• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    STMN1在宮頸癌中表達(dá)的臨床意義及抑制其表達(dá)對(duì)宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞活力和凋亡的影響*

    2018-06-30 03:26:54柴芝紅應(yīng)靈瀟潘一紅蔡仙麗孔為民
    中國(guó)病理生理雜志 2018年6期
    關(guān)鍵詞:宮頸癌試劑盒蛋白

    柴芝紅,應(yīng)靈瀟,潘一紅,蔡仙麗,孔為民

    (1臺(tái)州市立醫(yī)院婦科, 2臺(tái)州市中心醫(yī)院婦科, 浙江 臺(tái)州318000; 3首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院婦瘤科, 北京 100006)

    宮頸癌是常見的女性惡性腫瘤,目前在我國(guó)的發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢(shì),且發(fā)病年齡呈現(xiàn)年輕化,對(duì)女性的生命及健康造成了嚴(yán)重的威脅[1]。宮頸癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)涉及表觀遺傳學(xué)改變、免疫改變、抑癌基因失活及癌基因激活等多階段、多基因的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)調(diào)控過程。因此,從分子水平上研究宮頸癌的發(fā)病機(jī)制對(duì)于治療具有重要意義。微管解聚蛋白1(stathmin 1,STMN1)是近些年研究較多的一種能夠在細(xì)胞有絲分裂和分裂間期使微管動(dòng)力學(xué)改變的小分子磷蛋白,在大部分正常組織中有表達(dá),在多種腫瘤中過表達(dá),主要參與調(diào)控微管的動(dòng)態(tài)平衡,進(jìn)而影響多種生理病理過程[2]。有研究顯示,胃癌中STMN1的過表達(dá)與分化程度呈現(xiàn)正相關(guān)[3];結(jié)腸癌中STMN1的陽(yáng)性表達(dá)與TNM分期及淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān),而與性別、年齡、腫瘤位置及分化程度無關(guān)[4];也有研究發(fā)現(xiàn),抑制STMN1的表達(dá)可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡,且增強(qiáng)對(duì)化療藥物的敏感性[5]。但目前關(guān)于STMN1對(duì)宮頸癌的影響尚未清楚。因此,本研究首先檢測(cè)了STMN1在宮頸癌中的表達(dá),并分析與臨床指標(biāo)的關(guān)系,并通過RNA干擾抑制其表達(dá)后檢測(cè)細(xì)胞的增殖和凋亡情況,為宮頸癌的治療提供理論基礎(chǔ)。

    材 料 和 方 法

    1 組織樣本

    選取浙江臺(tái)州市立醫(yī)院醫(yī)院在2014年6月~2015年8月期間手術(shù)切除的宮頸癌標(biāo)本80例,所有標(biāo)本均經(jīng)過病理證實(shí),且術(shù)前均未行放療、化療或生物治療。其中鱗癌為70例,腺癌為10例,年齡為25~68歲,平均年齡為41.5歲。按照FIGO,2009標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期,ⅠB1期、ⅡB2期、ⅢB3期和ⅣB4期分別為24例、16例、24例和16例;低分化和高分化分別為28例和52例;有盆腔淋巴轉(zhuǎn)移及無盆腔淋巴轉(zhuǎn)移分別為24例和56例。另取15例癌旁組織作為對(duì)照。

    2 試劑和儀器

    宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞所;胎牛血清、RPMI-1640培養(yǎng)基和MTT試劑盒均購(gòu)自Sigma; LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑盒購(gòu)自Gibco;二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)蛋白定量試劑盒購(gòu)自北京康為世紀(jì)生物技術(shù)有限公司;全蛋白提取試劑盒、ECL發(fā)光試劑盒和膜聯(lián)蛋白V(Annexin V)-異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)細(xì)胞凋亡試劑盒均購(gòu)自中國(guó)碧云天試劑公司;抗STMN1、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、p-STAT3和survivin抗體購(gòu)自Santa Cruz Biotechnology。酶標(biāo)儀購(gòu)自BioTek;流式細(xì)胞儀購(gòu)自Becton Dickinson。

    3 方法

    3.1宮頸癌組織中STMN1的表達(dá) 按照全蛋白提取試劑盒的說明提取宮頸癌及癌旁組織中的總蛋白,BCA法進(jìn)行蛋白定量,上樣緩沖液與蛋白樣品按照1∶4的比例充分混合均勻,沸水中煮沸5 min進(jìn)行變性,每孔中40 μg蛋白樣品行10% SDS-PAGE,電泳結(jié)束后轉(zhuǎn)膜至PVDF膜,10%的脫脂奶粉室溫封閉2 h,洗膜,加抗STMN1(1∶5 000稀釋)和GAPDH(1∶2 000稀釋) I 抗,4 ℃孵育過夜,洗膜,加入HRP標(biāo)記的羊抗兔(1∶2 000稀釋)II 抗,室溫孵育1 h,洗膜,增強(qiáng)型化學(xué)法(ECL)檢測(cè)蛋白質(zhì)印跡,顯影、定影后晾干保存。

