中藥川芎對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響研究

魏廣治

臨床中關(guān)于口腔治療相關(guān)的研究多見(jiàn)，關(guān)于口腔骨代謝方面的相關(guān)研究不斷增多，牙周支持組織的破壞，如牙槽骨吸收﹑牙周袋的形成和進(jìn)行性附著喪失，最后可導(dǎo)致牙松動(dòng)和被拔除，而成骨細(xì)胞增殖作為在牙槽骨缺損重建中發(fā)揮重要作用的方面，對(duì)其進(jìn)行的調(diào)節(jié)有助于牙槽骨骨小梁的改建，其中成骨細(xì)胞增殖情況（CCK-8值）及ALP活性作為反應(yīng)骨重建的重要指標(biāo)，對(duì)其表達(dá)的監(jiān)控結(jié)果可作為干預(yù)效果的評(píng)估依據(jù)[1]。中藥川芎作為補(bǔ)骨強(qiáng)腎的重要藥物，在骨髓功能促進(jìn)中的作用較好，但是對(duì)于成骨細(xì)胞增殖的影響研究不足。本研究就中藥川芎對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響進(jìn)行探究與分析，結(jié)果總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 基本資料

以小鼠成骨細(xì)胞株MC3T3-E1為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以川芎提取液干預(yù)作為觀察組，并以α-MEM培養(yǎng)液干預(yù)為對(duì)照組。

1.2 方法

1.2.1 材料 鹽酸川芎嗪標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自北京億諾輝科技發(fā)展有限公司；小鼠成骨細(xì)胞株MC3T3-E1購(gòu)自上海中科院細(xì)胞庫(kù)；二甲基亞砜購(gòu)自Sigma公司；胎牛血清購(gòu)自杭州四季青公司；CCK-8試劑盒購(gòu)自上海博古生物科技有限公司；ALP試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 首先將小鼠成骨細(xì)胞株MC3T3-E1進(jìn)行培養(yǎng)，穩(wěn)定二氧化碳（5%）水平，在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)（溫度37℃，濕度95%），培養(yǎng)液更換間隔時(shí)間為2.0 d，細(xì)胞匯合度至80%～90%時(shí)采用0.25%胰蛋白酶進(jìn)行消化細(xì)胞處理。鹽酸川芎嗪標(biāo)準(zhǔn)品采用對(duì)倍稀釋法處理，制備10 μg/ml的川芎藥液干預(yù)作為觀察組，另以α-MEM培養(yǎng)液加入的空白對(duì)照組作為對(duì)照，觀察組于干預(yù)24 h及48 h各檢測(cè)1次，每次均設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。采用CCK-8試劑盒方法進(jìn)行細(xì)胞增殖率的檢測(cè)，并以多功能酶標(biāo)儀讀取波長(zhǎng)4 50O D值，并以ALP試劑盒進(jìn)行ALP活性的檢測(cè)。統(tǒng)計(jì)與比較兩組的檢測(cè)值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本研究軟件為SPSS 20.0，計(jì)量資料進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

干預(yù)后24 h﹑48 h及72 h觀察組的CCK-8值及ALP活性均高于對(duì)照組（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組干預(yù)后24 h、48 h及72 h的CCK-8值及ALP活性比較

3 討論

口腔治療過(guò)程中，較多患者面臨牙槽骨重建的情況，而牙槽骨重建的細(xì)胞基礎(chǔ)為破骨細(xì)胞與成骨細(xì)胞的平衡調(diào)節(jié)，其中成骨細(xì)胞的分化增殖是骨形成的關(guān)鍵，因此對(duì)其進(jìn)行增殖狀態(tài)的調(diào)節(jié)成為治療的重點(diǎn)[2-4]。另外，ALP作為成骨細(xì)胞分泌的一類(lèi)重要酶蛋白，在成骨細(xì)胞的早期分化反應(yīng)中具有積極的反應(yīng)作用，對(duì)ALP表達(dá)的調(diào)控是重要的監(jiān)測(cè)方面[5-7]。近年來(lái)采用多種方式促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖的研究多見(jiàn)，而中藥方面的相關(guān)研究也可見(jiàn)，其中中藥川芎作為具有較好的補(bǔ)骨強(qiáng)腎的藥物，對(duì)患者骨代謝的影響研究雖可見(jiàn)，但是對(duì)于成骨細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用研究及相關(guān)研究差異較大[8-10]，未見(jiàn)其顯著優(yōu)勢(shì)的研究，因此這些方面的影響探究仍十分必要。

本研究顯示，干預(yù)后24 h﹑48 h及72 h中藥川芎干預(yù)的CCK-8值及ALP活性均高于α-MEM培養(yǎng)液干預(yù)的效果，干預(yù)后48 h高于其他時(shí)間，說(shuō)明中藥川芎的干預(yù)效果更為顯著，這可能與中藥川芎的氧自由基清除及骨代謝調(diào)節(jié)作用有關(guān)，因此在骨細(xì)胞增殖狀態(tài)的提升方面有較好作用[11-12]。綜上所述，我們認(rèn)為中藥川芎可有效促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖。

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