富含OPO的植物乳脂粉與腸道微生物體外發(fā)酵特性研究

劉蔚宇，葉子青，李琳琳，侯?lèi)?ài)香，李宗軍

(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院 長(zhǎng)沙410128)

0 引言

1,3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯，簡(jiǎn)稱OPO，是豬油和母乳脂的主要三甘酯成分之一，其棕櫚酸主要分布于Sn-2位。OPO作為營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，能在人體消化時(shí)不易形成鈣皂，更易于脂肪酸和鈣的消化吸收，目前多添加在嬰幼兒配方奶粉中，是嬰幼兒配方奶粉母乳化過(guò)程中的關(guān)鍵添加成分，對(duì)嬰幼兒健康成長(zhǎng)有至關(guān)重要的作用[1-3]。但國(guó)內(nèi)外嬰幼兒配方奶粉中添加的多是結(jié)構(gòu)脂質(zhì)OPO，這種結(jié)構(gòu)脂質(zhì)OPO產(chǎn)品，通常以兩種形式添加到嬰幼兒配方奶粉中，一是制成富含OPO的植物乳脂油，濕法加入奶粉中，二是制成粉劑營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，即富含OPO的植物乳脂粉，干法加入奶粉中，目前，國(guó)內(nèi)多采用干法加入的方式。

人體腸道內(nèi)約寄生著450種腸道微生物，它們大多具有促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，幫助人體新陳代謝，預(yù)防感染和自體免疫疾病的功能，另有一些特殊菌群甚至還能夠控制人體對(duì)癌癥治療藥物的反應(yīng)[4]。由此可見(jiàn)，腸道菌群是我們?nèi)梭w必不可少的一部分，有些研究者將其稱之為我們身體的一個(gè)“器官”[5]，在人體糞便中，這些腸道微生物的數(shù)量能高達(dá)1011～1012cfu/g[6]。人體腸道菌群的數(shù)量與種類(lèi)隨著年齡的增長(zhǎng)而改變，有研究表明，成人體內(nèi)的腸道菌群相較于嬰幼兒時(shí)期的體內(nèi)腸道菌群更具多樣性和穩(wěn)定性[7]。腸道微生物已成為人們研究膳食因子營(yíng)養(yǎng)機(jī)制的重要載體，其與膳食因子的互作效應(yīng)也成了研究熱點(diǎn)。但大部分傳統(tǒng)研究膳食與腸道微生物關(guān)系的方式是動(dòng)物試驗(yàn)，容易引發(fā)道德和倫理爭(zhēng)議，且試驗(yàn)周期長(zhǎng)，操作復(fù)雜，不利于科學(xué)試驗(yàn)的高效開(kāi)展。而研究者同時(shí)發(fā)現(xiàn)，腸道微生物體外厭氧發(fā)酵和腸道內(nèi)發(fā)酵在細(xì)菌數(shù)量、組成、多樣性和代謝產(chǎn)物等方面都相似，因此本研究采用靜態(tài)間歇式體外厭氧發(fā)酵模式，研究富含OPO的植物乳脂粉與腸道菌群的體外發(fā)酵特性。

多年監(jiān)測(cè)表明：我國(guó)青年、少年身體素質(zhì)呈持續(xù)下降趨勢(shì)[8]。青年大學(xué)生是國(guó)家的人才主力，但很大一部分大學(xué)生由于遠(yuǎn)離家庭的監(jiān)管，飲食和作息不規(guī)律，同時(shí)學(xué)習(xí)競(jìng)爭(zhēng)激烈，就業(yè)和深造壓力大，身體素質(zhì)大不如前，已經(jīng)引起社會(huì)的廣泛關(guān)注。目前，營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑結(jié)構(gòu)脂質(zhì)OPO應(yīng)用范圍相對(duì)較小，為進(jìn)一步拓寬OPO的應(yīng)用范圍，提高大學(xué)生的身體素質(zhì)，本研究以健康普通大學(xué)生的新鮮糞便為菌源，從膳食因子對(duì)腸道微生態(tài)影響的角度入手，研究不同時(shí)期（0,4,8,12,24 h）原料對(duì)腸道菌群的影響，并計(jì)算益生元指數(shù)和B/E值，測(cè)定發(fā)酵環(huán)境的pH值，為結(jié)構(gòu)脂質(zhì)OPO產(chǎn)品的進(jìn)一步推廣提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，為大學(xué)生營(yíng)養(yǎng)食品的開(kāi)發(fā)提供前期研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1樣品

