珠江口海域3種重要有害藻類的溶血毒性研究

丁西飛，王彥霏，章群，徐寧

暨南大學生態(tài)學系，廣州 510632

近年來，有害藻華(harmful algal bloom，HAB)肆虐于世界各地沿岸海域，其中有毒藻華的發(fā)生頻率明顯增加，分布范圍不斷擴大，不僅嚴重破壞海洋生態(tài)平衡、造成漁業(yè)經濟損失，甚至危害人類健康[1]。珠江口是我國重要的水產增養(yǎng)殖區(qū)和漁場，如萬山漁場、珠江口漁場和擔桿-大星針漁場，同時還是重要的濱海旅游區(qū)，對我國沿海地區(qū)經濟發(fā)展有重要意義[2]。然而，珠江口也是我國有害藻華高發(fā)海域之一，其赤潮發(fā)生數占南海赤潮發(fā)生總數的77%[1]。1999年珠江口海域已知的赤潮種類就已經高達98種，并且多種藻類可能導致魚類甚至人類中毒[2]。研究表明，近年來珠江口的年度赤潮累積總時間和累積總面積呈波動上升趨勢，赤潮原因種由原先的硅藻、原生動物演變成甲藻、定鞭藻等鞭毛藻，且有毒赤潮發(fā)生頻率呈上升趨勢[3]。1998年3月—4月，米氏凱倫藻發(fā)生有史以來最大規(guī)模的有毒米氏凱倫藻赤潮，造成大批魚類死亡，直接經濟損失達3.5億元[4]；球形棕囊藻于1997年10月—1998年2月在珠江口首次爆發(fā)[5]以來，1999年8—9月、2004年1月、2005年1月和3—5月、2006年2月均出現過大規(guī)模爆發(fā)，赤潮面積高達1 000 km2，持續(xù)時間長達3個多月，對海水養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴重的影響[6-8]；2006年3月、10—11月珠江口珠海海域先后發(fā)生3次雙胞旋溝藻赤潮，造成該海域部分網箱養(yǎng)殖魚類死亡[9]；2009年珠江口再次爆發(fā)雙胞旋溝藻赤潮，赤潮面積達300 km2[10]。許多有毒藻類在密度較低的條件下就可能對水生生物以及海洋生態(tài)系統(tǒng)造成嚴重危害，但是目前由于分離、培養(yǎng)的困難，我們對于珠江口海域有毒藻類的種類、分布及其毒性特征仍不明確。

溶血毒素是有毒藻赤潮導致大量水生生物死亡的重要原因之一，其成分和結構非常復雜，現在還不十分清楚，目前只有少量溶血毒素已得知其結構，主要為糖脂類、糖甙類和不飽和多脂肪酸類化合物，也有少數蛋白質和肽類物質[11]。不同藻分泌的溶血毒素有明顯差別。溶血毒素被認為是一種洋地黃皂甙類似物，可能改變水生動物細胞膜滲透性，使其成為陽離子選擇性滲透，從而導致水生生物中鰓呼吸動物，如魚、軟體動物等的腮失去細胞選擇滲透性而導致死亡[12]。有研究認為，溶血毒素作用于魚類的鰓組織，導致鰓組織損傷引起氧氣交換不順暢可能是引起魚類死亡的主要原因[11, 13]。溶血毒素的檢測主要是血紅細胞溶解測定法(Erythrocyte Lysis Assay，ELA)，其原理是基于溶血毒素作用于血紅細胞使之溶解破裂，從而通過吸光度的變化來判斷溶血毒素是否存在，并與已知濃度的溶血性物質(如洋地黃皂甙)進行比對以確定其溶血能力[14-15]。

本文以小普林藻為實驗材料，對溶血毒素的測定方法進行優(yōu)化，旨在為海洋微藻溶血毒素測定建立一套靈敏的標準化分析方法。同時，利用兔紅細胞法分析珠江口海域分離和鑒定出的小普林藻(Prymnesiumparvum)、劇毒卡爾藻(Karlodiniumveneficum)和紅色赤潮藻(Akashiwosanguinea)的溶血毒性特征及變化規(guī)律，為珠江口海域有害藻華的防災減災提供科學依據。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 藻種與培養(yǎng)

