn)區(qū)[3]?；诖耍狙芯渴占藦埣掖h、涇川縣[4]、和政縣、臨夏縣4個(gè)產(chǎn)地的甘肅黃芩，從解熱、抗炎兩個(gè)角度反映甘肅黃芩的藥理作用，為其臨床運(yùn)用及開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 動(dòng) 物

SPF級(jí)小鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(甘)2015-0001；SPF級(jí)大鼠49只(雌性24只，雄性25只)，體質(zhì)量180～220 g，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(甘)2015-0001。均購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 藥品、試劑與儀器

臨夏縣甘肅黃芩、涇川縣甘肅黃芩、和政縣甘肅黃芩，張家川縣甘肅黃芩分別購(gòu)自各產(chǎn)地，由臨夏市益生中藥飲片廠炮制。取甘肅黃芩飲片適量，加10倍水浸泡30 min，第一次煎煮1.5 h，第二次煎煮1 h，合并兩次煎煮液，減壓濃縮成含生藥1 g/mL的煎煮液，于冰箱4 ℃保存?zhèn)溆肹5]。食母生片，規(guī)格0.2 g/片，廣東五洲藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)1610315；吲哚美辛片，規(guī)格25 mg/片，山西云鵬制藥有限公司產(chǎn)品，批號(hào)A160302；阿司匹林腸溶片，規(guī)格25 mg/片，石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)018140295，用生理鹽水配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9.0 g/L的混懸液。二甲苯，南京化學(xué)試劑廠產(chǎn)品，批號(hào)010920；生理鹽水，石家莊四藥有限公司產(chǎn)品，批號(hào)1705133202；其余試劑均為分析純；水為純凈水。XB-8656型電子體溫計(jì)，無(wú)錫新中瑞嬰兒用品有限公司產(chǎn)品；PL303型電子天平，瑞士梅特勒托利多有限公司產(chǎn)品。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 方法與結(jié)果

2.1 解熱實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前測(cè)大鼠肛溫，1 d 3次，連續(xù)3 d，使大鼠適應(yīng)該測(cè)溫操作。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始當(dāng)日每隔1 h測(cè)量體溫，復(fù)制模型前各組大鼠基礎(chǔ)肛溫在36.56～37.17 ℃，平均肛溫(36.85±0.37)℃，各組大鼠基礎(chǔ)體溫差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。取自身體溫變化≤0.3 ℃的大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。采用大鼠背部皮下注射200 g/L酵母懸液(取食母生10 g，逐漸加入純化水并研磨制成混懸液，定容至50 mL，即得。注射劑量為2.0 mL/100 g)的方法復(fù)制發(fā)熱模型，正常組皮下注射等容量的生理鹽水，注射完成后測(cè)肛溫，選肛溫升高>0.8 ℃的大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。按照隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組，每組7只，分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、阿司匹林組(0.1 g/kg)、臨夏縣組(相當(dāng)于生藥量10 g/kg)、涇川縣組(相當(dāng)于生藥量10 g/kg)、和政縣組(相當(dāng)于生藥量10 g/kg)、張家川縣組(相當(dāng)于生藥量10 g/kg)。

正常對(duì)照組和模型對(duì)照組每日按10 μL/g生理鹽水灌胃，阿司匹林組灌胃阿司匹林腸溶片混懸液9.4 μg/g[6-7]；各產(chǎn)地黃芩組均按照相當(dāng)于生藥量10 g/kg的劑量灌胃給藥。1 d 1次，連續(xù)7 d。測(cè)量末次給藥后 1-4 h大鼠的肛溫，分別計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)大鼠體溫升高值，并進(jìn)行組間對(duì)比。結(jié)果：阿司匹林組和各產(chǎn)地甘肅黃芩組均能不同程度地抑制酵母所致大鼠體溫升高，使大鼠體溫在致熱2 h后逐步降低。見(jiàn)表1?？紤]到是同一主體不同時(shí)間點(diǎn)的體溫變化，數(shù)據(jù)分析采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析(見(jiàn)表2、表3、圖1)。表2為不同時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù)的球形檢驗(yàn)，結(jié)果顯示：不同時(shí)間點(diǎn)(該不同時(shí)間點(diǎn)是指所有組的各檢測(cè)點(diǎn)的總體比較，不確指某個(gè)檢測(cè)點(diǎn)的兩兩比較)P<0.05，所以不滿足球形分布假設(shè)，即不同時(shí)間點(diǎn)之間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表3反映的是不同組別和不同時(shí)間點(diǎn)之間的交互作用；多變量方差分析的結(jié)果給出了4種統(tǒng)計(jì)量，它們的檢驗(yàn)結(jié)果一致，各時(shí)間點(diǎn)的P<0.05，說(shuō)明各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，時(shí)間點(diǎn)和組別交互作用的P>0.05，說(shuō)明時(shí)間和分組無(wú)交互作用，說(shuō)明時(shí)間因素(即0.5，1，2，3，4 h)的作用不隨分組(即各給藥組)的不同而不同。由圖1可以直觀地看出測(cè)量指標(biāo)隨時(shí)間的變化趨勢(shì)。各給藥組隨時(shí)間變化的趨勢(shì)大致相同，其中模型對(duì)照組數(shù)據(jù)明顯偏高(P<0.05)，張家川縣組在2 h后的體溫升高程度明顯高于臨夏縣組、涇川縣組、和政縣組(P<0.05)。