植物乳脂粉，含有50%植物精煉油（含有40%OPO的棕櫚油）；4.21%蛋白質(zhì)；41.63%乳糖；3.72%水；0.44%穩(wěn)定劑；乳化劑；礦物質(zhì)；維生素和其他物質(zhì)成分。

1.1.2 培養(yǎng)基

（1）含氮基礎(chǔ)培養(yǎng)基:1L純凈水含有蛋白胨2 g，酵母粉 2 g，N aC l 0.l g，K2HPO40.04 g，M gSO4·7H2O 0.01 g，CaC l2·7H2O 0.01g，N aHCO32 g，氯化血紅素0.05 g，L-半胱氨酸0.5 g，膽汁酸鹽0.5 g，吐溫-80 2 m L，VK 10μL，0.025 g/100m L刃天青4m L。

（2）選擇性培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂用于計(jì)數(shù)總需氧菌[9]；W ilkins and Chalgren瓊脂用于計(jì)數(shù)總厭氧菌[10]；Beerens瓊脂用于計(jì)數(shù)雙歧桿菌[11]；R ogosa培養(yǎng)基用于計(jì)數(shù)乳酸桿菌[12]；EC培養(yǎng)基用于計(jì)數(shù)腸球菌[13]；Sulfite-polym yxin-m ilk瓊脂用于計(jì)數(shù)梭狀芽孢桿菌[14]；紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂用于計(jì)數(shù)腸桿菌科菌；擬桿菌礦物鹽瓊脂（自制）用于計(jì)數(shù)擬桿菌[15]。擬桿菌礦物鹽瓊脂按配方自制：葡萄糖15.0 g，磷酸二氫鉀4.0 g/L，磷酸氫二鈉2.0 g/L，硫酸銨0.5 g/L，氯化鈉9.0g/L，氯化鎂0.15 g/L，氯化鈣0.01 g/L，氯化錳0.05 g/L，氯化鈷0.05 g/L，半胱氨酸0.8 g/L，碳酸氫鈉1.5 g/L，氯高鐵血紅素0.01 g/L，VB120.005 g/L，七水合硫酸鐵0.001 g/L，萘啶酮酸0.01 g/L，萬(wàn)古霉素0.0025 g/L，瓊脂20.0 g/L。（除特殊規(guī)定外，本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑均為分析純，水為蒸餾水或相應(yīng)純凈水。）

1.2 主要試劑和儀器

稀釋液（0.9%生理鹽水）；糞便取樣器，壓舌板，一次性手套，鑷子，牛皮紙，自封袋，EP管離心管，試劑瓶（采樣工具提前滅菌，部分塑料取樣用具再用DEPC水浸泡24 h以上）；電熱恒溫水浴鍋HH-8(上海浦東物理光學(xué)儀器廠)，分析天平TP-213(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，高壓蒸氣滅菌鍋SP500(日本YAMATO)，超凈工作臺(tái)SW-CJ-2D(蘇州凈化設(shè)備有限公司)，YQX-I厭氧培養(yǎng)箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠），恒溫生化培養(yǎng)箱SPX-250BS-II，pH計(jì)Testo205(Testo AG)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品采集及準(zhǔn)備

以3個(gè)健康大學(xué)生（女，年齡20～22歲）的糞便作為發(fā)酵菌種，要求實(shí)驗(yàn)對(duì)象1個(gè)月內(nèi)未服用抗生素，且無(wú)腸胃病史。采集每位試驗(yàn)者的新鮮糞便50g于糞便取樣管中，存入-80℃冰箱備用。將3名志愿者的糞樣混合，然后將50 g混合糞樣稀釋到500 m L冷卻后的稀釋液（0.9%生理鹽水）中，加幾粒無(wú)菌玻璃珠渦旋15 s使糞便充分分散。稀釋的糞液用4層無(wú)菌紗布過(guò)濾，并將過(guò)濾得到的糞便懸浮液密封于一無(wú)菌器皿中。

1.3.2 腸道菌群富集培養(yǎng)

