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    超聲協(xié)同誘導(dǎo)劑對(duì)枯草芽孢桿菌芽孢致死的作用

    2018-06-19 09:11:30史智佳
    食品科學(xué) 2018年11期
    關(guān)鍵詞:肌苷誘導(dǎo)劑丙氨酸

    陶 瑞,史智佳*,貢 慧,楊 震,劉 夢(mèng)

    (中國(guó)肉類(lèi)食品綜合研究中心,北京食品科學(xué)研究院,北京 100068)

    殺菌是保障食品質(zhì)量安全、延長(zhǎng)貨架期、維護(hù)市場(chǎng)穩(wěn)定的重要手段。21世紀(jì)以來(lái),隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)的發(fā)展,人們對(duì)食品安全的要求越來(lái)越高,綠色、安全、有效的殺菌工藝成為食品工業(yè)發(fā)展的重要方向之一[1]。根據(jù)作用方式不同,殺菌可以分為化學(xué)殺菌和物理殺菌兩種,化學(xué)殺菌主要采用山梨酸、苯甲酸、亞硝酸鹽等抑菌劑或殺菌劑,雖然效果好,卻容易對(duì)消費(fèi)者造成急性或慢性的潛在危害。物理殺菌又分為熱殺菌和非熱殺菌,前者主要采用65~120 ℃溫度處理殺死細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)體,在食品產(chǎn)業(yè)中應(yīng)用廣泛[2-3],但是過(guò)高的溫度可能會(huì)對(duì)食品品質(zhì)和風(fēng)味造成影響;后者則主要采用輻照、微波、超聲波、高密度二氧化碳等方法使細(xì)胞破裂或蛋白質(zhì)變性,達(dá)到殺菌的目的,具有方便快捷、安全無(wú)污染等特點(diǎn),是目前食品殺菌的研究重點(diǎn)[4]。

    化學(xué)和非熱物理殺菌都可以實(shí)現(xiàn)永久性滅活食品中細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)體和繁殖體,但對(duì)抗逆性極強(qiáng)的芽孢則效果較差。芽孢是細(xì)菌生長(zhǎng)發(fā)育后期為應(yīng)對(duì)惡劣生存環(huán)境而形成的一種休眠體,具有極強(qiáng)的抗熱(營(yíng)養(yǎng)體的104倍)、抗輻射(營(yíng)養(yǎng)體的103倍)和抗酸堿等能力[5-6]。普通方法無(wú)法完全殺滅芽孢,不利條件消除后其可重新成為營(yíng)養(yǎng)體,這是導(dǎo)致非高溫滅菌食品腐敗的主要原因。因此,如何有效殺滅細(xì)菌芽孢是食品保質(zhì)保鮮的重要課題。已有研究表明,芽孢萌發(fā)后其抗性能力立即消失,可被常規(guī)手段殺滅,因此,促進(jìn)芽孢萌發(fā),降低抗逆性是目前殺滅芽孢、保障食品安全的有效途徑[7]。超聲作為一種非熱殺菌技術(shù),具有能耗低、食品品質(zhì)損傷小、綠色友好等優(yōu)點(diǎn),是近年來(lái)快速發(fā)展的殺菌技術(shù)之一。它主要是借助超聲過(guò)程中的空化效應(yīng)[8],使受體某一區(qū)域形成局部負(fù)壓區(qū),并產(chǎn)生空穴或氣泡,當(dāng)這些空穴或氣泡突然閉合時(shí)產(chǎn)生激波,在局部微小區(qū)域內(nèi)產(chǎn)生巨大的壓強(qiáng),導(dǎo)致一系列物理和化學(xué)反應(yīng)的發(fā)生,從而達(dá)到殺菌的目的[9-10]。眾多國(guó)內(nèi)外學(xué)者都證實(shí)了超聲技術(shù)良好的殺菌效果[11-15],但是將超聲技術(shù)用于芽孢萌發(fā)與殺滅的研究還鮮見(jiàn)報(bào)道。

    本實(shí)驗(yàn)以枯草芽孢桿菌為研究對(duì)象,研究超聲和熱處理、化學(xué)誘導(dǎo)劑等對(duì)芽孢萌發(fā)和殺滅的協(xié)同作用,旨在探究非高溫條件下芽孢滅活的新方法,以期降低熱殺菌溫度,減少化學(xué)防腐劑的添加,為食品殺菌工藝的發(fā)展提供有效依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 菌種、試劑與培養(yǎng)基

    枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)(凍干菌種,編號(hào):20622) 中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏中心;L-丙氨酸 北京博奧拓達(dá)科技有限公司;肌苷國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;2,6-吡啶二羧酸(2,6-pyridinedicarboxylic acid,DPA) 北京伊諾凱科技有限公司;溶菌酶 北京博奧拓達(dá)科技有限公司;大蒜、生姜精油 天津春發(fā)生物科技有限公司;乳酸鏈球菌素(Nisin) 洛陽(yáng)奇泓生物科技有限公司;胰蛋白胨大豆瓊脂 青島高科園海博生物技術(shù)有限公司;普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、平板計(jì)數(shù)瓊脂 北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司;促芽孢生長(zhǎng)培養(yǎng)基(在上述普通胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基中加入一定量的MnCl2,使培養(yǎng)基中Mn2+的質(zhì)量濃度為50 mg/L,調(diào)整pH 7.0~7.2,滅菌,備用)。

    1.2 儀器與設(shè)備

    JY92-ⅡDN型超聲波破碎儀 寧波新芝生物科技股份有限公司;GI54DWS全自動(dòng)高壓滅菌鍋 美國(guó)致微公司;KBF115恒溫恒濕箱 德國(guó)賓德公司;AB2-6S1型生物安全柜 新加坡藝斯高科技有限公司;Sorvall LYNX 4000高速落地離心機(jī) 美國(guó)賽默飛世爾科技公司。

    1.3 方法

    1.3.1 枯草芽孢桿菌芽孢培養(yǎng)和懸液制備

    1.3.2 單一因素對(duì)芽孢的誘導(dǎo)殺滅作用

    將1.3.1節(jié)制備得到的芽孢懸液稀釋到1.0×107CFU/mL,參照文獻(xiàn)[17-19]的方法,按照表1所示的添加水平對(duì)芽孢懸液進(jìn)行處理,探究不同單一因素用于芽孢萌發(fā)時(shí)的最適水平,比較不同方式對(duì)芽孢萌發(fā)的影響。

    表1 單一因素對(duì)芽孢誘導(dǎo)殺滅的作用條件Table 1 Effect of single factors on the induction and inactivation of spores

    1.3.3 超聲協(xié)同熱處理對(duì)芽孢的誘導(dǎo)殺滅作用

    分別在40、60 ℃和80 ℃條件下,對(duì)稀釋過(guò)的芽孢懸液(1.0×107CFU/mL)施加頻率25 kHz,功率100、300、600 W和900 W的超聲處理。時(shí)間15 min,期間每工作2 s停歇1 s,探究超聲協(xié)同熱處理對(duì)芽孢的誘導(dǎo)作用。

    1.3.4 超聲協(xié)同誘導(dǎo)劑對(duì)芽孢的誘導(dǎo)殺滅作用

    試驗(yàn)設(shè)計(jì)如表2所示,分別探究超聲與DPA、L-丙氨酸+肌苷、AGFK、溶菌酶的協(xié)同作用。其中,DPA的添加濃度為6 mmol/L,L-丙氨酸和肌苷的添加濃度分別為50 mmol/L和6 mmol/L,溶菌酶的添加濃度為10 mmol/L,AGFK的添加濃度分別為L(zhǎng)-天冬酰胺10 mmol/L、D-葡萄糖10 mmol/L、D-果糖10 mmol/L和KCl 50 mmol/L。溫度60 ℃,超聲時(shí)間15 min,期間每工作2 s停歇1 s,探究超聲協(xié)同誘導(dǎo)劑對(duì)芽孢的誘導(dǎo)殺滅作用。

    2013年,安全監(jiān)督工作深入貫徹落實(shí)黨的十八大精神和部黨組的決策,開(kāi)展水利安全生產(chǎn)考核以及安全生產(chǎn)檢查和隱患排查治理工作,全年未發(fā)生重特大生產(chǎn)安全事故。地方自主稽察全面展開(kāi),稽察項(xiàng)目實(shí)現(xiàn)區(qū)域和項(xiàng)目類(lèi)型全覆蓋,保障了大規(guī)模水利建設(shè)的有序進(jìn)行。日前,本刊記者專(zhuān)訪(fǎng)了水利部安全監(jiān)督司司長(zhǎng)武國(guó)堂。

