高海寧,李彩霞,孫小妹,陳年來*,張勇*
(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學資源與環(huán)境學院,甘肅 蘭州 730070;2.甘肅省河西走廊特色資源利用省級重點實驗室,甘肅 張掖 734000)
土壤有機碳是土壤碳中最具有活性的部分,可代表微生物量的大小,盡管有機碳在土壤全碳中所占的比例很小,但它是土壤有機質(zhì)中的活性組分,其比例大小能夠反映土壤微生物數(shù)量和活性,是評價土壤微生物量的重要指標[1]。一般而言,土壤中有機質(zhì)含量越高,有機碳含量就越高,能夠提供給微生物利用的碳源就越多,微生物數(shù)量也就越大。
土壤氮素主要來源于土壤有機碎屑、腐殖質(zhì)等,通過微生物降解而形成植物可利用的有效態(tài)氮。土壤中大部分銨態(tài)氮和硝態(tài)氮很容易被作物直接吸收利用,是速效氮。在土壤中全氮量的消長與土壤有機碳含量的變化一樣,主要決定于各地區(qū)有機質(zhì)的積累和分解作用的相對強度[2]。不同立地環(huán)境及植被類型是影響微生物活性的因素,對土壤全氮量也具有較大的影響[3]。
土壤微生物是土壤生態(tài)系統(tǒng)中最重要的組成部分,通過參與土壤有機物質(zhì)的循環(huán)、運輸[4-5],進而主導土壤生態(tài)系統(tǒng)養(yǎng)分循環(huán)和能量流動,對維持生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性和可持續(xù)性具有重要意義[6]。氮、磷、鉀是植物生長發(fā)育必需的營養(yǎng)元素,土壤中N主要是通過固氮作用、硝化作用、反硝化作用及有機氮的礦化作用轉(zhuǎn)化而形成,微生物在這些生化反應中起著主導作用,從而調(diào)控植物對氮源的吸收利用[7]。磷和鉀主要是通過解磷解鉀細菌參與磷和鉀循環(huán),從而促進植物對不溶性磷酸鈣[8]和鉀長石[9]的再吸收利用。在生態(tài)系統(tǒng)中,土壤微生物的種類、數(shù)量、群落多樣性受海拔、土壤養(yǎng)分、植被組成和結(jié)構(gòu)的綜合影響[10]。
黑河發(fā)源于祁連山,是我國第二大內(nèi)陸河,對整個流域的生態(tài)和經(jīng)濟發(fā)展起著關(guān)鍵性作用[11]。目前,由于氣候變化和人為活動的干擾及超載放牧,導致天然草地退化,森林面積萎縮,生態(tài)系統(tǒng)的脆弱愈加嚴重,資源和環(huán)境發(fā)展失衡[12]。因此,許多學者致力于黑河上游祁連山的生態(tài)、土壤、植被和水源涵養(yǎng)功能等方面的研究[13-15],而對于不同海拔及其調(diào)控因子對于微生物種類的影響研究相對較少,僅見臺喜生等[16]對祁連山不同海拔氮磷循環(huán)細菌數(shù)量變化特征研究,未見海拔梯度的垂直變化與土壤養(yǎng)分和微生物方面的研究工作。鑒于此,本研究選擇10個海拔梯度,系統(tǒng)調(diào)查了樣地植被,采集0~20 cm土壤樣品,分析土壤理化性質(zhì)和土壤可培養(yǎng)微生物隨海拔變化而呈現(xiàn)的分布規(guī)律,并分析它們與環(huán)境因子之間的相關(guān)性,以期探討影響土壤生態(tài)系統(tǒng)的主控因子,為揭示林地土壤發(fā)育的現(xiàn)狀,評價林地土壤肥力提供依據(jù)。
為了研究黑河上游冰溝流域不同海拔條件下微生物與土壤理化性質(zhì)的關(guān)系,本研究依海拔梯度選取了10個樣地。樣地以海拔梯度間隔100 m設(shè)置,隨機設(shè)置樣方。樣地植被類型有3類:草地、灌木、喬木。樣地詳細概況見表1。
研究地點位于青海省祁連縣黑河上游冰溝流域(E 100°11′24″-100°23′55″,N 38°02′18″-38°10′39″,海拔2905~4401 m),年均氣溫0.5 ℃,降水量290.2~467.8 mm,年均蒸發(fā)量1051.7 mm,平均相對濕度60%,年日照時間2600 h[17],成土巖石為石灰?guī)r、砂巖、礫巖,成土母質(zhì)為殘積母質(zhì)和坡積母質(zhì)。土壤類型為高山寒漠土、高山草甸土、高山灌叢草甸土、亞高山灌叢草甸土、森林灰褐土。喬木主要有青海云杉(Piceacrassifolia)、祁連圓柏(Sabinaprzewalskii)、山楊(Populusdavidiana)等;灌木主要有沙棘(Hippophaerhamnoides)、金露梅(Potentillafruticosa)、小葉金露梅(Potentillaparvifolia)、鬼箭錦雞兒(Caraganajubata)、銀露梅(Potentillaglabra)、杯腺柳(Salixcupularis)、高山繡線菊(Spiraeaalpina)等;草本有珠芽蓼(Polygonumviviparum)、唐古特虎耳草(Saxifragatangutica)、釘柱委陵菜(Potentillasaundersiana)、甘肅棘豆(Oxytropiskansuensis)、紅棕苔草(Carexprzewalski)、蒿草(Kobresiamyosuroides)、草地早熟禾(Poapratensis)、四蕊山莓草(Sibbaldiatetrandra)、短筒兔耳草(Lagotisbrevituba)等。