將上述含氮基礎(chǔ)培養(yǎng)基各配置450m L分裝于兩個(gè)試劑瓶中（標(biāo)記A組,B組），滅菌備用。在A組中加入67.5 g的植物乳脂粉作為實(shí)驗(yàn)組（根據(jù)國(guó)家食品安全標(biāo)準(zhǔn)GB1488-2012年食品營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充使用標(biāo)準(zhǔn)，嬰幼兒配方奶粉OPO的添加量為24～96 g/kg，根據(jù)奶粉沖泡的一般稀釋：4.5 g奶粉/30m L水，制備發(fā)酵液A。本研究發(fā)酵液A以50 g/kg的添加量乘以配方奶粉稀釋比，使OPO初始濃度為質(zhì)量濃度0.75%，B組為含氮基礎(chǔ)培養(yǎng)基，作為空白對(duì)照。各吸取50 m L糞便懸浮液加入發(fā)酵液A和B中，即接種量為10%，37℃厭氧發(fā)酵。

1.3.3 發(fā)酵液的分段收集及檢測(cè)

在發(fā)酵0,4,8,12,24 h時(shí)，將A組與B組分別吸取5個(gè)1m L液體分裝在含有9m L發(fā)酵液的EP管中密封，混勻后放入-80℃冰箱保存，備用。采用10倍梯度稀釋法稀釋發(fā)酵液（稀釋液為0.9%生理鹽水），選取各梯度稀釋液100μL均勻涂布8個(gè)腸道微生物指標(biāo)的不同的選擇培養(yǎng)基上，從取樣至涂布結(jié)束在2 h內(nèi)完成。涂布后總需氧菌、乳酸桿菌、腸球菌、腸桿菌科在37℃需氧培養(yǎng)24～48 h后分別計(jì)數(shù)，總厭氧菌、雙歧桿菌、擬桿菌和梭狀芽孢桿菌在37℃厭氧培養(yǎng)48～96 h分別計(jì)數(shù)。培養(yǎng)計(jì)數(shù)后菌落數(shù)在30～300的稀釋度即為該腸道菌種指標(biāo)進(jìn)行計(jì)數(shù)所需的最適稀釋度。選取各指標(biāo)的最適梯度稀釋液100μL均勻涂布于不同的選擇培養(yǎng)基上，對(duì)菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

1.3.4 益生元指數(shù)的計(jì)算

益生元指數(shù)的計(jì)算公式如下：

PI=(Bif/Total)－(Bac/Total)+(Lac/Total)－(C los/Total)

上式中，Bif是指取樣時(shí)發(fā)酵液中雙歧桿菌的數(shù)量和接種時(shí)發(fā)酵液中雙歧桿菌的數(shù)量的比值，Bac是指取樣時(shí)發(fā)酵液中擬桿菌的數(shù)量和接種時(shí)發(fā)酵液中擬桿菌的數(shù)量的比值，Lac是指取樣時(shí)發(fā)酵液中乳酸桿菌的數(shù)量和接種時(shí)發(fā)酵液中乳酸桿菌的數(shù)量的比值，C los是指取樣時(shí)發(fā)酵液中梭狀芽孢桿菌的數(shù)量和接種時(shí)發(fā)酵液中梭狀芽孢桿菌的數(shù)量的比值，Total則是指取樣時(shí)發(fā)酵液中總腸道菌的數(shù)量和接種時(shí)發(fā)酵液中總腸道菌的數(shù)量的比值。該公式是以雙歧桿菌和（或）乳酸桿菌數(shù)量的增長(zhǎng)有正面作用，而擬桿菌和（或）梭狀芽孢桿菌數(shù)量的增長(zhǎng)有負(fù)面作用為基礎(chǔ)的。

1.3.5B/E值的計(jì)算

將雙歧桿菌的數(shù)量除以腸桿菌的數(shù)量即得到B/E值，B/E＞1表示腸道菌群中雙歧桿菌的水平高于腸桿菌科的水平，B/E＜1表示腸道菌群中雙歧桿菌的水平低于腸桿菌科的水平。

1.3.6 PH值測(cè)定

本研究采用pH計(jì)Testo205(Testo AG)對(duì)樣品發(fā)酵液進(jìn)行pH值的測(cè)量。將pH計(jì)校準(zhǔn)后放入?yún)捬跖囵B(yǎng)箱，在箱內(nèi)把探頭插入裝有樣品發(fā)酵液的10m L EP管中，顯示測(cè)得的溫度和PH值，讀數(shù)每秒更新2次，AUTO HO LD閃爍直到點(diǎn)亮，讀數(shù)固定不動(dòng)后記錄讀數(shù)即為待測(cè)樣液pH值,按ON/HO LD鍵重新開(kāi)始計(jì)數(shù)，記錄三組數(shù)據(jù)。