    表2 超聲與誘導(dǎo)劑協(xié)同作用對(duì)芽孢誘導(dǎo)殺滅的作用條件Table 2 Synergistic effect of ultrasound and inducer on the germination and inactivation of spores

    1.3.5 超聲功率梯度式變化對(duì)芽孢的誘導(dǎo)殺滅作用

    調(diào)整超聲功率的變化梯度,探究不同梯度模式下超聲對(duì)芽孢萌發(fā)和殺滅的作用效果。試驗(yàn)條件如表3所示,其中,L-丙氨酸和肌苷的濃度分別為50 mmol/L和6 mmol/L,溫度60 ℃,各功率條件下均處理3 min,每工作2 s停歇1 s。

    表3 超聲功率變化對(duì)芽孢誘導(dǎo)殺滅的作用條件Table 3 Decreasing gradients of ultrasonic power for spore germination and inactivation

    1.3.6 芽孢的誘導(dǎo)殺滅效果評(píng)價(jià)

    將處理后的芽孢懸液立即置于(80±1)℃水浴中保溫15 min,隨后移入冰水浴中迅速冷卻,用移液槍分別吸取1 mL芽孢懸液,加入平板培養(yǎng)皿中,傾注約15~20 mL的培養(yǎng)基,搖勻,37 ℃下培養(yǎng)48 h[20]。以芽孢萌發(fā)率表示不同處理下的誘導(dǎo)殺滅效果,按下式計(jì)算。

    式中:N0為未經(jīng)任何處理的菌濃度/(CFU/mL);N為經(jīng)過(guò)超聲或誘導(dǎo)劑處理后,芽孢懸液經(jīng)過(guò)80 ℃水浴殺死萌發(fā)的營(yíng)養(yǎng)體后,在平板計(jì)數(shù)培養(yǎng)基上培養(yǎng)的可見(jiàn)菌濃度/(CFU/mL)。

    1.4 數(shù)據(jù)分析

    應(yīng)用Excel 2010和SAS/PC(9.2)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果等進(jìn)行均值差異顯著性檢驗(yàn),方差分析中的多重比較項(xiàng)采用新復(fù)極差法(S-N-K)法,分組顯著性水平0.05。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 單一因素對(duì)芽孢的誘導(dǎo)殺滅效果比較

    圖1 不同誘導(dǎo)方法芽孢萌發(fā)效果Fig. 1 Effects of different induction methods on spore germination

    由圖1可知,熱處理、L-丙氨酸+肌苷、AGFK、Nisin和生姜精油等用于芽孢誘導(dǎo)時(shí),芽孢萌發(fā)率均小于30%,說(shuō)明這些誘導(dǎo)方法并無(wú)明顯誘導(dǎo)作用,無(wú)法刺激芽孢大量萌發(fā)。而溶菌酶、大蒜精油對(duì)芽孢有一定的誘導(dǎo)作用,其中溶菌酶的最適添加水平為10 mmol/L,對(duì)應(yīng)的芽孢萌發(fā)率為52.17%;大蒜精油的最適添加水平為20 mmol/L,對(duì)應(yīng)的芽孢萌發(fā)率為45.63%。兩種方法的萌發(fā)率都沒(méi)有超過(guò)60%,說(shuō)明這些方法雖然可以實(shí)現(xiàn)芽孢的部分萌發(fā),但仍不能滿(mǎn)足大量萌發(fā)的需要,無(wú)法得到有效的殺菌效果。超聲或添加DPA則得到了較好的誘導(dǎo)效果,其中,超聲功率的最佳水平為600 W,可以殺滅62.94%的芽孢;而DPA的最適添加水平為12 mmol/L,芽孢萌發(fā)能夠達(dá)到99.45%,可以實(shí)現(xiàn)體系內(nèi)大部分芽孢的萌發(fā)和殺滅工作。但是,考慮到食品的可食性和安全性,本研究選擇以超聲為基礎(chǔ),輔以其他誘導(dǎo)劑協(xié)同作用,進(jìn)一步探究中溫環(huán)境下提升芽孢萌發(fā)率的方法,實(shí)現(xiàn)殺滅大量芽孢的需要,延長(zhǎng)食品貨架期的同時(shí)避免對(duì)食品安全和品質(zhì)造成負(fù)面影響。

