“即刻性”質(zhì)控在ELISA定性試驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制中的應(yīng)用和探討

徐暢 梁爽 井元冰

ELISA試驗(yàn)是血站實(shí)驗(yàn)室的主要檢測(cè)項(xiàng)目,確保每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目每批次試驗(yàn)結(jié)果的有效性、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性,方可保證臨床用血的血液質(zhì)量,血站的血液質(zhì)量安全與實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性緊密相關(guān)。實(shí)驗(yàn)室建立科學(xué)有效的室內(nèi)質(zhì)量控制方法以保證血液檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠,目前ELISA試驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)量控制常采用Levey-Jennings質(zhì)控法(L-J質(zhì)控法)和“即刻性”質(zhì)控法［1,2］,在常規(guī)試驗(yàn)條件下質(zhì)控血清和檢測(cè)樣品同等條件下同時(shí)檢測(cè)；“即刻性”質(zhì)控是累計(jì)3次質(zhì)控檢驗(yàn)結(jié)果值計(jì)算即可開展質(zhì)量控制故稱之“即刻性”質(zhì)控。“即刻性”室內(nèi)質(zhì)控因它的快速、簡(jiǎn)便、科學(xué)和實(shí)用而被廣泛應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 Microlab STAR 全自動(dòng)加樣儀、HAMILTON FAME(24/20)全自動(dòng)酶免分析儀、唐山血液信息管理系統(tǒng)。

1.1.2 試劑 ELISA法檢測(cè)試劑盒HBsAg為北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)有限公司,試劑在有效期內(nèi)；弱陽(yáng)性質(zhì)控血清為北京康徹思坦生物技術(shù)有限公司,在有效期內(nèi)。

1.2 方法 在ELISA常規(guī)試驗(yàn)中應(yīng)用弱陽(yáng)性質(zhì)控品建立室內(nèi)質(zhì)控制圖,以HBsAg項(xiàng)目為例第1～20次試驗(yàn)采用“即刻性”室內(nèi)質(zhì)控方法,第21次起采用Levey-Jennings室內(nèi)質(zhì)控方法,通過(guò)兩種方法進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制,分析“即刻性”室內(nèi)質(zhì)控方法的應(yīng)用。嚴(yán)格依據(jù)ELISA試劑盒內(nèi)說(shuō)明書操作,設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照,質(zhì)控品對(duì)照,Cut-off臨界值計(jì)算方法按說(shuō)明書,S/CO為室內(nèi)質(zhì)控值,弱陽(yáng)性質(zhì)控品在低溫冰凍保存,使用前放置于室溫溶化,待其與試劑在室溫平衡后和獻(xiàn)血者標(biāo)本同時(shí)檢測(cè),剩余標(biāo)準(zhǔn)品在2～8℃中冷藏保存續(xù)用。

HBsAg檢測(cè)項(xiàng)目按照SOP應(yīng)用全自動(dòng)檢測(cè)設(shè)備檢測(cè),HBsAg檢測(cè)項(xiàng)目每一個(gè)檢測(cè)微板為1個(gè)批次,每批次微板上設(shè)置1個(gè)質(zhì)控孔位并以其S/CO值作為質(zhì)控值,微板的檢驗(yàn)結(jié)果通過(guò)酶標(biāo)儀讀取,用于室內(nèi)質(zhì)控的弱陽(yáng)性質(zhì)控品濃度S/CO值為2～5,弱陽(yáng)性質(zhì)控品正式使用前應(yīng)確認(rèn),包括質(zhì)控品批內(nèi)和批間檢測(cè)S/CO值結(jié)果的精密度等；質(zhì)控值從第3次開始用“即刻性”進(jìn)行質(zhì)控。計(jì)算方法如下：①計(jì)算出質(zhì)控值(至少3次)的平均值()和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)。②計(jì)算SI上限值和SI下限值：SI上限=(X最大值-)/s；SI下限=(-X最小值)/s。③查SI值表,將SI上限和SI下限與SI值表中的數(shù)值進(jìn)行比較。

當(dāng)SI上限和SI下限值＜n2s時(shí),表示處于控制范圍之內(nèi),可以繼續(xù)進(jìn)行測(cè)定,并重復(fù)以上計(jì)算；當(dāng)SI上限和SI限有一值處于n2s和n3s值之間時(shí),說(shuō)明該值在2s～3s范圍,處于“警告”狀態(tài)；當(dāng)SI上限和SI下限有一值＞n3s時(shí),說(shuō)明該值已在3s范圍之外,屬“失控”。數(shù)字處于“失控”狀態(tài)應(yīng)舍去,重新測(cè)定質(zhì)控品和標(biāo)本。舍去的只是失控的這次數(shù)值,其他次測(cè)定值仍可繼續(xù)使用。當(dāng)檢測(cè)的數(shù)字＞20次以后,可轉(zhuǎn)入使用常規(guī)的質(zhì)控方法進(jìn)行質(zhì)控。根據(jù)參考文獻(xiàn)探討“即刻性”存在剔除末次測(cè)定值和剔除最大偏離值兩種方法。