小普林藻JX12、劇毒卡爾藻JX24、紅色赤潮藻JX14、紅色赤潮藻AS2均由暨南大學水生生物研究所藻類生態(tài)學實驗室提供。其中，小普林藻2009年11月采自珠海野貍島，由秦俊蓮分離純化。劇毒卡爾藻2011年9月采自珠海野貍島，由劉靜雅分離純化。紅色赤潮藻JX14于2011年4月采自大亞灣澳頭，由王萌分離純化。另外，紅色赤潮藻AS2由唐贏中博士分離自美國切薩皮克灣。采用f/2培養(yǎng)基[16]，基礎介質為人工海水(鹽度為30.5)，置于22 ℃，光照強度為100 μmol·m-2·s-1，光暗比為12 L：12 D[17]的人工氣候培養(yǎng)箱擴大培養(yǎng)。

1.2 溶血活性標準曲線繪制1.2.1 實驗溶液配制

檸檬酸等滲緩沖液：稱取NaCl 3.412 g，檸檬酸鈉8.672 g，葡萄糖18.072 g，溶于400 mL蒸餾水中，用檸檬酸調節(jié)pH至7.0后定容至1 000 mL備用。

0.5%兔血紅細胞溶液：白兔來自暨南大學動物實驗中心，取兔血10 mL于離心管當中，350×g離心5 min，棄去血清和上層白細胞，紅細胞用pH 7的檸檬酸等滲緩沖液反復沖洗3次，再用檸檬酸等滲緩沖液把兔血稀釋成濃度為0.5%(體積比)的血紅細胞溶液，當天使用。

全溶血溶液：0.5%的兔血紅細胞溶液，加1% (VN) Trition X-100，混勻，使血細胞完全破碎，作為全溶血溶液。

實驗用NaCl為分析純，購自廣州化學試劑廠，檸檬酸鈉和葡萄糖為優(yōu)級純，購自美國Sigma-Aldrich GmbH，1% (VN) Trition X-100 購自廣州譽騰生物公司。

1.2.2 標準曲線繪制

參照彭穎慧等[18]采用的洋地黃皂苷溶血活性測定方法。配制10.4 μg·mL-1洋地黃皂甙(digitonin)(購自美國Sigma-Aldrich GmbH)溶液1 L，向6個試管中分別加入4.8 mL的經處理的新鮮兔血紅細胞，加入洋地黃皂甙水溶液，使6個反應管中的洋地黃皂甙的濃度梯度分別為0.52、0.78、1.04、1.30、1.56、1.86 μg·mL-1，將各反應體系用等(滲鹽溶液(pH = 7)補足至6 mL。另在3個試管中加入4.8 mL經處理的兔血紅細胞，并用檸檬酸等滲緩沖液補足至6 mL，作為負對照。

于37 ℃水浴避光反應30 min后，800×g離心10 min，將上清液用紫外可見分光光度計(Gold spectrumlab 53)測定其溶血吸光度，每個濃度3個平行。

