高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀同時測定飲料中甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖、紐甜的檢測方法研究

隨著食品工業(yè)的快速發(fā)展，甜味劑由于甜度高、性質(zhì)穩(wěn)定、熱量小等特點被廣泛應(yīng)用于食品加工行業(yè)，為了改善口感,大多數(shù)甜味劑由多種成分復(fù)配使用。但是人工合成甜味劑的安全性已受到廣泛質(zhì)疑， GB 2760-2014對飲料中甜味劑的使用進行了嚴(yán)格的規(guī)定，我國屯制定了一些針對人工合成甜味劑的檢測標(biāo)準(zhǔn)，但一般是針對單一甜味劑的，并且這些方法屯存在一些局限性，如甜蜜素的檢測需要衍生；用高效液相以譜-示差檢測器檢測三氯蔗糖，檢出限高；紐甜的響應(yīng)值低，阿斯巴甜的峰容易拖尾等等問題，并且這四種甜味劑，用到的樣品處理方法、儀器流動相等條件都水一致，給日常檢驗增加了工作量。因此，建立一個同時檢測飲料中甜蜜素、阿斯巴甜、紐甜、三氯蔗糖的檢測方法意義重大。

試驗部分

試劑和儀器 Agilent 6460超高壓液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀、電子天平，氮吹儀、甲酸銨、乙腈、甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、阿斯巴甜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、紐甜標(biāo)樣標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)物

儀器條件 液相條件：安捷倫XDB-C18以譜柱，4.6×100mm,5μm；流速：0.3mL/min；進樣量：5μl；柱溫：30℃流動相比例如下表：

時間（min）流動相B乙腈（%）0 85 15 3 10 90 3.01 85 15 6 85 15流動相A :5mmoL/L甲酸銨（%）

質(zhì)譜條件

MRM監(jiān)測模式下的監(jiān)測條件

測定步驟

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的配制：精密稱取適量的甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖、紐甜標(biāo)準(zhǔn)樣品，用蒸餾水溶解，配制成質(zhì)量濃度為1000μg/mL甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖、紐甜單標(biāo)儲備液，備用。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別用移液管移取一定體積的甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖、紐甜單標(biāo)儲備液，混合于容量瓶中，用pH為4.3的水（乙酸調(diào)pH值）定容，配制成甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖、紐甜的濃度分別為10μg/mL、10μg/mL、100μg/mL、10μg/mL的混合中間標(biāo)準(zhǔn)溶液。逐級稀釋到甜蜜素、阿斯巴甜、紐甜10～400μg/L,三氯蔗糖100-4000μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

試樣溶液的制備：稱取10 g樣品，于50 mL離心管中，加入純甲醇溶液20 mL，旋渦充分混勻，4000r/min離心，上清液轉(zhuǎn)移至另一個 50 mL離心管中；使用15 mL甲醇重復(fù)提取殘渣一次，上清液合并入50 mL離心管中(若提取液渾濁，可嘗試加入0.5 mL鎢酸鈉溶液，再離心)；

60-70 ℃水浴對提取液進行氮吹濃縮，體積至10 mL 。

結(jié)果與討論

儀器條件選擇 分別比較了電噴霧離子源（ESI）的正離子和氟離子掃描模式，發(fā)現(xiàn)氟離子模式下的目標(biāo)化合物的離子化效率和響應(yīng)值均較高。

試驗中，選乙腈-甲酸銨為流動相。采用甲醇-水，由于甜蜜素的離子化效率低而為出峰，采用甲醇-甲酸銨，甜蜜素、三氯蔗糖峰型較寬[7]，采用乙腈-甲酸銨溶液，4種甜味劑均達到良好的分離和響應(yīng)值。測試了5 、10.、20mmoL/L甲酸銨溶液，發(fā)現(xiàn)三種濃度下，4種甜味劑的相應(yīng)值無較大變化，故選擇5mmoL/L甲酸銨溶液為流動相。

方法的線性、檢出限 選用甜蜜素、阿斯巴甜、紐甜濃度為10、20、50、100、200、400μg/L，三氯蔗糖濃度為100、200、500、1000、2000、4000μg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在超高壓液相以譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀上進行測定，以峰面積為Y軸，質(zhì)量濃度為X軸，得到線性回歸方程，根據(jù)根據(jù)方法檢出限（LOD）為基線噪音的3倍，測定方法檢出限，結(jié)果如下

甜味劑 線性范（μg/L）線性方程相關(guān)系數(shù)檢出限（μg/L）甜蜜素 10～400 Y=10.6845X+26.6140 0.9999 3.0阿斯巴甜 10～400 Y=5.1472X-3.6503 0.9999 7.2三氯蔗糖 100～4000 Y=0.4121X-59.3921 0.9991 29紐甜 10～400 Y=6.9676X+27.9746 0.9992 2.8

方法的精密度試樣分別稱取6個空白試樣（精確至0.0001g），加入甜蜜素、阿斯巴甜、紐甜為100μg/L，三氯蔗糖濃度為1000μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，測得甜蜜素含量的RSD為3.8%、阿斯巴甜含量的RSD為5.2%、紐甜含量的RSD為6.8%、三氯蔗糖含量的RSD為5.8%。

方法的準(zhǔn)確度試驗已空白的樣品中添加適量標(biāo)樣，測量其回收率，其回收率為在82%～110%，結(jié)果表明本方法的準(zhǔn)確度良好。

本文建立了一種采用高效液相以譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀同時測定飲料中甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖、紐甜的檢測方法。此方法檢出限遠低于國標(biāo)要求，簡單、便捷、高效，為飲料中超量或違法添加甜味劑的監(jiān)督檢驗提供了科學(xué)優(yōu)質(zhì)的方法，具有較高的實際應(yīng)用價值。