1.4 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS14.0和O rigin6.0完成，顯著性差異（P＜0.05）通過(guò)Turkey test程序進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵過(guò)程中微生物的變化及分析

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)微生物的定量分析可知，添加有OPO的人體糞便發(fā)酵液與空白對(duì)照組相比，其總需氧菌數(shù)、總厭氧菌數(shù)、雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸球菌、擬桿菌、梭狀芽孢桿菌數(shù)和腸桿菌在發(fā)酵過(guò)程中存在顯著差異（P＜0.05）。

2.1.1 總需氧菌和總厭氧菌的生長(zhǎng)變化

由圖1不難看出，A組中總需氧菌的數(shù)量在發(fā)酵第0 h時(shí)幾乎與B組數(shù)量一致，分別是7.77 logCFU/m L和7.80 logCFU/m L，在發(fā)酵0～8 h A組與B組菌數(shù)一起增加，發(fā)酵第8 h時(shí)獲得各自生長(zhǎng)數(shù)量最大值，分別為9.12 logCFU/m L和8.60 logCFU/m L，發(fā)酵第8 h后A組、B組菌數(shù)又一起下降，到發(fā)酵第24 h時(shí)菌落生長(zhǎng)數(shù)分別為8.88 logCFU/m L和8.00 logCFU/m L，在整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中，A組中總需氧菌的數(shù)量一直顯著高于（p＜0.05）B組。由圖2可看出，A組與B組在發(fā)酵第0 h的總厭氧菌生長(zhǎng)數(shù)量分別為7.81 logCFU/m L和7.62 logCFU/m L，B組中總厭氧菌的數(shù)量在0～8h緩慢增加，在發(fā)酵到12 h時(shí)急速下降，A組總厭氧菌的生長(zhǎng)數(shù)量在0 h～4 h顯著增加（p＜0.05），雖其菌數(shù)在發(fā)酵第8 h減少為8.56 logCFU/m L，但在整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中A組的菌群數(shù)一直顯著高于（p＜0.05）B組。因此，與空白對(duì)照組比較，OPO結(jié)構(gòu)脂對(duì)總需氧菌和總厭氧菌都有增值作用，可明顯促進(jìn)總需氧菌和總厭氧菌的生長(zhǎng)繁殖速度。

圖1 發(fā)酵中總需氧菌的生長(zhǎng)變化

圖2 發(fā)酵中總厭氧菌的生長(zhǎng)變化

2.1.2 雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸球菌和擬桿菌的生長(zhǎng)變化

從圖3-圖6可以看出，A組發(fā)酵中雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸球菌和擬桿菌的生長(zhǎng)數(shù)量均顯著高于（p＜0.05）B組發(fā)酵中的生長(zhǎng)數(shù)量。A組和B組中的雙歧桿菌在發(fā)酵第oh的數(shù)量差不多，分別為6.86 logCFU/m L和6.84 logCFU/m L，0～8 h A組、B組雙歧桿菌數(shù)一起增加，到發(fā)酵第8h時(shí)達(dá)到整個(gè)發(fā)酵過(guò)程的菌數(shù)最大值，分別為8.61 logCFU/m L和7.80 logCFU/m L，第8 h后雙歧桿菌數(shù)又一起減少。A組和B組中乳酸桿菌的數(shù)量變化趨勢(shì)十分相似（增加→減少→增加→減少）。A組中腸球菌數(shù)量0～8 h顯著增加，12 h平緩下降后回升，B組中腸球菌數(shù)量不僅數(shù)量低于A組，且增長(zhǎng)趨勢(shì)起起伏伏，極不穩(wěn)定，在發(fā)酵第8 h菌數(shù)驟減，隨后又回升，在16～24 h顯著減少。A組和B組的擬桿菌數(shù)量變化趨勢(shì)在0～12h也十分相似，但在12 h后