根據公式H% = (As-A0)/(A100-A0) (公式1)計算溶血百分數。其中，As為樣品吸光度值，A0為零溶血吸光度值，A100為全溶血吸光度值。

以未加毒素的試管為負對照，以全溶血溶液為正對照。以洋地黃皂甙水溶液的終濃度為橫坐標，以其溶血百分數為縱坐標作圖。

1.3 溶血毒素的提取

采用超聲波破碎方式提取藻細胞溶血毒素，超聲波破碎均在冰浴條件下處理，藻細胞溶液維持4 ℃以下[18]。

藻細胞以10 000×g分批離心10 min，置于50 mL氯仿：甲醇：水 = 13:7:5(體積比)的混合溶液中，在4 ℃、60 W下進行細胞破碎30 min后并鏡檢(超聲波細胞粉碎儀 JYD-900L，上海之信儀器有限公司)，破碎完畢后于分液漏斗中靜置，待完全分層后取下層溶液，于旋轉蒸發(fā)儀中(溫度設置為60 ℃)真空干燥，真空干燥后溶解于適量甲醇(提取小普林藻毒素時甲醇的體積為培養(yǎng)液的4/100、劇毒卡爾藻為2/100、紅色赤潮藻為2/100)中，即得到溶血毒素。置于-18 ℃下貯存?zhèn)溆谩?/p>

實驗用氯仿和甲醇均為色譜純，購自德國CNW Technologies GmbH。

1.4 小普林藻溶血毒性測定方法的優(yōu)化

取對數期小普林藻藻液1 L，密度為73.606×107cell·L-1，按照1.3所述方法提取溶血毒素，備用。

1.4.1 不同反應溫度下的溶血活性

向試管中加入900 μL pH 7的檸檬酸等滲緩沖液和0.5%的紅細胞溶液4 800 μL，再加入備用藻毒素溶液300 μL (300 μL甲醇作為對照)，于4 ℃、20 ℃、37 ℃、50 ℃下避光反應，反應時間共60 min，每個溫度設3個平行。每隔10 min取反應液于800×g離心10 min，將上清液用紫外可見分光光度計(Gold spectrumlab 53)測定溶血吸光度。根據公式1計算溶血百分數。以未加毒素的試管為負對照，以全溶血溶液為正對照。以洋地黃皂甙水溶液的終濃度為橫坐標，以其溶血百分數為縱坐標作圖。

1.4.2 不同pH條件下的溶血活性

向試管中加入pH分別為5、6、7、8的檸檬酸等滲緩沖液900 μL和 0.5%的紅細胞溶液4 800 μL，再加入備用藻毒素溶液300 μL (300 μL甲醇作為對照)，于37 ℃避光反應，反應時間共60 min，每個pH設3個平行。每隔10 min檢測反應液吸光度值，檢測方法與溶血百分數計算方法同1.4.1。

1.5 小普林藻在不同生長期的溶血毒性特征

分別取小普林藻對數生長期(第8天)、穩(wěn)定期(第16天)和衰亡期(第28天)的藻液各1 L，細胞密度分別為73.606、142.839、168.849(×107cells·L-1)時進行溶血毒素的提取，并于37 ℃、pH=8、反應60 min條件下測定溶血毒性。每隔10 min檢測反應液吸光度值，檢測方法同1.4.1。

1.6 3種重要赤潮藻溶血毒性的比較

分別取對數期的小普林藻、劇毒卡爾藻、紅色赤潮藻JX14和AS2株各1 L，細胞密度依次為73.606、38.857、0.427、0.759(×107cells·L-1)，按照1.3所述方法提取藻毒素，并于37 ℃、pH=8、反應60 min條件下測定溶血毒性。每隔10 min檢測反應液吸光度值，檢測方法同1.4.1。

1.7 數據處理

使用Origin 7.5和SPSS 13.0軟件進行數據統(tǒng)計分析。

2 結果(Results)

2.1 溶血活性標準曲線

圖1是以洋地黃皂甙為標準物所繪制的標準曲線，可得到線性回歸方程為：

y= 0.519x- 0.154 (R2= 0.953，P< 0.05)

(2)

1個溶血單位(Hemolytic Unit，HU)的定義為：在6 mL的上述反應體系下，37 ℃反應30 min使兔血紅細胞溶液溶解50%所需毒素的量。根據公式2計算出在溶血百分數為50%時，洋地黃皂甙濃度約為1.26 μg·mL-1。

參考文獻[18]給出公式計算溶血活性，并對其進行優(yōu)化規(guī)范：

(3)