組 別劑量(g/kg)基礎(chǔ)體溫給藥后體溫升高值/Δ℃0.5 h1 h2 h3 h4 h正常對(duì)照組—37.15±0.370.01±0.060.02±0.08-0.12±0.14-0.12±0.17-0.12±0.14模型對(duì)照組—36.95±0.281.64±0.161.62±0.151.63±0.171.61±0.161.59±0.12阿斯匹林組0.136.98±0.350.65±0.17*0.77±0.21*0.81±0.16*0.86±0.14*0.79±0.12*臨夏縣組1036.92±0.470.72±0.15*0.79±0.16*0.85±0.14*0.78±0.16*0.62±0.17*涇川縣組1037.07±0.380.79±0.22*0.83±0.11*0.89±0.21*0.95±0.15*0.87±0.13*和政縣組1037.15±0.410.84±0.24*0.89±0.20*0.93±0.22*0.89±0.27*0.85±0.21*張家川縣組1036.95±0.440.98±0.18*#△1.01±0.18*#△1.12±0.26*#△*1.23±0.18*#△*▲1.08±0.16*#△*

注：與模型對(duì)照組對(duì)比，*P<0.05；與陽(yáng)性組對(duì)比，#P<0.05；與臨夏縣組對(duì)比，△P<0.05；與涇川縣組對(duì)比，＊P<0.05；與和政縣組對(duì)比，▲P<0.05

表2 不同測(cè)定點(diǎn)重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)球形檢驗(yàn)結(jié)果

表3 不同時(shí)間點(diǎn)多變量檢驗(yàn)

1.正常對(duì)照組； 2.模型對(duì)照組；3.阿斯匹林組； 4.臨夏縣組； 5.涇川縣組；6.和政縣組； 7.張家川縣組圖1 不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)量值邊界估計(jì)

2.2 抗炎實(shí)驗(yàn)

取小鼠60只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為6組，即模型對(duì)照組、吲哚美辛組、臨夏縣組、涇川縣組、和政縣組、張家川縣組。吲哚美辛組給以吲哚美辛片混懸液(使用前用生理鹽水配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.75 g/L

的混懸液)，以9.4 μg/g的劑量灌胃給藥；黃芩各給藥組按照10 g/kg的劑量給予不同產(chǎn)地黃芩飲片煎煮液；模型對(duì)照組小鼠灌胃9 g/L生理鹽水0.02 mL/g。1 d 1次，連續(xù)3 d。末次給藥1 h后，每只小鼠右耳廓兩面涂抹二甲苯20 μL，復(fù)制小鼠耳腫脹炎癥模型，并以左耳做對(duì)照。采用直徑6 mm的打孔器分別在左右兩耳對(duì)稱部位打下圓形耳片，精密稱定，計(jì)算腫脹度和腫脹抑制率。腫脹度=右耳片重-左耳片重；腫脹抑制率=(給藥組小鼠耳片腫脹度/對(duì)照組小鼠耳片腫脹度)×100%[8-9]。結(jié)果：與模型對(duì)照組對(duì)比，吲哚美辛組和4個(gè)黃芩飲片組的小鼠耳腫脹度降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表明：各藥物能明顯抑制小鼠耳廓腫脹。與吲哚美辛組對(duì)比，臨夏縣組、涇川縣組、和政縣組、張家川縣組小鼠耳廓腫脹的抑制程度明顯偏低(P<0.05)。臨夏縣組、涇川縣組、和政縣組3個(gè)組組間對(duì)比，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；張家川縣組與臨夏縣組、涇川縣組、和政縣組3個(gè)組對(duì)比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

組 別劑量/(g·kg-1)耳片質(zhì)量/mg左右腫脹度/mg腫脹抑制率/%模型對(duì)照組—16.58±1.8142.68±1.6825.86±1.86—吲哚美辛組0.117.05±1.4228.04±1.8210.05±1.04*57.25臨夏縣組1015.93±1.7530.25±2.3614.13±1.24*#46.11涇川縣組1016.85±1.8832.57±2.0216.33±1.86*#37.95和政縣組1016.77±1.9633.25±2.6716.47±1.75*#38.46張家川縣組1016.34±1.7436.54±2.0119.22±1.05*#△*▲26.83

注：與模型對(duì)照組對(duì)比，*P<0.05；與吲哚美辛組對(duì)比，#P<0.05；與臨夏縣組對(duì)比，△P<0.05；與涇川縣組對(duì)比，＊P<0.05；與和政縣組對(duì)比，▲P<0.05