    2.2 超聲協(xié)同不同誘導(dǎo)方法對(duì)芽孢的致死效果

    經(jīng)過(guò)以上不同方法的單一誘導(dǎo)研究,確定了以超聲技術(shù)為基礎(chǔ)的芽孢殺滅方法。在此基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)比較了超聲技術(shù)和熱處理、超聲技術(shù)和不同誘導(dǎo)劑組合以及超聲功率的不同變化等對(duì)芽孢萌發(fā)效果的影響,尋找不同條件下超聲技術(shù)用于芽孢誘導(dǎo)殺滅的最佳效果。

    2.2.1 超聲協(xié)同熱處理對(duì)芽孢的誘導(dǎo)殺滅效果

    熱處理溫度設(shè)置為40、60、80 ℃,探究不同溫度下超聲功率的變化對(duì)芽孢致死率的影響,結(jié)果如圖2所示。3 種溫度處理下的芽孢萌發(fā)率均隨著超聲功率的提高呈現(xiàn)出先升后降的趨勢(shì),其中,40 ℃處理時(shí),在600 W達(dá)到最高,最高萌發(fā)率為59.85%;60 ℃和80 ℃處理時(shí)均在300 W達(dá)到最高,最高萌發(fā)率分別為64.24%和63.12%。整體上,實(shí)驗(yàn)得到的3 種最佳條件下的殺菌率并無(wú)顯著差異(P>0.05),且均未超過(guò)65%,但是可以證明超聲和熱處理協(xié)同作用下對(duì)枯草芽孢桿菌芽孢有一定的殺滅作用,對(duì)比之下選擇60 ℃作為芽孢萌發(fā)誘導(dǎo)的熱處理?xiàng)l件。

    圖2 超聲和不同溫度協(xié)同作用對(duì)芽孢萌發(fā)率的影響Fig. 2 Effect of ultrasonic power combined with different temperatures on spore germination

    2.2.2 超聲協(xié)同不同誘導(dǎo)劑對(duì)芽孢的誘導(dǎo)殺滅效果

    在上述研究的基礎(chǔ)上,將超聲技術(shù)與常用的芽孢萌發(fā)誘導(dǎo)劑DPA、L-丙氨酸+肌苷、AGFK和溶菌酶復(fù)合使用,設(shè)定功率分別為100、300、600 W和900 W,頻率25 kHz,溫度60 ℃,處理時(shí)間15 min,工作2 s,停歇1 s。探究不同的使用功率下,超聲與不同誘導(dǎo)劑協(xié)同作用的效果,結(jié)果如圖3所示。

    圖3 超聲功率和不同誘導(dǎo)劑協(xié)同作用對(duì)芽孢萌發(fā)率的影響Fig. 3 Effect of ultrasonic power combined with different inducers on spore germination

    超聲技術(shù)與DPA共同作用時(shí),雖然芽孢萌發(fā)率很高,但是超聲功率的變化對(duì)萌發(fā)率并無(wú)顯著影響(P>0.05);超聲技術(shù)與L-丙氨酸+肌苷協(xié)同作用時(shí),隨著超聲功率的提高,芽孢萌發(fā)率有著顯著的升高(P<0.05),尤其功率大于300 W以后,芽孢的萌發(fā)率超過(guò)了95%,最高達(dá)到了98.23%;與AGFK或溶菌酶協(xié)同作用時(shí),芽孢萌發(fā)率隨著功率的提升也有改善,但是都沒(méi)有超過(guò)85%,與AGFK協(xié)同作用最高為84.67%;而與溶菌酶協(xié)同作用時(shí)最高為77.71%。

    經(jīng)過(guò)不同方法的對(duì)比與篩選,最終確定超聲處理和L-丙氨酸+肌苷的復(fù)合作用誘導(dǎo)芽孢萌發(fā)能獲得不錯(cuò)的效果,其萌發(fā)率能夠達(dá)到98%以上,且不同于傳統(tǒng)采用DPA為誘導(dǎo)劑,超聲聯(lián)合丙氨酸和肌苷共同作用不僅能夠有效實(shí)現(xiàn)芽孢萌發(fā),降低熱致死溫度,而且對(duì)食物安全和風(fēng)味影響較小,可以有效延長(zhǎng)食品貨架期,實(shí)現(xiàn)非高溫殺菌產(chǎn)品的長(zhǎng)時(shí)間貯存。

    2.3 超聲處理模式對(duì)枯草芽孢桿菌芽孢的誘導(dǎo)殺滅效果

    采用溫度60 ℃,L-丙氨酸+肌苷為誘導(dǎo)劑,對(duì)芽孢懸液進(jìn)行梯度式超聲處理,探究不同超聲處理模式對(duì)芽孢萌發(fā)的影響,處理結(jié)果如圖4所示。