其中，HU為溶血活性(HU·L-1)；Aw為樣品溶血后所測得的吸光值；A0為空白對照的吸光值；Ac為全溶血的吸光值；EC50為公式2中y= 50時的x值，即當溶血百分比為50%時的洋地黃皂甙濃度(μg·mL-1)；a為公式2中擬合直線的斜率；b為公式2中擬合直線的截距；m為提取毒素蒸發(fā)步驟后，溶解毒素的甲醇與培養(yǎng)基的體積比；v為試驗時加入反應體系的毒素體積(L)；n為實際反應體系的體積與1 mL的比值。

根據公式3計算出，小普林藻的溶血活性約為304.01 HU·L-1，單個細胞的溶血活性約為2.07×10-7HU·cell-1。

2.2 小普林藻溶血活性測定方法的優(yōu)化

不同pH條件下小普林藻溶血活性有很大差異(圖2A)，pH=8條件下的溶血百分數高達20%，顯著高于pH= 5和pH= 7條件下的溶血百分數(P< 0.01)，與pH= 6條件處理組無顯著差異(P> 0.05)，且每個實驗組的溶血百分數都隨時間延長而增強，并在50 min開始保持穩(wěn)定。小普林藻溶血活性隨溫度升高逐漸增強(圖2B)，50 ℃下測得的溶血百分數可達到約50%，顯著高于4 ℃、20 ℃、37 ℃下的溶血百分數(P< 0.01)，且所有實驗組的溶血活性呈現隨時間延長而上升的趨勢，均在40 min～50 min時達到穩(wěn)定狀態(tài)。

圖1 溶血活性標準曲線Fig. 1 Standard curve of hemolysis by digitonin as an equivalent

在37 ℃、pH= 8、反應50 min條件下，小普林藻單位體積溶血活性約為417.38 HU·L-1, 單個細胞的溶血活性約為5.67×10-7HU·cell-1。

2.3 不同生長期小普林藻的溶血毒性特征

小普林藻不同生長期的溶血毒性有很大差異，在整個反應過程中，單位藻細胞溶血活性關系為對數期>衰亡期>穩(wěn)定期，單位體積溶血活性的關系為衰亡期>對數期>穩(wěn)定期。37 ℃、pH=8、反應50 min條件下，小普林藻對數期、穩(wěn)定期、衰亡期的單位細胞溶血活性分別為5.67×10-7、2.32×10-7和3.40×10-7HU·cell-1；單位體積溶血活性分別為417.38、332.70和574.27 HU·L-1。

2.4 4株有害藻類溶血毒性的比較

紅色赤潮藻JX14、小普林藻及劇毒卡爾藻的溶血毒性特征曲線表明，不同藻種溶血毒性有顯著差異(P< 0.05)，單位細胞溶血活性及單位體積溶血活性都有較大差異(圖4)。小普林藻和紅色赤潮藻JX14溶血活性隨反應時間延長明顯增大，但劇毒卡爾藻溶血活性隨反應時間延長無明顯變化(圖4)。整個實驗過程中，紅色赤潮藻JX14單位體積溶血活性大于或等于小普林藻，二者無顯著性差異(P> 0.05，圖4A)，而單位細胞溶血活性顯著高于小普林藻和劇毒卡爾藻(P< 0.05，圖4B)。圖5是紅色赤潮藻中國株JX14和美國株AS2溶血毒性特征曲線，可以看出，無論是單位細胞或是單位體積溶血活性，JX14均明顯高于美國株AS2，且JX14株單位細胞溶血活性高達1 050 HU·cell-1，顯著高于AS2株(P< 0.05，圖5B)。

圖2 小普林藻在不同反應溫度和pH條件下的溶血活性Fig. 2 Effects of temperature and pH on hemolysis caused by Prymnesium parvum

圖3 小普林藻不同生長期溶血毒性的變化特征Fig. 3 Hemolytic activity change tendency of Prymnesium parvum during different growth phase