3 討 論

發(fā)熱是人體病態(tài)體征的表現(xiàn)，主要是細(xì)菌、病毒、內(nèi)毒素等外源性致熱物質(zhì)侵襲機(jī)體巨噬細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性致熱源，內(nèi)源性致熱源通過(guò)刺激下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞而上移體溫調(diào)定點(diǎn)，從而導(dǎo)致體溫升高。酵母菌混懸液致熱機(jī)制是：酵母菌中所含的莢膜多糖和蛋白質(zhì)使大鼠注射部位局部潰爛，引起炎癥，從而發(fā)熱。該致熱過(guò)程與臨床上由內(nèi)臟或皮膚明顯炎癥所致發(fā)熱情況相類(lèi)似，因此本實(shí)驗(yàn)中以酵母菌復(fù)制大鼠發(fā)熱模型以考察不同產(chǎn)地黃芩飲片及其炮制品的解熱作用。二甲苯可迅速擴(kuò)張小鼠耳廓毛細(xì)血管，增加血管通透性導(dǎo)致炎癥介質(zhì)滲出，因此，本實(shí)驗(yàn)采用二甲苯復(fù)制急性炎癥模型。

重復(fù)測(cè)量方差分析是針對(duì)同一觀察對(duì)象的同一指標(biāo)在不同時(shí)間點(diǎn)或環(huán)境下進(jìn)行的多次測(cè)量分析，主要用于分析觀察指標(biāo)的變化趨勢(shì)及相關(guān)影響因素對(duì)其干擾程度，通過(guò)建立精確度數(shù)學(xué)模型反應(yīng)效應(yīng)值隨時(shí)間變化的統(tǒng)計(jì)學(xué)趨勢(shì)。本研究考察了不同時(shí)間點(diǎn)大鼠的體溫升高程度，在評(píng)價(jià)各給藥組體溫升高的同時(shí)，還反映出影響體溫變化的因素，數(shù)據(jù)間的變量關(guān)系有一定的相關(guān)性，因此，本研究未采用常用的組間比較的t檢驗(yàn)或單因素方差分析。

本研究結(jié)果顯示：4個(gè)不同產(chǎn)的甘肅黃芩飲片均能抑制干酵母導(dǎo)致的大鼠體溫升高，均顯著低于模型對(duì)照組大鼠的體溫升高程度(P<0.05)。臨夏縣組、涇川縣組、和政縣組的解熱作用明顯強(qiáng)于張家川縣組，該作用強(qiáng)度的反差主要體現(xiàn)在不同產(chǎn)地黃芩解熱活性成分的含量上；不同時(shí)間的體溫升高值的球形檢驗(yàn)結(jié)果提示不同時(shí)間點(diǎn)的體溫變化有顯著差異(P<0.05)，而各時(shí)間點(diǎn)與不同分組之間沒(méi)有交互作用(P>0.05)，提示體溫的變化與組間給藥物質(zhì)有顯著性關(guān)系；在給藥2-3 h后，各組大鼠體溫出現(xiàn)下降趨勢(shì)，可能與藥物性體溫調(diào)節(jié)有關(guān)。從抗炎情況來(lái)看，不同產(chǎn)地的黃芩均有一定的抗炎作用，臨夏縣組、涇川縣組、和政縣組3組之間抗炎作用對(duì)比差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，張家川縣組抗炎作用明顯低于上述3個(gè)產(chǎn)地的甘肅黃芩(P<0.05)。綜上所述，臨夏縣、涇川縣、和政縣所產(chǎn)甘肅黃芩的解熱、抗炎作用強(qiáng)于張家川縣所產(chǎn)甘肅黃芩，可能與甘肅黃芩產(chǎn)地及化學(xué)組分的積累有關(guān)。

4 參考文獻(xiàn)

[1]謝宗萬(wàn).中藥材品種論述：中冊(cè)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1984：177.

[2]甘肅省衛(wèi)生局.甘肅中草藥手冊(cè)[M].蘭州：甘肅人民衛(wèi)生出版社，1971：401.

[3]高慧琴，晉玲.十大隴藥(七)-黃芩[J].甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2014,31(3):2.

[4]楊全，白音，陳千良，等.黃芩資源現(xiàn)狀及可持續(xù)利用的研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2006，17(7):1159-1160.

[5]丁長(zhǎng)玲，邱世翠，宮照龍，等.甘草的體外抑菌作用研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2002,13(9):518.

[6]劉靜，呂曉靜，田興美，等.新癀片對(duì)動(dòng)物發(fā)熱模型的解熱作用研究[J].現(xiàn)代藥物與臨床,2015，30 (4):375-379.

[7]李興平，白筱璐，雷玲，等.金銀花的解熱作用[J].中藥藥理與臨床.2012,28(2):36-39.

[8]楊艷，韋余，王玉和，等.黔產(chǎn)毛蒟揮發(fā)油抗炎鎮(zhèn)痛活性研究[J].中國(guó)藥師,2016,19(10):1837-1840.

[9]沈磊，謝文菠，王修波，等.滇龍膽不同部位提取物保肝抗炎作用的研究[J].中成藥,2017,39 (4 ):701-705.