圖3 發(fā)酵中雙歧桿菌的生長(zhǎng)變化

圖4 發(fā)酵中乳酸桿菌的生長(zhǎng)變化

圖5 發(fā)酵中腸球菌的生長(zhǎng)變化

圖6 發(fā)酵中擬桿菌的生長(zhǎng)變化

A組的菌落生長(zhǎng)量逐漸趨于平穩(wěn)，而B(niǎo)組的菌落數(shù)卻驟降。因此不難看出，OPO結(jié)構(gòu)脂的加入能增加雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸球菌和擬桿菌的生長(zhǎng)數(shù)量，且效果顯著。

2.1.3 梭狀芽孢桿菌和腸桿菌的生長(zhǎng)變化

由圖7可以看出，B組中梭狀芽孢桿菌的數(shù)量顯著高于（P＜0.05）A組，發(fā)酵第4 h后A組和B組的菌落生長(zhǎng)數(shù)分別為7.92 logcfu/m L和8.63 logcfu/m L，4 h后B組的菌落數(shù)維持在8.50 logcfu/m L，而A組中梭狀芽孢桿菌8 h之后生長(zhǎng)數(shù)量驟降，到發(fā)酵第24 h為7.25 logcfu/m L。由圖8可知，A組B組中腸桿菌在發(fā)酵0、4、8 h這三個(gè)時(shí)間段幾乎沒(méi)有生長(zhǎng)，其原因可能是人體內(nèi)腸桿菌的數(shù)量本就十分稀少，在發(fā)酵第8 h后才有腸桿菌的生長(zhǎng)，且B組中的生長(zhǎng)數(shù)量顯著高于A組。因此，從圖7～圖8可以得知，OPO結(jié)構(gòu)脂能有效抑制梭狀芽孢桿菌和腸桿菌的生長(zhǎng)數(shù)量。

圖7 發(fā)酵中梭狀芽孢桿菌的生長(zhǎng)變化

圖8 發(fā)酵中腸桿菌的生長(zhǎng)變化

2.2 發(fā)酵中益生元指數(shù)計(jì)算結(jié)果

將腸道菌群的計(jì)數(shù)值代入PI計(jì)算公式后，得出添加了OPO結(jié)構(gòu)脂的A組與未添加OPO結(jié)構(gòu)脂的B組在發(fā)酵4、8、12和24 h后的PI值見(jiàn)表1。

表1 發(fā)酵過(guò)程中4、8、12、24的益生元指數(shù)

由表1的PI計(jì)算結(jié)果可以看到，A組的PI值在培養(yǎng)到4 h時(shí)是負(fù)值-0.1022，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，從4～24 h逐漸增大，由負(fù)值逐漸上升為正值，到培養(yǎng)至24 h時(shí)PI值變?yōu)檎龜?shù)，為0.242。B組的PI值在培養(yǎng)到4 h時(shí)為負(fù)值，之后PI值增大，在12 h時(shí)PI值轉(zhuǎn)變?yōu)檎龜?shù)，為0.052，但培養(yǎng)至24 h時(shí)PI值卻又變?yōu)樨?fù)數(shù)。這些數(shù)值的變化說(shuō)明OPO結(jié)構(gòu)脂具有益生作用，并且其益生作用穩(wěn)定。

2.3 發(fā)酵中B/E值的計(jì)算結(jié)果

將腸道菌群的計(jì)數(shù)值帶入計(jì)算結(jié)果如表2所示：

由圖8可以得知在0、4、8 h這三個(gè)時(shí)間段并未檢出腸桿菌，而雙歧桿菌的生長(zhǎng)數(shù)量卻很大，因此A組和B組在這三個(gè)時(shí)間段的B/E值都遠(yuǎn)大于1。由表2的數(shù)據(jù)可以很明顯的看出本次體外發(fā)酵實(shí)驗(yàn)中加了OPO結(jié)構(gòu)脂的A組在12、24 h這兩個(gè)時(shí)間段的B/E值均大于1，且數(shù)值遠(yuǎn)大于B組。結(jié)果表明OPO結(jié)構(gòu)脂能有效抑制腸桿菌等正常菌轉(zhuǎn)變?yōu)橛泻σ蜃印⑿纬捎泻目赡苄?，并加速雙歧桿菌等有益菌的生長(zhǎng)繁殖，維持人體腸道平衡，保護(hù)人體健康。