    3.2細(xì)胞培養(yǎng) SiHa細(xì)胞在37 ℃、5% CO2飽和濕度條件下,用含10%胎牛血清的PRMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。取生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

    3.3實(shí)驗(yàn)分組及STMN1-siRNA的轉(zhuǎn)染 實(shí)驗(yàn)分為3組:(1)正常對(duì)照(control)組:細(xì)胞不經(jīng)特殊處理;(2)陰性對(duì)照(negative control,NC)組:細(xì)胞轉(zhuǎn)染合成的陰性siNRA;(3)STMN1-siNRA組:細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染合成的STMN1-siNRA。以每孔1×105的密度將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SiHa細(xì)胞接種于6孔板中,細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到60%融合時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染,siRNA的轉(zhuǎn)染濃度為每孔中100 nmol/L,轉(zhuǎn)染終體積為每孔中加入培養(yǎng)基2 mL。置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4~6 h后,將培養(yǎng)基換為含有10%胎牛血清的PRMI-1640完全培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)48 h后收集細(xì)胞,進(jìn)行相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)。

    3.4STMN1、STAT3、p-ATAT3和survivin蛋白表達(dá)檢測(cè) 參照方法3.1。

    3.5MTT法測(cè)定細(xì)胞活力 以1×108/L的密度將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SiHa細(xì)胞接種于96孔板中,每孔中加入100 μL,置于37 ℃、5% CO2飽和濕度條件下培養(yǎng)24 h后,按照3.3分組進(jìn)行轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染48 h后收集細(xì)胞,每孔中加入MTT溶液20 μL (5 g/L),培養(yǎng)4 h后每孔中加入150 μL的DMSO溶液終止反應(yīng)。酶標(biāo)儀中振蕩10 min,檢測(cè)490 nm各個(gè)孔的吸光度(A)值,每組4個(gè)復(fù)孔,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

    3.6流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡 各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h,用0.25 %的胰蛋白酶消化細(xì)胞,離心,PBS漂洗細(xì)胞1次,棄上清,加入100 μL的PBS重懸細(xì)胞,再分別加入Annexin V-FITC和PI試劑各5 μL,輕輕混勻,置于室溫環(huán)境中避光反應(yīng)30 min,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。

    3.7細(xì)胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的檢測(cè) 各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h,依照中國(guó)碧云天試劑公司ROS檢測(cè)試劑盒操作說明,上流式細(xì)胞儀前0.5 h,所有孔中加入適量的2’,7’-二氯二氫熒光素二乙酸酯(DCFH-DA),孵箱孵育,0.5 h后將沒孔的細(xì)胞消化收集至15 mL的離心管中,離心,棄上清,PBS洗滌細(xì)胞1次,棄上清,加入200 μL的PBS重懸細(xì)胞,移入流式管中,流式細(xì)胞儀在488 nm激發(fā)波長(zhǎng)和525 nm發(fā)射波長(zhǎng)下檢測(cè)細(xì)胞的熒光強(qiáng)度。熒光強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)的ROS水平呈現(xiàn)正相關(guān),以此反映細(xì)胞內(nèi)的ROS水平。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

    4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料用n(%)表示,其統(tǒng)計(jì)推斷采用χ2檢驗(yàn);計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示,兩組比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),多組差異比較采用單因素方差分析,多重比較采用Bonferroni校正的t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié) 果

    1 宮頸癌組織中STMN1的蛋白表達(dá)

    Western blot檢測(cè)宮頸癌組織中STMN1的蛋白表達(dá),結(jié)果顯示,宮頸癌組織中STMN1的蛋白表達(dá)顯著高于癌旁組織(P<0.01),見圖1。

    2 STMN1的表達(dá)對(duì)宮頸癌臨床指標(biāo)的影響

    由表1可知,STMN1的表達(dá)與宮頸癌患者年齡和組織學(xué)分型無關(guān),而與臨床分期、組織學(xué)分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)。

    Figure 1. The protein expression of STMN1 in the cervical can-cer tissues. Mean±SD.n=80.*P<0.05vsadjacent tissue.

