豬胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定

華芳

摘 要：從本地疑似感染豬傳染性胸膜肺炎病豬處進(jìn)行材料收集，然后在巧克力瓊脂平板上進(jìn)行分離培養(yǎng)，最后得到三株細(xì)菌，將其分別命名為X-1、X-2、X-3。對(duì)相應(yīng)的細(xì)菌依次進(jìn)行生化特征檢測(cè)、衛(wèi)星生長(zhǎng)現(xiàn)象分析、尿素酶實(shí)驗(yàn)鑒定、CAMP試驗(yàn)，其均表現(xiàn)出豬胸膜肺炎放線桿菌的典型癥狀。藥敏試驗(yàn)結(jié)果為分離菌株對(duì)硫酸慶大霉素、四環(huán)素、氨芐西林、諾氟沙星具有高度敏感性。

關(guān)鍵詞：豬傳染性胸膜肺炎；豬胸膜肺炎放線桿菌；分離鑒定

豬傳染性胸膜肺炎具有一定的散發(fā)性，常發(fā)生于仔豬斷奶期間，會(huì)降低仔豬免疫力，進(jìn)而導(dǎo)致仔豬敗血癥等病癥，極大地增加了仔豬死亡率。對(duì)于成年種豬而言，其在感染豬胸膜肺炎放線桿菌之后會(huì)表現(xiàn)出關(guān)節(jié)炎、肺炎、體溫上升、食欲下降等情況，甚至引發(fā)心內(nèi)膜炎、腎炎等其他病癥，甚至死亡。

一、材料與方法

1.材料制作

本文所使用的巧克力瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、鮮血瓊脂平板、普通瓊脂平板均為實(shí)驗(yàn)室自行制作；而藥敏紙片、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸均來(lái)自杭州某公司。肺臟病變組織及扁桃體樣本采自某規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)，此規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)內(nèi)病豬具有典型呼吸道疾病病癥。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為18g左右的小白鼠，均采購(gòu)于當(dāng)?shù)貙?shí)驗(yàn)動(dòng)物機(jī)構(gòu)。

2.方法實(shí)施

本次實(shí)驗(yàn)主要包括細(xì)菌分離培養(yǎng)、細(xì)菌鑒定兩個(gè)環(huán)節(jié)。其中細(xì)菌分離培養(yǎng)需要將肺門淋巴結(jié)、肺組織、氣管等組織器官無(wú)菌取樣，并依次接種在所制作的巧克力瓊脂平板上，在接種完畢之后利用雞表皮葡萄球菌進(jìn)行十字化線，最后在8%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)， 36.5℃，培養(yǎng)36小時(shí)。

細(xì)菌鑒定工作首先選擇巧克力瓊脂平板上的單一可疑菌落，在依次進(jìn)行涂片、革蘭氏染色后進(jìn)行鏡檢觀察細(xì)菌狀態(tài)；其次依次將所得到的細(xì)菌接種在鮮血瓊脂平板、普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板上，在36.5℃的二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)36小時(shí)；再次將1%血紅素作為X因子、1%NAD作為Y因子，進(jìn)行無(wú)菌涂片工作并將其涂布在普通培養(yǎng)基培養(yǎng)；最后依照相關(guān)規(guī)定對(duì)其進(jìn)行尿素酶、衛(wèi)星現(xiàn)象、糖發(fā)酵等生化特性檢驗(yàn)。然后利用改良后的培養(yǎng)菌液進(jìn)行動(dòng)物回歸試驗(yàn)。

二、結(jié)果分析

1.癥狀及分離結(jié)果

養(yǎng)豬場(chǎng)內(nèi)病豬均出現(xiàn)典型的呼吸道癥狀，并伴隨有體溫升高、消瘦、咳嗽等現(xiàn)象，同時(shí)解剖檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)個(gè)別樣本病豬出現(xiàn)肺臟、胸腔粘連出血情況，且肺臟內(nèi)部具有纖維素性物質(zhì)滲出。細(xì)菌分離培養(yǎng)過(guò)程中均出現(xiàn)相同癥狀的β-溶血性細(xì)菌。