37 ℃、pH=8、反應50 min條件下，小普林藻、劇毒卡爾藻、紅色赤潮藻JX14和AS2株的單位細胞溶血活性分別為5.67×10-7、2.58×10-7、976.20×10-7和429.52×10-7HU·cell-1；單位體積溶血活性分別為417.38、100.08、417.01和326.08 HU·L-1。

3 討論(Discussion)

3.1 海洋微藻溶血活性測定方法的優(yōu)化

產生溶血毒素的微藻有很多種，不同藻類的溶血毒素成分不盡相同，其溶血活性反應特征也差異很大[19]。小普林藻是一種重要的有毒赤潮藻，其產生的溶血毒素被認為是導致大量水生物死亡的原因[20]。本研究利用容易獲取的兔血細胞為材料進行溶血活性測試。方法簡便易行且靈敏度高，可用于有毒赤潮藻的溶血活性檢測。從本研究所測得的標準曲線可以得出，在溶血百分數為50%時，洋地黃皂甙濃度約為1.26 μg·mL-1，這與彭喜春等[13]、崔偉民等[14]采用兔血紅細胞、何家菀等[21]采用牛血紅細胞所做結果(1.3 μg·mL-1)相似，大于江濤等[22]及Kuroda等[23]的結果。

本研究顯示，在4～50 ℃范圍內，小普林藻溶血活性隨溫度升高及實驗時間延長而增大，并在反應50 min時趨于穩(wěn)定。溫度是維持哺乳動物紅細胞體積穩(wěn)定的重要條件，維持細胞體積穩(wěn)定是細胞正常發(fā)揮其功能的基礎[24-25]，溫度為37 ℃時紅細胞的形狀和結構最穩(wěn)定；37 ℃之后，隨溫度升高，紅細胞的形狀和結構越不穩(wěn)定[26]，越容易受外界條件影響而破裂。因此，本研究結果不能確定是由于50 ℃對小普林藻溶血毒性起促進作用而導致紅細胞破裂，還是因為50 ℃遠高于哺乳動物正常體溫而使紅細胞變形本身較易破裂。因此，可以認為37 ℃為測試小普林藻溶血活性的最佳實驗溫度。Ulitzer和Shilo[27]研究表明，小普林藻的溶血活性在10～37 ℃下隨溫度升高、時間延長而增強；崔偉民等[14]報道的米氏凱倫藻在4 ℃、20 ℃和37 ℃時，溶血活性隨溫度升高、時間的延長而逐漸增加，這均與本研究結果相一致。另外，宋秀凱等[28]報道的多變魚腥藻(AnabaenavariabilisOLS1)和Emura等[29]報道的泰勒亞歷山大藻(Alexandriumtaylori)所產生的毒素的溶血活性都在4 ℃、18 ℃、37 ℃下隨溫度的升高而升高，且18 ℃、37 ℃時，藻溶血活性隨時間延長而增大，也與本實驗結果一致。但在4 ℃時，多變魚腥藻及泰勒亞歷山大藻的溶血活性基本完全被抑制，這與本實驗4 ℃條件下結果有所不同，說明不同藻種的溶血活性對溫度的反應趨勢相近，溶血活性都隨實驗溫度的升高及實驗時間的延長而增大，但對低溫的反應卻不盡相同。

圖4 小普林藻、劇毒卡爾藻及紅色赤潮藻的溶血毒性特征Fig. 4 Hemolytic activity of Prymnesium parvum, Karlodinium veneficum and Akashiwo sanguinea