    圖1STMN1在宮頸癌中的蛋白表達(dá)

    表1STMN1的表達(dá)對(duì)宮頸癌臨床指標(biāo)的影響
    Table 1. The relationship between protein expression of STMN1 and clinical indicators of cervical cancer (n=80)

    Clinical indicatornSTMN1 positive (%) 2PAge (year) ≤402286.4 (19)0.036>0.05 >405887.9 (51)Histological type Squamous-cell car- cinoma7088.6 (62)0.018>0.05 Adenocarcinoma1090.0 (9)Clinical stage Ⅰ2450.0 (12)12.742 <0.05 Ⅱ1668.8 (11) Ⅲ2491.7 (22) Ⅳ1687.5 (14)Differentiation degree Poorly 2892.9 (26)5.826<0.05 Well 5269.2 (36)Lymph node metastasis Yes2475.0 (18)8.571<0.05 No5696.4 (54)

    3 STMN1在轉(zhuǎn)染STMN1-siRNA的細(xì)胞中的表達(dá)

    NC組STMN1的蛋白表達(dá)與control組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性,而STMN1-siRNA組STMN1的蛋白表達(dá)顯著低于control組(P<0.01),見圖2。

    Figure 2. The protein expression of STMN1 in the SiHa cells transfected withSTMN1-siRNA. Mean±SD.n=3.**P<0.01vscontrol group.

    圖2STMN1在轉(zhuǎn)染STMN1-siRNA細(xì)胞中的表達(dá)

    4 各組細(xì)胞活力及凋亡的檢測(cè)結(jié)果

    MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞活力,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡,結(jié)果顯示,與control組比較,STMN1-siRNA組的細(xì)胞活力顯著降低(P<0.01),凋亡率顯著升高(P<0.01),見圖3、表2。

    Figure 3. The apoptosis of the cells in each group analyzed by flow cytometry.

    圖3各組細(xì)胞凋亡的流式細(xì)胞術(shù)分析

    表2各組細(xì)胞的活力及凋亡率情況
    Table 2. The viability and apoptotic rate of the cells in each group (Mean±SD.n=3)

    GroupA valueApoptotic rate (%)Control 0.926±0.0872.46±0.25NC0.905±0.0742.37±0.28STMN1-siRNA 0.441±0.036?9.87±0.54?

    *P<0.05vscontrol group.

    5 各組細(xì)胞ROS含量的檢測(cè)結(jié)果

    DCFH-DA熒光探針檢測(cè)結(jié)果表明,STMN1-siRNA組ROS的含量顯著高于control組(P<0.01),見圖4。

    Figure 4. The ROS content in each group. Mean±SD.n=3.**P<0.01vscontrol group.

    圖4各組細(xì)胞的ROS含量

    6 各組細(xì)胞STAT3信號(hào)通路相關(guān)蛋白水平的檢測(cè)結(jié)果

    Western blot結(jié)果表明,STMN1-siRNA組p-STAT3和survivin的蛋白水平均顯著低于control組(P<0.01),見圖5。

    討 論

    STMN1基因定位于人1p36.1染色體,其蛋白是一種能夠在細(xì)胞有絲分裂及分裂間期使微管的動(dòng)力學(xué)改變的小分子磷蛋白,參與細(xì)胞的增殖、微管動(dòng)力學(xué)、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)及周期調(diào)控等過程[6]。有研究發(fā)現(xiàn),STMN1與多種腫瘤的臨床病理特征及生物學(xué)行為密切相關(guān)[7]。但關(guān)于STMN1對(duì)宮頸癌臨床病理特征的影響還未清楚,本研究通過Western blot檢測(cè)到宮頸癌中STMN1的蛋白表達(dá)升高,與臨床參數(shù)間的關(guān)系分析發(fā)現(xiàn),STMN1的表達(dá)與宮頸癌患者年齡和組織學(xué)分型無關(guān),而與臨床分期、組織學(xué)分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。非小細(xì)胞肺癌中STMN1的表達(dá)上調(diào),其表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),而與性別、年齡、TNM分期、腫瘤大小和組織類型無關(guān)[8];乳腺癌中STMN1的過表達(dá)與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[9];肉瘤中STMN1的高表達(dá)與腫瘤的遷移及復(fù)發(fā)也存在一定的關(guān)系[10]。本研究結(jié)果與一些研究者在其它腫瘤中的研究結(jié)果是相似的。

    Figure 5. The protein levels of STAT3, p-STAT3 and survivin in each group. Mean±SD.n=3.**P<0.01vscontrol group.