表2 發(fā)酵液在0、4、8、12、24h的B/E值

2.4 體外發(fā)酵過(guò)程中pH值的變化

OPO體外發(fā)酵樣品pH值測(cè)定結(jié)果如表3所示。

表3 樣品體外發(fā)酵pH值

由表3可知，A組和B組的pH值都隨著發(fā)酵時(shí)間的增長(zhǎng)而降低，由中性向酸性靠近。A組和B組在0h時(shí)的pH值幾乎一致，相差不大，但到24 h時(shí)A組的pH值降為4.55，而B(niǎo)組的pH值為7.05，可以很明顯得出，在pH值降低的過(guò)程中，A組的降低速度比B組快，能夠更快地向酸性環(huán)境靠近，并且A組pH值下降差異顯著（p＜0.05），下降到8 h以后趨于平緩，維持在4.5左右，B組下降速度緩慢，差異不明顯。因此，OPO結(jié)構(gòu)脂能促進(jìn)腸道菌群發(fā)酵，使其產(chǎn)生酸性物質(zhì)，從而使人體腸道內(nèi)環(huán)境向酸性靠近。

3 討論

人體內(nèi)的腸道菌群種類(lèi)繁多，數(shù)量龐大，其生長(zhǎng)環(huán)境中存在著各種影響其生長(zhǎng)發(fā)育的因素，例如內(nèi)在因素：人體的基因組[16]、新陳代謝[17]、性別[18]、種族[18]、免疫系統(tǒng)[19]等；外在因素：地域[20]、飲食習(xí)慣[21]等。腸道菌群中有些是厭氧菌，如擬桿菌、梭狀芽孢桿菌和雙歧桿菌等，有些是兼性厭氧菌如乳酸桿菌、腸球菌和腸桿菌等。

腸道菌群對(duì)維持人體內(nèi)環(huán)境，加速新陳代謝具有十分重要的主導(dǎo)地位，不同的腸道菌群對(duì)生長(zhǎng)壞境的要求也不盡相同。例如雙歧桿菌，作為一種人體內(nèi)普遍存在的、與人體健康密切相關(guān)的腸道有益菌，它不僅可以產(chǎn)生一種有機(jī)酸來(lái)抑制非有益菌的生長(zhǎng)，還能夠維持人體內(nèi)腸道菌群的平衡，促進(jìn)菌群新成代謝，幫助腸道蠕動(dòng)。但隨著人類(lèi)年齡的增長(zhǎng)，腸道內(nèi)環(huán)境的改變，雙歧桿菌的數(shù)量隨之減少，已有研究者證明，一個(gè)成年人腸道內(nèi)的雙歧桿菌數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于其嬰幼兒時(shí)期的腸道內(nèi)雙歧桿菌數(shù)量，僅僅只占其體內(nèi)細(xì)菌總數(shù)的3%左右[22]。乳酸桿菌也是一種人體內(nèi)普遍存在的厭氧菌,M onique Haarman等[23]在其2006年的研究報(bào)告中指出，乳酸桿菌是一種幫助人體抑制疫病的有益菌，它能有效抑制腹瀉和過(guò)敏性疾病等的發(fā)生。為探尋OPO結(jié)構(gòu)脂對(duì)人體內(nèi)不同腸道微生物生長(zhǎng)發(fā)育的影響程度，本研究通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)獲得八種腸道微生物最適生長(zhǎng)稀釋度后，對(duì)其進(jìn)行增殖培養(yǎng)和數(shù)據(jù)分析。對(duì)照實(shí)驗(yàn)表明，整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中總需氧菌、總厭氧菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸球菌、擬桿菌這6個(gè)指標(biāo)，在加了OPO結(jié)構(gòu)脂后發(fā)酵液稀釋倍數(shù)都高于空白對(duì)照組。由此可知，OPO結(jié)構(gòu)脂可以增加大學(xué)生體內(nèi)腸道菌群的生長(zhǎng)數(shù)量，具有維持腸道菌群平衡、增強(qiáng)人體免疫力、預(yù)防疾病的功能。