    圖4 超聲功率的梯度變化對(duì)芽孢萌發(fā)的影響Fig. 4 Effect of variation in ultrasonic power on spore germination

    100 W-300 W-600 W-900 W的功率遞增模式與功率恒定模式相比,芽孢萌發(fā)并無(wú)改善,其得到的萌發(fā)率為80.25%;采用600 W-100 W-300 W-900 W和300 W-600 W-100 W-900 W的超聲模式,相比遞增模式效果較好,芽孢萌發(fā)率分別為85.94%和87.40%;而采用900 W-600 W-300 W-100 W的遞減功率則有最好的誘導(dǎo)效果,芽孢萌發(fā)率可以達(dá)到94.86%,可以實(shí)現(xiàn)芽孢的大量萌發(fā)。對(duì)比不同的超聲模式可知,相比其他模式,采用超聲功率由高到低的遞減模式具有更好的促萌發(fā)效果,可以有效用于體系內(nèi)芽孢的殺滅工作。

    3 討 論

    不同方法在誘導(dǎo)芽孢萌發(fā)時(shí)的效果有很大差異,這主要與誘導(dǎo)劑對(duì)芽孢的作用位點(diǎn)和受體敏感度有關(guān)。通常情況下細(xì)菌的基因組有多個(gè)受體操縱子,這些能形成孢子的細(xì)菌往往通過(guò)多種受體響應(yīng)不同類(lèi)型的萌發(fā)劑。如枯草芽孢桿菌中g(shù)erA是產(chǎn)芽孢細(xì)菌類(lèi)中第一個(gè)被描述的操縱子,其同源基因編碼孢子膜上有3 個(gè)相關(guān)蛋白:GerAA、GerAB、GerAC,這3 個(gè)蛋白在芽孢中相互作用并形成一個(gè)受體復(fù)合物GerA,是L-丙氨酸的受體之一,這3 個(gè)蛋白中任何一個(gè)組分的失活都會(huì)影響整個(gè)受體的功能。同理,由gerB和gerK編碼的GerB和GerK等則是AGFK和葡萄糖的受體[21-22]。正是這些誘導(dǎo)劑對(duì)應(yīng)著不同的芽孢受體,所以在芽孢萌發(fā)過(guò)程中,受限于誘導(dǎo)劑的類(lèi)型、穿過(guò)孢子衣時(shí)的信號(hào)強(qiáng)弱以及受體的種類(lèi)和完整性等,不同誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)效果會(huì)有很大差異。王一曉[23]在實(shí)驗(yàn)中嘗試比較了L-丙氨酸、肌苷、D-葡萄糖和十二銨等不同類(lèi)型的誘導(dǎo)劑對(duì)芽孢萌發(fā)的誘導(dǎo)效果,結(jié)果表明,DPA的誘導(dǎo)效果較好,L-丙氨酸和肌苷次之,葡萄糖等效果最差,這與武玉艷[24]、Corthouts[25]等的研究結(jié)果相近。從本研究中不同誘導(dǎo)方法的殺滅效果也可發(fā)現(xiàn):L-丙氨酸+肌苷、AGFK、大蒜精油、生姜精油的誘導(dǎo)效果較差,原因可能是僅僅靠自身的分子運(yùn)動(dòng),單一的營(yíng)養(yǎng)素誘導(dǎo)劑難以通過(guò)芽孢衣和皮層達(dá)到對(duì)應(yīng)的受體位點(diǎn),加上受體位點(diǎn)少或缺失,致使芽孢萌發(fā)率很低。而溶菌酶、DPA促進(jìn)芽孢萌發(fā)是非生理性的,尤其DPA是芽孢萌發(fā)時(shí)自身釋放的重要成分,對(duì)于引起后續(xù)折光性消失,促進(jìn)皮層水解和水分進(jìn)入起到重要作用;因此外源添加DPA是目前效果最好的芽孢誘導(dǎo)方法。溶菌酶則是通過(guò)水解芽孢衣和皮層,促進(jìn)水分子進(jìn)入引導(dǎo)芽孢萌發(fā),因而受到芽孢抗性、酶活力和添加量影響較大,效果并不穩(wěn)定。