    圖5各組細(xì)胞中STAT3、p-STAT3和survivin的蛋白表達(dá)

    有研究表明,腫瘤細(xì)胞中STMN1參與了細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲、遷移和分化等過程,是近些年來備受關(guān)注的用于腫瘤檢測(cè)、預(yù)防和治療的標(biāo)志基因[11]。白血病細(xì)胞中抑制STMN1的表達(dá)可降低細(xì)胞在活體中的致瘤特性[12]。STMN1對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖凋亡的影響還未清楚。RNA干擾技術(shù)能使內(nèi)源性mRNA降解,引起特定基因在轉(zhuǎn)錄后發(fā)生沉默,具有高度特異性及穩(wěn)定性,目前在基因功能研究及腫瘤治療中得到廣泛應(yīng)用[13]。本研究中通過RNA干擾技術(shù)沉默宮頸癌中STMN1基因的表達(dá),檢測(cè)細(xì)胞增殖及凋亡情況,發(fā)現(xiàn)STMN1的表達(dá)受到抑制后宮頸癌細(xì)胞的增殖明顯降低,凋亡率增加。這提示STMN1可能是宮頸癌檢測(cè)、預(yù)防和治療的標(biāo)志物。

    ROS的累積程度可決定細(xì)胞的生存狀態(tài),適量的累積可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的存活,而過度的ROS累積,可導(dǎo)致細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷,最終導(dǎo)致細(xì)胞的損傷乃至死亡,宮頸癌中ROS水平升高可誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡[14]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),抑制STMN1的表達(dá)可提高宮頸癌中ROS水平。STAT3是一個(gè)新近發(fā)現(xiàn)的核轉(zhuǎn)錄因子,可通過調(diào)控影響細(xì)胞增殖、凋亡、分化和生存相關(guān)的基因而促進(jìn)腫瘤的增殖、血管生成,并阻滯細(xì)胞的凋亡,呈現(xiàn)出強(qiáng)的致癌作用[15-16]。目前在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)STAT3蛋白的異常激活[17]。這也提示STAT3可能是腫瘤治療的靶點(diǎn)。有研究指出,下調(diào)STAT3可降低宮頸癌細(xì)胞的增殖,促進(jìn)細(xì)胞的凋亡[18]。作為一個(gè)癌基因,STAT3本身并不引起癌變,而是通過激活影響凋亡的survivin、細(xì)胞周期的cyclin D1等靶基因而誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生[19]。本研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌中STMN1的表達(dá)受到抑制后,磷酸化的STAT3及survivin的表達(dá)降低。這說明STMN1對(duì)宮頸癌細(xì)胞的影響可能通過提高ROS水平及STAT3信號(hào)表達(dá)實(shí)現(xiàn)。

    綜上所示,STMN1在宮頸癌中高表達(dá),其表達(dá)與宮頸癌患者年齡和組織學(xué)分型無關(guān),而與臨床分期、組織學(xué)分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),抑制STMN1的表達(dá)后宮頸癌細(xì)胞增殖受到抑制,凋亡增加,ROS水平升高,STAT3信號(hào)通路表達(dá)受到抑制。本研究初步證實(shí)了STMN1對(duì)宮頸癌臨床病理特征及生物學(xué)特性的影響,并進(jìn)一步研究了可能的分子機(jī)制。接下來的實(shí)驗(yàn)將致力于宮頸癌的其它生物學(xué)特性,以期為STMN1在宮頸癌的診治提供理論幫助。

    [參 考 文 獻(xiàn)]

    [1] Wen SY, Lin Y, Yu YQ, et al. miR-506 acts as a tumor suppressor by directly targeting the hedgehog pathway transcription factor Gli3 in human cervical cancer[J]. Oncogene, 2015, 34(6):717-725.

    [2] Kuang XY, Jiang HS, Li K, et al. The phosphorylation-specific association of STMN1 with GRP78 promotes breast cancer metastasis[J]. Cancer Lett, 2016, 377(1):87-96.

    [3] 廖 巧, 趙玉茹, 屈 彪, 等. STMN1 與 TUBB3 蛋白在胃癌和癌旁組織中的表達(dá)與臨床意義[J]. 中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué), 2016, 20(12):1335-1339.

    [4] Wu W, Tan XF, Tan HT, et al. Unbiased proteomic and transcript analyses reveal that stathmin-1 silencing inhibits colorectal cancer metastasis and sensitizes to 5-fluorouracil treatment[J]. Mol Cancer Res, 2014, 12(12):1717-1728.

    [5] Meng ZJ, Tao K. Enhancement of chemosensitivity by stathmin-1 silencing in gastric cancer cellsinsituandinvivo[J]. Oncol Res, 2016, 23(1-2):35-41.

    [6] He X, Liao Y, Lu W, et al. Elevated STMN1 promotes tumor growth and invasion in endometrial carcinoma[J]. Tumor Biol, 2016, 37(7):9951-9958.