2 結(jié)果

第 5 次室內(nèi)質(zhì)控 S/CO 值 =2.21,SDI 上限和 SDI 下限值分別為1.06、1.49,室內(nèi)質(zhì)控值不失控。當(dāng)?shù)? 次室內(nèi)質(zhì)控S/CO 值 =3.26,SDI 上限和 SDI 下限值分別為 1.14、2.14,室內(nèi)質(zhì)控值處于“警告”狀態(tài)。提示室內(nèi)質(zhì)控測(cè)定值中發(fā)現(xiàn)明顯偏離群體的極值 ,在 n=5 時(shí) ,室內(nèi)質(zhì)控 S/CO 值 =2.21,為最小偏離值,導(dǎo)致n=9時(shí)才能發(fā)現(xiàn)出質(zhì)控值失控,剔除最小偏離值后,其他質(zhì)控值計(jì)算均在控,這一現(xiàn)象稱之為“回顧性失控檢出”。見(jiàn)表1。

表1 HBsAg 室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)分析 (0.2 IU/ml)

3 討論

ELISA試劑有效期較短,因試劑批號(hào)、廠家更換或質(zhì)控品批號(hào)、廠家與濃度更換時(shí)如應(yīng)用L-J法進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制,需連續(xù)做20次實(shí)驗(yàn),求出質(zhì)控值得平均值(X)和標(biāo)準(zhǔn)差(SD),試劑浪費(fèi)較多,而且前20次質(zhì)控值出現(xiàn)明顯偏離群體的極值對(duì)L-J法室內(nèi)質(zhì)控圖建立影響較大；而“即刻性”質(zhì)控法從試驗(yàn)的第3次就可以對(duì)以后的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)進(jìn)行在控與失控的判斷,操作快速、簡(jiǎn)便,因此在ELISA試驗(yàn)質(zhì)量控制中對(duì)于一些檢測(cè)頻次少或試劑更換頻繁的檢驗(yàn)項(xiàng)目,初始階段可采用“即刻性”質(zhì)控,但“即刻性”質(zhì)控只能判斷當(dāng)天質(zhì)控值是否在控,隨著數(shù)據(jù)的增多,會(huì)出現(xiàn)之前在控的質(zhì)控值出現(xiàn)“警告”或“失控”,這也是即刻性 “回顧性失控檢出” 的一個(gè)缺陷［3］。L-J質(zhì)控法是根據(jù)試驗(yàn)的20組質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)值,計(jì)算出均值和標(biāo)準(zhǔn)差,繪制出質(zhì)控圖,能夠明確的了解每個(gè)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)值的是否在控情況,使得質(zhì)控點(diǎn)的判斷更加科學(xué)、直觀,并隨著質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的增多,當(dāng)質(zhì)控值出現(xiàn)上升或下降趨勢(shì),便于發(fā)現(xiàn),及時(shí)分析原因進(jìn)行預(yù)防性消除,實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠［4-7］。因此質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)較多時(shí)L-J質(zhì)控法優(yōu)于“即刻性”質(zhì)控。故室內(nèi)質(zhì)控前20次可采用“即刻性”質(zhì)控,第20 次后采用L-J質(zhì)控圖法。通過(guò)上述分析,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系并持續(xù)改進(jìn),對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)不斷加強(qiáng)業(yè)務(wù)培訓(xùn),提高實(shí)驗(yàn)室人員的質(zhì)量意識(shí),保證室內(nèi)質(zhì)量控制方法正確實(shí)施。

當(dāng)“即刻性”質(zhì)控應(yīng)用于試驗(yàn)中出現(xiàn)極值時(shí),剔除明顯偏離群體的極值；“即刻性”質(zhì)控在室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)值較少時(shí)即可以達(dá)到開展室內(nèi)質(zhì)控的目的［8-10］。建議在室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)達(dá)到20次建立L-J質(zhì)控圖后,應(yīng)及時(shí)進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)回顧性分析。“即刻性”質(zhì)控法在ELISA試驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)控值前20次期間,L-J質(zhì)控圖未做出之前,第3次即可判定室內(nèi)質(zhì)控值是否在控,即時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)監(jiān)控,較L-J法更快速、簡(jiǎn)便,因此“即刻性”質(zhì)控和L-J質(zhì)控法作為ELISA試驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)控方法更適宜,更能滿足實(shí)驗(yàn)室ELISA試驗(yàn)開展室內(nèi)質(zhì)量控制的要求。

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