    超聲殺菌主要是借助聲波產(chǎn)生的空化效應(yīng),在受體局部區(qū)域形成反差巨大的正負(fù)壓區(qū),巨大的壓強(qiáng)變化產(chǎn)生一系列物理和化學(xué)反應(yīng),能夠有效殺滅一般細(xì)菌。Ha[26]、Khanal[27]、譚海剛[28]等分別在實(shí)驗(yàn)中探究了超聲技術(shù)用于大米、牛乳以及菌懸液等環(huán)境下的殺菌效果,但是只有少數(shù)人將超聲用于食品體系中芽孢的萌發(fā)與殺滅,并取得較好的效果。其中Khanal等[27]采用5 000 W、20 kHz的超聲條件結(jié)合巴氏殺菌(63 ℃,30 min)收到了較好的結(jié)果,芽孢的殺滅率達(dá)到了6 個(gè)數(shù)量級(jí)。而本研究中,借助超聲頻繁的壓力變化改變芽孢內(nèi)膜蛋白的理化性質(zhì),影響膜的通透性,從而使水分子進(jìn)入,同時(shí)破壞芽孢衣的結(jié)構(gòu),增加受體蛋白與營(yíng)養(yǎng)素的接觸幾率,促進(jìn)萌發(fā)機(jī)制啟動(dòng),達(dá)到殺滅芽孢的目的,這與Rao Lei[29]、Spilimbergo[30]、Aouadhi[31]等的研究理論相近。通過(guò)本研究中超聲和不同誘導(dǎo)劑協(xié)同作用結(jié)果也可以看出,L-丙氨酸+肌苷、AGFK和溶菌酶在超聲作用下,都能使芽孢萌發(fā)率得到顯著提升,這是超聲作用改變內(nèi)膜通透性,增加了誘導(dǎo)劑與受體位點(diǎn)的接觸機(jī)會(huì)帶來(lái)的結(jié)果。而探究超聲與熱處理復(fù)合作用時(shí),同一溫度下,芽孢的萌發(fā)率隨著超聲功率的升高呈現(xiàn)出先升后降的趨勢(shì),原因可能是一定功率下,超聲作用產(chǎn)生的物化反應(yīng)促進(jìn)了芽孢內(nèi)膜的變化,促進(jìn)了芽孢的萌發(fā),但當(dāng)功率過(guò)大時(shí)則會(huì)形成大量的空穴或氣泡,既不利于熱量和水分的傳遞,也會(huì)使芽孢產(chǎn)生局部聚集,耐受性增強(qiáng),因而降低了芽孢的萌發(fā)效率。因此通過(guò)圖3所示的模式篩選,調(diào)整超聲功率的輸出模式,開(kāi)始采用大功率超聲,有效提升體系溫度,并快速改變芽孢內(nèi)膜的通透性,隨后逐漸降低輸出功率,適當(dāng)減少空穴和氣泡,促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)素誘導(dǎo)劑的轉(zhuǎn)運(yùn),提高其與芽孢內(nèi)膜的接觸機(jī)會(huì),達(dá)到了提升萌發(fā)率的效果。

    4 結(jié) 論

    本研究以枯草芽孢桿菌為研究對(duì)象,探究超聲、熱處理和不同誘導(dǎo)劑促進(jìn)芽孢萌發(fā)的最適條件。結(jié)果表明:1)通過(guò)不同方法的對(duì)比分析,確定超聲處理和DPA為最佳的誘導(dǎo)處理方法,考慮到實(shí)際應(yīng)用時(shí)的安全性和可食性,確定超聲為基礎(chǔ)、輔以其他方法的誘導(dǎo)模式。2)比較超聲與熱處理、誘導(dǎo)劑等協(xié)同作用于芽孢的誘導(dǎo)結(jié)果,最終確定采用超聲功率600 W、L-丙氨酸和肌苷濃度分別為50 mmol/L和6 mmol/L、溫度60 ℃的復(fù)合誘導(dǎo)模式,芽孢萌發(fā)率能夠達(dá)到98.23%,實(shí)現(xiàn)芽孢的大量萌發(fā)和殺滅;3)進(jìn)一步對(duì)比不同超聲模式,確定采用功率遞減的900 W-600 W-300 W-100 W的處理方法能夠有效提高芽孢萌發(fā)時(shí)的處理效率,為減少熱損傷和化學(xué)試劑的使用、延長(zhǎng)產(chǎn)品貨架期、保障食品安全和食用品質(zhì)提供了理論依據(jù)。

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