    [7] Wang Z, He R, Xia H, et al. Knockdown ofSTMN1 enhances osteosarcoma cell chemosensitivity through inhibition of autophagy[J]. Oncol Lett, 2017, 13(5):3465-3470.

    [8] Zou ZQ, Du YY, Sui G, et al. Expression of TS, RRM1, ERCC1, TUBB3 and STMN1 genes in tissues of non-small cell lung cancer and its significance in guiding postoperative adjuvant chemotherapy[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2015, 16(8):3189-3194.

    [9] Obayashi S, Horiguchi J, Higuchi T, et al. Stathmin1 expression is associated with aggressive phenotypes and can-cer stem cell marker expression in breast cancer patients[J]. Int J Oncol, 2017, 51(3):781-790.

    [10] Li J, Hu G, Kong F, et al. Elevated STMN1 expression correlates with poor prognosis in patients with pancreatic ductal adenocarcinoma[J]. Pathol Oncol Res, 2015, 21(4):1013-1020.

    [11] Lu W, Hu Y, Ma Q, et al. miR-223 increases gallbladder cancer cell sensitivity to docetaxel by downregulating STMN1[J]. Oncotarget, 2016, 7(38):62364-62376.

    [12] Machado-Neto JA, de Melo Campos P, Favaro P, et al. Stathmin 1 is involved in the highly proliferative phenotype of high-risk myelodysplastic syndromes and acute leukemia cells[J]. Leuk Res, 2014, 38(2):251-257.

    [13] 黃生輝, 李建華, 張瑋瓊, 等. 沉默TREM-2 對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞遷移和侵襲的影響[J]. 中國(guó)病理生理雜志, 2016, 32(1):134-139.

    [14] Deorukhkar A, Ahuja N, Mercado AL, et al. Zerumbone increases oxidative stress in a thiol-dependent ROS-independent manner to increase DNA damage and sensitize colorectal cancer cells to radiation[J]. Cancer Med, 2015, 4(2):278-292.

    [15] Siveen KS, Sikka S, Surana R, et al. Targeting the STAT3 signaling pathway in cancer: role of synthetic and natural inhibitors[J]. Biochim Biophy Acta, 2014, 1845(2):136-154.

    [16] 李 邐, 王 純, 盧宏達(dá). 馬錢子堿通過抑制 IL-6/STAT3 信號(hào)通路誘導(dǎo)結(jié)腸癌 SW480 細(xì)胞凋亡[J]. 中國(guó)病理生理雜志, 2016, 32(6):998-1003.

    [17] Zhang P, Li H, Yang B, et al. Biological significance and therapeutic implication of resveratrol-inhibited Wnt, Notch and STAT3 signaling in cervical cancer cells[J]. Genes Cancer, 2014, 5(5-6):154-164.

    [18] Guo J, Kim D, Gao J, et al. IKBKE is induced by STAT3 and tobacco carcinogen and determines chemosensitivity in non-small cell lung cancer[J]. Oncogene, 2013, 32(2):151-159.

    [19] Zhang B, Lu Z, Hou Y, et al. The effects of STAT3 and Survivin silencing on the growth of human bladder carcinoma cells[J]. Tumor Biol, 2014, 35(6): 5401-5407.