2.分離菌株染色及培養(yǎng)特性

革蘭染色、鏡檢過(guò)程中觀察到分離菌株為桿狀、兩端橢圓、有短連、雙連、單一等不同的活動(dòng)形式，極少部分細(xì)菌成長(zhǎng)絲形狀。通過(guò)分離菌株在普通瓊脂、巧克力瓊脂、鮮血等培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)的情況對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)其為兼性厭氧菌。其中分離菌株在巧克力瓊脂及鮮血瓊脂培養(yǎng)基上呈現(xiàn)β-溶血性，且具有良好的生長(zhǎng)狀態(tài)；分離菌株在巧克力瓊脂平板生長(zhǎng)菌落成直徑為0.9毫米的半透明狀圓形，該菌株整體呈碧綠色，且菌落邊緣較整齊，鏡檢后得出其為革蘭氏陰性球桿菌；分離菌株在普通瓊脂培養(yǎng)基上逐漸形成部分隆起、具有一定濕潤(rùn)度的灰白狀菌落，菌落整體呈直徑為0.6毫米左右的圓形。在初次分離后分離菌落在鮮血培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)態(tài)勢(shì)較好，且由以往的嵌入式生長(zhǎng)轉(zhuǎn)化為緩慢隆起狀生長(zhǎng)。在化有雞表皮葡萄桿菌交叉接種后，可得出分離菌株在相應(yīng)的巧克力瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)呈現(xiàn)衛(wèi)星現(xiàn)象，隨后綜合采用Y因子、X因子濾片培養(yǎng)后得出Y因子為此菌株生長(zhǎng)必備條件。

3.生化試驗(yàn)及藥物敏感性試驗(yàn)

經(jīng)過(guò)分離菌株糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)得出分離菌株可發(fā)酵甘露醇、乳糖、葡糖糖、麥芽糖、阿拉伯糖等糖類；而在尿素酶實(shí)驗(yàn)中得出分離菌株呈陽(yáng)性反應(yīng)。在藥物敏感性實(shí)驗(yàn)中得出分離菌株均對(duì)四環(huán)素、諾氟沙星、氨芐西林等多西環(huán)素程序高度敏感性。此外在動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)在感染分離菌株后，小鼠均在24小時(shí)內(nèi)死亡，而通過(guò)在死亡小白鼠體內(nèi)分離到相同生長(zhǎng)特性的菌株后滅活培養(yǎng)，然后對(duì)照組部分小白鼠接種滅活疫苗之后其呼吸道癥狀疫病逐漸減輕，隨后在一段時(shí)期連續(xù)接種之后發(fā)現(xiàn)其抗原水平明顯下降。

通過(guò)對(duì)某地規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)收集的病豬樣本進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)，將相關(guān)試樣可得所分離得到的細(xì)菌培養(yǎng)性質(zhì)與豬胸膜肺炎放線桿菌具有一致的生化特性。然后結(jié)合病菌致病性、流行病理論等因素可得出該分離均為豬胸膜肺炎放線桿菌，豬胸膜肺炎放線桿菌血清型較復(fù)雜，對(duì)于血清型交叉防疫工作進(jìn)行提出了一定的困難，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后中對(duì)病豬肺臟纖維性滲出液進(jìn)行了進(jìn)一步分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，然后得出其內(nèi)部含有多種病菌，如化膿棒狀桿菌、大腸桿菌、副豬嗜血桿菌等，這些病菌不僅可以引起豬纖維素性胸膜炎，甚至?xí)?dǎo)致豬心包炎等病癥的發(fā)生，而本文經(jīng)過(guò)動(dòng)物回歸試驗(yàn)有針對(duì)性的制備了相關(guān)的疫苗接種措施，取得了良好的實(shí)驗(yàn)效果。

三、結(jié)語(yǔ)

綜上所述，豬胸膜肺炎放線桿菌在感染豬后會(huì)直接導(dǎo)致豬傳染性胸膜肺炎的產(chǎn)生，豬胸膜肺炎是一種嚴(yán)重的呼吸道疾病，不僅傳染速率較快，而且感染會(huì)在較短的時(shí)間內(nèi)促使仔豬死亡，再加上其與豬鏈球菌、豬瘟等病菌的聯(lián)合作用，促使養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)豬的死亡率極大提升，對(duì)規(guī)模養(yǎng)豬行業(yè)造成了極大的經(jīng)濟(jì)損害，因此在種豬發(fā)病之初應(yīng)及時(shí)送交相關(guān)檢測(cè)機(jī)構(gòu)鑒別分析，在確定病癥的第一時(shí)間進(jìn)行防疫治療，降低豬胸膜肺炎放線桿菌的危害程度。

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