圖5 2株紅色赤潮藻的溶血毒性比較Fig. 5 Hemolytic activity of two strains of Akashiwo sanguinea

Ulitzer和Shilo[27]認為pH對于溶血毒性的影響可能是由于pH的改變可以改變毒素的電離狀態(tài)，增加或者減少它的疏水性及其穿過細胞膜的能力。本研究表明，小普林藻毒素在pH 5～8條件下，pH 8時溶血活性有最大值，在整個實驗過程中，溶血活性隨實驗時間的延長而增大，且在50 min趨于穩(wěn)定。類似的，Valenti等[30]對小普林藻卡特株(P.parvum)的研究表明，pH是決定小普林藻對魚類毒性的重要因素，并且小普林藻暴露于pH= 8.5的環(huán)境中時對于呆鰷魚(Pimephalespromelas)的毒性明顯高于pH=7.5及pH=6.5時的毒性；Bertin等[31]的研究也表明，小普林藻的溶血毒性在pH=8.5時最高。這都與本實驗結果相一致，說明相同藻種不同藻株毒素的結構、性質可能較為相似，且小普林藻溶血毒性可能在弱堿性的條件下最高。而葛蔚等[32]認為赤潮異彎藻(Heterosigmaakashiwo)的溶血活性在pH=6和pH=7時最高，超過75%，遠大于在pH=5和pH=8時的溶血活性，赤潮異彎藻表現出在中性偏酸的環(huán)境中溶血活性最高。Malovrh等[33]報道的小定鞭藻在pH < 5時表現出溶血活性；何家菀等[21]認為，小定鞭藻的溶血活性在pH為7～9時隨pH的增大而減??；彭喜春[34]的研究表明，球形棕囊藻在pH 7時溶血活性最強。導致這一現象的主要原因可能是藻毒素種類、親水端結構及理化性質因藻種藻株的不同而存在較大的差異。

3.2 小普林藻不同生長期的溶血毒性特征

藻類毒素的合成與其生長周期有著密切的關系，其合成機制十分復雜。本研究結果顯示，小普林藻對數期單位藻細胞溶血活性最強、衰亡期次之。需要特別指出的是，本研究采用懸浮藻細胞測定溶血活性，并不包含培養(yǎng)液部分。而藻細胞死亡、裂解后毒素會釋放至培養(yǎng)液中，因此培養(yǎng)液中(尤其是衰亡期)會逐漸積累藻毒素。換言之，包含培養(yǎng)液測定得出的溶血毒素含量會顯著高于懸浮藻細胞測定的結果。類似的，海洋卡盾藻CMHK、COHK、米氏凱倫藻KMEC和赤潮異灣藻HAEC均是在對數期溶血活性最高[35]。江天久等[36]也證實亞歷山大藻在對數期內單個藻細胞的石房蛤毒素(STX)含量最高，在穩(wěn)定期顯著下降。另有研究發(fā)現，小定鞭藻PPEC的藻細胞濾液產生的溶血毒素峰值出現在穩(wěn)定期[35]，強壯前溝藻和卵圓卡盾藻的溶血活性在衰亡期達到最高值，對數期藻細胞的溶血活性其次[37-38]。Emura等[29]研究發(fā)現泰勒亞歷山大藻(A.taylori)自指數期開始分泌毒素，在衰亡期仍保持較高的溶血活性。這些研究表明不同藻種的溶血活性在不同生長期的變化趨勢是不盡相同的。Yasumoto等[39]研究認為，藻類毒素的產生可能與某些藻類的自我保護機制有關，隨著水體中營養(yǎng)元素不斷被消耗，藻類在穩(wěn)定期或衰亡期合成一些能抑制其他競爭生物生長繁殖的次生代謝產物，從而使產毒藻在競爭中處于優(yōu)勢地位。