    猜你喜歡
    宮頸癌試劑盒蛋白
    中老年女性的宮頸癌預(yù)防
    豬胎盤蛋白的分離鑒定
    中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:19:00
    Hepsin及HMGB-1在宮頸癌組織中的表達(dá)與侵襲性相關(guān)性分析
    GlobalFiler~? PCR擴(kuò)增試劑盒驗(yàn)證及其STR遺傳多態(tài)性
    GoldeneyeTM DNA身份鑒定系統(tǒng)25A試劑盒的法醫(yī)學(xué)驗(yàn)證
    自噬蛋白Beclin-1在膽囊癌中的表達(dá)及臨床意義
    E-cadherin、Ezrin在宮頸癌組織中的表達(dá)及臨床意義
    食管疾病(2015年3期)2015-12-05 01:45:07
    SAK -HV 蛋白通過上調(diào) ABCG5/ABCG8的表達(dá)降低膽固醇的吸收
    C-Met蛋白與HGF蛋白在舌鱗癌細(xì)胞中的表達(dá)及臨床意義
    Survivin、NF-кB和STAT3 mRNA在宮頸癌中的表達(dá)及其臨床意義
    十八禁高潮呻吟视频| 欧美日韩精品网址| 亚洲久久久国产精品| 人妻人人澡人人爽人人| 久久精品国产综合久久久| www日本在线高清视频| 青春草国产在线视频| 91成人精品电影| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲精品自拍成人| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 9191精品国产免费久久| 久久精品久久久久久久性| 日韩电影二区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 狂野欧美激情性xxxx| av在线播放精品| 国产精品久久久久久精品电影小说| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 美女扒开内裤让男人捅视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 精品久久久精品久久久| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产一卡二卡三卡精品 | 亚洲,一卡二卡三卡| 日韩 亚洲 欧美在线| 免费黄频网站在线观看国产| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| www.精华液| 亚洲欧美清纯卡通| 老熟女久久久| 天天添夜夜摸| 少妇人妻久久综合中文| 热re99久久国产66热| 性色av一级| 赤兔流量卡办理| 欧美在线一区亚洲| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 欧美黑人精品巨大| 欧美xxⅹ黑人| 七月丁香在线播放| 9191精品国产免费久久| 丝袜喷水一区| 久久精品国产亚洲av高清一级| 好男人视频免费观看在线| 国产精品一二三区在线看| 久久婷婷青草| 色精品久久人妻99蜜桃| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 午夜91福利影院| 999久久久国产精品视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 十八禁人妻一区二区| 国产一区亚洲一区在线观看| 丝袜美足系列| 中文字幕制服av| 亚洲成人国产一区在线观看 | 欧美中文综合在线视频| 久久久久精品性色| a级片在线免费高清观看视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 大香蕉久久网| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 一区二区三区四区激情视频| 婷婷成人精品国产| 久久av网站| 亚洲av国产av综合av卡| 国产一区二区 视频在线| 狂野欧美激情性bbbbbb| 另类亚洲欧美激情| 亚洲美女黄色视频免费看| 搡老乐熟女国产| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 一级毛片 在线播放| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲国产精品国产精品| 99国产综合亚洲精品| 午夜老司机福利片| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久久久久久国产电影| 国产成人精品在线电影| 少妇人妻久久综合中文| 高清欧美精品videossex| 伊人久久国产一区二区| 国产av码专区亚洲av| 国产麻豆69| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 老汉色∧v一级毛片| 国产av码专区亚洲av| 一区二区av电影网| 午夜福利影视在线免费观看| 一级爰片在线观看| av网站免费在线观看视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 美国免费a级毛片| 老熟女久久久| 亚洲欧美精品自产自拍| 男女边吃奶边做爰视频| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲一区二区三区欧美精品| 夫妻午夜视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产又爽黄色视频| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | av卡一久久| 不卡av一区二区三区| 悠悠久久av| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲国产欧美一区二区综合| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产精品国产三级专区第一集| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产免费视频播放在线视频| 在线观看www视频免费| 一级爰片在线观看| 黄色视频不卡| 大香蕉久久成人网| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲成人手机| 韩国高清视频一区二区三区| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产淫语在线视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 成人毛片60女人毛片免费| 午夜老司机福利片| 久久热在线av| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 丁香六月欧美| 一二三四在线观看免费中文在| 伊人久久国产一区二区| 亚洲国产精品999| 久久鲁丝午夜福利片| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜制服| 街头女战士在线观看网站| 亚洲伊人久久精品综合| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲欧美激情在线| 精品国产一区二区三区四区第35| 免费高清在线观看日韩| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产国语露脸激情在线看| 欧美中文综合在线视频| 国精品久久久久久国模美| 亚洲欧美清纯卡通| tube8黄色片| 亚洲av日韩在线播放| 高清av免费在线| 最近2019中文字幕mv第一页| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲国产av影院在线观看| 亚洲综合精品二区| 免费看不卡的av| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久精品国产a三级三级三级| 人体艺术视频欧美日本| 国产精品三级大全| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 操出白浆在线播放| 五月天丁香电影| 国产又色又爽无遮挡免| 日韩制服骚丝袜av| 午夜激情av网站| 国产伦理片在线播放av一区| 国产成人免费观看mmmm| 久久人人爽人人片av| 久久鲁丝午夜福利片| 操美女的视频在线观看| 一本大道久久a久久精品| 精品人妻一区二区三区麻豆| 午夜日本视频在线| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 