Palfram an等人[24]在2003年首次提出益生元指數(shù)的概念，考慮到要維持不同腸道菌群間的平衡和取樣接種時(shí)帶來(lái)的誤差等影響因素，他們認(rèn)為可以通過(guò)計(jì)算益生元指數(shù)來(lái)衡量益生元的作用，且整個(gè)過(guò)程可以在體外進(jìn)行。B/E值是指腸道內(nèi)雙歧桿菌和腸桿菌數(shù)量的比值，由雙歧桿菌的數(shù)量和相對(duì)應(yīng)的腸桿菌科的數(shù)值相比得到。最早是由荷蘭學(xué)者Van DerW aaij等人[25]提出。雙歧桿菌是腸道菌群有益菌的典型代表，而腸桿菌則被認(rèn)為是腸道中正常菌群向不利于機(jī)體健康的方向轉(zhuǎn)變的重要因子，也可以作為潛在有害菌的代表，兩者的比值可以從正反對(duì)比評(píng)價(jià)腸道菌群結(jié)構(gòu)的狀況。本研究發(fā)現(xiàn)，OPO結(jié)構(gòu)脂對(duì)大學(xué)生腸道菌群具有穩(wěn)定的益生作用。與此同時(shí)，OPO結(jié)構(gòu)脂還能夠有效抑制腸桿菌等正常菌轉(zhuǎn)變?yōu)橛泻σ蜃?，降低有害菌形成的可能性，并且加速雙歧桿菌等有益菌的生長(zhǎng)繁殖，維護(hù)大學(xué)生機(jī)體健康。

有研究表明，擬桿菌是人體腸道內(nèi)占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)的一種厭氧菌，無(wú)論是其在人體腸道內(nèi)的種類(lèi)還是數(shù)量都非常龐大。曾紅根等[26]在2011年以動(dòng)物為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，模擬出了擬桿菌微生態(tài)系統(tǒng),通過(guò)該系統(tǒng)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行飼養(yǎng)，研究結(jié)果表明,在擬桿菌微生態(tài)系統(tǒng)中生長(zhǎng)發(fā)育的動(dòng)物腸道內(nèi)PH值比在自然環(huán)境中生長(zhǎng)發(fā)育的動(dòng)物更低，呈現(xiàn)出一種酸性狀態(tài)，且在這種擬桿菌微生態(tài)系統(tǒng)中生長(zhǎng)的動(dòng)物能產(chǎn)生更多免疫抗體，更具有抵抗疾病的免疫力。乳酸桿菌可以作用于人體內(nèi)的二氧化碳，使之發(fā)酵形成乳酸，從而降低腸道內(nèi)的pH值，形成一個(gè)酸性環(huán)境，不僅可以幫助人體消化吸收，還能夠阻止腸道內(nèi)某些有害菌的生長(zhǎng)繁殖，降低其生存力,以免對(duì)人體新陳代謝造成阻礙，進(jìn)而改善人體腸道內(nèi)環(huán)境，促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，降低疾病的發(fā)生率[27]，并減少人體腸道中潛在致癌物的形成數(shù)量[28-29]。通過(guò)計(jì)算PI值與B/E值，本研究更能確定OPO結(jié)構(gòu)脂能增加

腸道內(nèi)酸性物質(zhì)的產(chǎn)生，并具有促進(jìn)腸道有益菌群生長(zhǎng)、增強(qiáng)腸道的消化吸收等功能，保護(hù)人體健康。

4 結(jié)論

上述結(jié)果表明，以O(shè)PO結(jié)構(gòu)脂作為樣品，通過(guò)體外發(fā)酵，可以得知OPO對(duì)大學(xué)生體內(nèi)腸道菌群有以下作用：有效抑制正常菌轉(zhuǎn)變?yōu)橛泻σ蜃?，降低有害菌形成的可能性，加速有益菌的生長(zhǎng)速度，幫助腸道蠕動(dòng)，促進(jìn)機(jī)體新陳代謝。OPO結(jié)構(gòu)脂還能協(xié)助益生菌產(chǎn)生酸性物質(zhì)，如乙酸等，降低腸道pH，從而抑制腐敗菌的增殖，增強(qiáng)大學(xué)生對(duì)外界干擾因素的抵抗力，保護(hù)大學(xué)生機(jī)體健康。本研究著重于比較OPO體外發(fā)酵過(guò)程中微生物的變化情況，并在此基礎(chǔ)上分析OPO結(jié)構(gòu)脂與腸道菌群的相關(guān)性和環(huán)境對(duì)其體外發(fā)酵的影響，為以后OPO結(jié)構(gòu)脂的研究提供新思路。

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