3.3 不同有害藻類溶血毒性的比較

劇毒卡爾藻曾在美國切薩皮克灣、馬里蘭州海灣和澳大利亞天鵝坎寧河口等多處爆發(fā)過大規(guī)模赤潮，造成了嚴重的死魚事件，其原因則是該藻釋放溶血毒素損傷魚鰓導致魚類窒息而死[40]。周成旭等[41]也研究發(fā)現分離自我國東海海區(qū)的劇毒卡爾藻具有顯著的溶血活性；小普林藻為全球廣布種，在歐洲、澳大利亞、摩洛哥和以色列、美國等國家和地區(qū)的沿海和內陸水體頻繁形成有毒藻華，引發(fā)大量魚類死亡[42]，帶來嚴重的經濟損失。1986年，陳椒芬和曾呈奎[43]首次報道小普林藻在我國的出現；何家菀等[21]確認小定鞭藻含有引起魚類死亡的魚毒素以及引起哺乳動物等紅血球細胞溶解的溶血毒素。紅色赤潮藻赤潮在煙臺[44]和廈門[45]均有發(fā)生，藻類的大量繁殖影響了魚、蝦、貝類的生長，特別是導致了鮑魚幼蟲的死亡率升高對當地的海產養(yǎng)殖業(yè)有巨大的影響，同時給人們的生活帶來不便。但目前對于紅色赤潮藻是否是由于產生毒素而導致水生生物死亡還存在爭議。本研究通過對分離自珠江口的紅色赤潮藻、小普林藻和劇毒卡爾藻進行溶血特征研究，發(fā)現3種藻均檢測出較強的溶血毒性。紅色赤潮藻單位藻細胞的溶血活性為976.19×10-7HU·cell-1，顯著高于小普林藻和劇毒卡爾藻，這可能是由于紅色赤潮藻的細胞體積遠遠大于小普林藻和劇毒卡爾藻。紅色赤潮藻單位體積溶血活性為417.01 HU·L-1，也遠高于米氏凱倫藻64.69 HU·L-1[14]和球形棕囊藻21 HU·L-1[13]。這是首次在實驗室內確認紅色赤潮藻具有較高的溶血活性。此外，來源不同的2株紅色赤潮藻溶血活性具有顯著差異，中國株JX14無論是單位體積或是單位細胞的溶血活性都高于美國株AS2。類似的，周成旭等[46]研究發(fā)現赤潮異彎藻的2個品系H1和H2對鯽魚紅細胞的溶血活性有明顯差異，H2品系的去藻上清液溶血活性可達100%，H1品系溶血活性僅為60%。這表明同一藻種的不同株系可能因環(huán)境的不同，其溶血毒性也會存在較大差異。珠江口地處熱帶、亞熱帶，氣候溫和，物種豐富，浮游生物種類繁多，浮游植物會受到更多的攝食和競爭威脅。因此，藻類在較大的環(huán)境壓力下可能會通過增加自身毒性的方式來抵御外界的捕食，或者通過釋放溶血毒素從而獲取更多營養(yǎng)并形成競爭優(yōu)勢。

有害藻華往往伴隨著大量的水生生物死亡現象，其溶血毒素往往是重要原因之一。珠江口是我國有害藻華高發(fā)海域之一，1998年珠江口海域曾爆發(fā)嚴重的米氏凱倫藻赤潮和紅色赤潮藻赤潮，對當地海水養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴重經濟損失[14, 47]。王朝暉等[48]發(fā)現，米氏凱倫藻可能會分泌一種溶血毒性或細胞毒性脂類，損傷魚鰓組織造成壞死從而引發(fā)魚類死亡。Xu等[49]研究表明，紅色赤潮藻對多種水生生物(對蝦、鯔魚)都有毒害作用。近年來珠江口地區(qū)多次爆發(fā)紅色赤潮藻赤潮，并伴隨大量死魚現象，雖然目前珠江口海域尚未報道過小普林藻和劇毒卡爾藻赤潮的發(fā)生，但是這2種赤潮在美洲、澳洲、歐洲等其他地區(qū)常有發(fā)生[42, 50]。本研究對從珠江口海域分離的小普林藻、劇毒卡爾藻、紅色赤潮藻進行溶血毒性分析，發(fā)現它們均具有顯著的溶血毒性，并且分離自珠江口的紅色赤潮藻藻株溶血毒性顯著高于美國株。因此，鑒于其強烈的致害作用，應當加強對這幾種重要赤潮藻溶血毒性的關注及深入研究，這對于了解和監(jiān)測珠江口赤潮災害有十分重要的意義。

通訊作者簡介：徐寧(1971-)，女，研究員，碩士生導師，主要從事藻類生理生態(tài)方面的研究，發(fā)表各類論文40余篇。

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