午夜日韩欧美国产| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 老司机影院毛片| 99久久精品国产亚洲精品| www日本在线高清视频| 国产一卡二卡三卡精品 | av电影中文网址| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲人成电影观看| 国产99久久九九免费精品| 97在线人人人人妻| 国产精品成人在线| 国产精品嫩草影院av在线观看| 免费在线观看完整版高清| bbb黄色大片| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久99精品国语久久久| 国产精品熟女久久久久浪| 国产毛片在线视频| 777米奇影视久久| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产成人精品在线电影| 一级毛片电影观看| 波多野结衣av一区二区av| 18在线观看网站| 丝袜美足系列| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲美女视频黄频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲av男天堂| 老司机亚洲免费影院| 免费在线观看完整版高清| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 成人午夜精彩视频在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 尾随美女入室| 日韩制服骚丝袜av| 国产乱来视频区| h视频一区二区三区| 伊人亚洲综合成人网| 国产精品三级大全| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 91aial.com中文字幕在线观看| 我要看黄色一级片免费的| 免费看不卡的av| 免费不卡黄色视频| 中文字幕亚洲精品专区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 伦理电影免费视频| 午夜福利视频在线观看免费| 男人操女人黄网站| 2021少妇久久久久久久久久久| 午夜福利乱码中文字幕| 99热网站在线观看| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产在线免费精品| 成人三级做爰电影| 欧美日韩亚洲高清精品| 又大又爽又粗| 老司机深夜福利视频在线观看 | 国产精品熟女久久久久浪| 91成人精品电影| 午夜福利免费观看在线| 久久性视频一级片| 国产精品 欧美亚洲| 老司机亚洲免费影院| 亚洲伊人色综图| 久久久国产精品麻豆| 观看av在线不卡| 人人澡人人妻人| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 中国国产av一级| 久久人人爽人人片av| 亚洲人成网站在线观看播放| 大话2 男鬼变身卡| 国产亚洲欧美精品永久| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲,一卡二卡三卡| 精品一区二区三卡| 免费高清在线观看视频在线观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 九九爱精品视频在线观看| 亚洲精品视频女| 2021少妇久久久久久久久久久| 黄色视频不卡| 青青草视频在线视频观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 伊人久久国产一区二区| 亚洲天堂av无毛| 一二三四在线观看免费中文在| 天天添夜夜摸| 美女福利国产在线| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产精品一区二区在线不卡| 精品一品国产午夜福利视频| 国产激情久久老熟女| 亚洲伊人色综图| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产在线免费精品| 看免费av毛片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 9色porny在线观看| 亚洲精品一二三| 欧美国产精品一级二级三级| 巨乳人妻的诱惑在线观看| av片东京热男人的天堂| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 69精品国产乱码久久久| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| av网站免费在线观看视频| 天美传媒精品一区二区| 丰满少妇做爰视频| 嫩草影院入口| 亚洲成人国产一区在线观看 | 日本一区二区免费在线视频| 99久久综合免费| 欧美人与善性xxx| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲国产最新在线播放| 无遮挡黄片免费观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 国产一卡二卡三卡精品 | 免费av中文字幕在线| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲熟女毛片儿| kizo精华| 精品午夜福利在线看| 婷婷色av中文字幕| 国产福利在线免费观看视频| 久久久久久久久免费视频了| 热99久久久久精品小说推荐| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产精品一区二区在线观看99| 少妇的丰满在线观看| 亚洲欧美激情在线| 亚洲欧美精品自产自拍| 精品少妇内射三级| 人妻一区二区av| 性少妇av在线| 中文字幕制服av| 精品国产露脸久久av麻豆| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲精品一区蜜桃| av免费观看日本| 亚洲欧美一区二区三区久久| 久久亚洲国产成人精品v| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 女的被弄到高潮叫床怎么办| 永久免费av网站大全| 久久影院123| 亚洲国产看品久久| 少妇人妻 视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 成人亚洲欧美一区二区av| 成人国产av品久久久| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产一卡二卡三卡精品 | 黄色怎么调成土黄色| 丝袜喷水一区| 亚洲免费av在线视频| 青春草国产在线视频| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 搡老乐熟女国产| 国产精品国产av在线观看| 久久久久精品久久久久真实原创| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产伦理片在线播放av一区| 在线观看国产h片| 日日啪夜夜爽| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久久久久久久久久久大奶| 毛片一级片免费看久久久久| 精品少妇黑人巨大在线播放| 男女边吃奶边做爰视频| 老熟女久久久| 日韩大片免费观看网站| 久久精品国产a三级三级三级| 在线观看免费日韩欧美大片| 亚洲国产欧美网| 免费看不卡的av| 女人精品久久久久毛片| 韩国精品一区二区三区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产精品av久久久久免费| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久婷婷青草| 亚洲国产av新网站| 国产精品久久久久成人av| 久久久久久久久久久免费av| 男女高潮啪啪啪动态图| 美女视频免费永久观看网站| 国产又色又爽无遮挡免| 欧美xxⅹ黑人| 在线观看免费午夜福利视频| 久久久久久久久免费视频了| 国产精品一二三区在线看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 欧美在线一区亚洲| 日韩av免费高清视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲图色成人| 免费在线观看完整版高清| 欧美日韩成人在线一区二区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 看免费成人av毛片| 性少妇av在线| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产在线一区二区三区精| 欧美日韩成人在线一区二区| a级毛片黄视频| 伦理电影大哥的女人| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 青春草视频在线免费观看| 日日撸夜夜添| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲美女黄色视频免费看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲精品,欧美精品| 咕卡用的链子| 亚洲av电影在线进入| 国产一区二区 视频在线| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久ye,这里只有精品| 少妇精品久久久久久久| 国产成人免费观看mmmm| tube8黄色片| 色婷婷av一区二区三区视频| 午夜激情av网站| 色网站视频免费| 国产片内射在线| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 在线天堂中文资源库| 国产一区二区 视频在线| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲综合色网址| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 中文字幕色久视频| 国产乱人偷精品视频| 日韩大码丰满熟妇| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲七黄色美女视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 久久99热这里只频精品6学生| 日韩视频在线欧美| 波多野结衣一区麻豆| 国产一级毛片在线| 只有这里有精品99| 精品国产超薄肉色丝袜足j| av网站在线播放免费| 婷婷成人精品国产| 成人国产麻豆网| 超碰97精品在线观看| 交换朋友夫妻互换小说| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 免费不卡黄色视频| 国产在线一区二区三区精| 中国三级夫妇交换| 十八禁高潮呻吟视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 一个人免费看片子| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲av综合色区一区| 日本午夜av视频| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 丝袜在线中文字幕| 亚洲精品自拍成人| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 欧美激情极品国产一区二区三区| 两个人看的免费小视频| 伊人久久国产一区二区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 欧美97在线视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 欧美av亚洲av综合av国产av | 亚洲国产成人一精品久久久| 电影成人av| a 毛片基地| 丝袜人妻中文字幕| 久久人人爽人人片av| 成人手机av| 久久精品久久久久久久性| 久久99一区二区三区| 老司机在亚洲福利影院| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 久久久久网色| 国产熟女欧美一区二区| 久久精品国产综合久久久| 国产男女超爽视频在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久热这里只有精品99| 狂野欧美激情性xxxx| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 成人影院久久| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 在线观看三级黄色| 少妇被粗大的猛进出69影院| 久久ye,这里只有精品| 国产在线免费精品| netflix在线观看网站| 国产欧美亚洲国产| 老司机深夜福利视频在线观看 | 中文字幕高清在线视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 一本久久精品| 久久人妻熟女aⅴ| 99久国产av精品国产电影| 久久久久久久久久久免费av| av卡一久久| 成人免费观看视频高清| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲一码二码三码区别大吗| 老司机在亚洲福利影院| 中文欧美无线码| 最近的中文字幕免费完整| 久久天堂一区二区三区四区| 久久久久久久精品精品| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 亚洲av男天堂| 国产乱人偷精品视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| h视频一区二区三区| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久精品国产亚洲av涩爱| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 中文字幕人妻丝袜制服| 99热全是精品| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 在线观看人妻少妇| 国产一区二区在线观看av| 国产xxxxx性猛交| 一级毛片 在线播放| 欧美av亚洲av综合av国产av | 18禁观看日本| 久久性视频一级片| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久这里只有精品19| 精品视频人人做人人爽| 国产精品欧美亚洲77777| 十八禁网站网址无遮挡| 精品卡一卡二卡四卡免费| 欧美最新免费一区二区三区| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 超色免费av| www.自偷自拍.com| 中国三级夫妇交换| 亚洲av在线观看美女高潮| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美老熟妇乱子伦牲交| av国产久精品久网站免费入址| 精品国产露脸久久av麻豆| 亚洲欧美激情在线| 一区在线观看完整版| 18禁观看日本| av在线观看视频网站免费| 不卡av一区二区三区| 国产精品.久久久| bbb黄色大片| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产国语露脸激情在线看| 涩涩av久久男人的天堂| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲成人国产一区在线观看 | 欧美在线一区亚洲| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲欧洲日产国产| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产成人a∨麻豆精品| avwww免费| 欧美日韩视频精品一区| av在线老鸭窝| 成人三级做爰电影| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产成人精品无人区| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲综合精品二区| 亚洲国产精品一区二区三区在线| www日本在线高清视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 妹子高潮喷水视频| 少妇人妻 视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产成人91sexporn| 日本91视频免费播放| 国产精品欧美亚洲77777| 老汉色av国产亚洲站长工具| 免费观看性生交大片5| 亚洲精品aⅴ在线观看| 最近的中文字幕免费完整| 美女主播在线视频| 男女午夜视频在线观看| 国产精品免费大片| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 久久青草综合色| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲精品在线美女| 少妇的丰满在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 精品国产国语对白av| 51午夜福利影视在线观看|