表1 樣地概況
土壤樣品采集于2017年7月,在每一海拔設(shè)置3個樣地,除去表層凋落物層后在剖面0~20 cm土層取土樣,用于微生物分離培養(yǎng)的土樣采用低溫儲運,用于土壤理化性質(zhì)測定的土樣自然風干。
土壤pH值、有機質(zhì)、總有機碳、土壤全氮(TN)、全磷(TP)、總氮(TN)的測定參照《土壤分析技術(shù)規(guī)范》[18]的方法;速效磷、全鉀、速效鉀、銨態(tài)氮和硝態(tài)氮參照章家恩[19]的方法。
各土樣分別稱取10.0 g 置于滅菌的裝有100 mL水的三角瓶中,塞上無菌硅膠塞,在20 ℃、150 r·min-1的條件下振蕩15 min,然后將土壤懸液進行梯度稀釋后涂布平板上,涂布后的霉菌和放線菌在28 ℃培養(yǎng)5~8 d,細菌在30 ℃培養(yǎng)7 d,然后對每一個平板進行菌落計數(shù),按稀釋倍數(shù)換算成每克干土的菌落總數(shù)(cfu)。
真菌培養(yǎng)基: 10 g 葡萄糖,5 g 蛋白胨,1 g KH2PO4,0.5 g MgSO4·7H2O,0.033 g 孟加拉紅,15~20 g 瓊脂,溶于1000 mL去離子水中,pH自然,培養(yǎng)基臨用前加入30 μg·mL-1鏈霉素[20]。
放線菌培養(yǎng)基: 20 g 可溶性淀粉,0.5 g MgSO4·7H2O,1 g KNO3,0.5 g NaCl,0.5 g K2HPO4,pH值7.2~7.4[22]。
解磷菌培養(yǎng)基: 10 g 葡萄糖,5 g Ca3(PO4)2,0.5 g MgCl2·6H2O,0.25 g MgSO4·7H2O,0.2 g KCl,0.1 g (NH4)2SO4,溶解在1000 mL去離子水中[16]。
解鉀菌培養(yǎng)基:0.5 g 酵母膏,10 g 蔗糖,1 g (NH4)2SO4,2 g Na2HPO4,0.5 g MgSO4·7H2O,1 g CaCO3,1 g 鉀長石粉(K2O·Al2O3·6SiO2),定容至1000 mL;每升富集培養(yǎng)基中加入15 g瓊脂為選擇培養(yǎng)基,培養(yǎng)基pH均為7.0[16]。
硅酸鹽細菌專性培養(yǎng)基:5 g 蔗糖,2 g Na2HPO4,0.5 g MgSO4·7H2O,0.1 g NaCl,0.1 g CaCO3,1.0 g石英石,溶解在1000 mL去離子水中,pH為7.2[21]。
芽孢桿菌培養(yǎng)基:3 g 牛肉膏,5 g 蛋白胨,30 g 瓊脂溶解在1000 mL去離子水中,pH為7.2,加1000 mL的麥芽汁(糖度 7°Be′)[22]。
采用SPSS 16.0 軟件分析土壤理化性質(zhì)與土壤細菌數(shù)量的相關(guān)關(guān)系,顯著性差異采用新Duncan復極法進行比較。主成分分析利用GPS 12.5軟件,從樣本相關(guān)矩陣出發(fā),對不同海拔土壤養(yǎng)分和微生物數(shù)量的規(guī)格化特征向量進行主成分分析,根據(jù)累積方差貢獻率達到85%以上確定主成分的個數(shù)。由土壤養(yǎng)分和微生物數(shù)量相關(guān)矩陣的特征向量,列出主成分的函數(shù)表達式,最后根據(jù)主成分值計算出不同海拔土壤養(yǎng)分和微生物的綜合得分,對其進行比較排序。
不同海拔梯度土壤養(yǎng)分含量見表2。土壤有機碳(SOC)、總氮(TN)、全磷(TP)隨海拔的升高變化趨勢明顯,呈拋物線形,在海拔3250 m處達到最高,分別為119.16 g·kg-1、11.39 g·kg-1、1.62 g·kg-1。
表2 10個樣地土壤養(yǎng)分含量Table 2 The soil nutrient contents in 10 plots
注: 不同小寫字母表示不同海拔在P<0.05水平差異顯著。下同。
Note: Different small letters indicate significant differences in different altitudes atP<0.05 level. The same below.
土壤中硝態(tài)氮與銨態(tài)氮含量隨海拔的變化呈現(xiàn)不同的趨勢。土壤硝態(tài)氮含量在海拔3516 m處達到最大值32.85 mg·kg-1,在海拔4130 m處為最低值1.38 mg·kg-1。而土壤銨態(tài)氮含量有兩個制高點,在海拔3204 m處達到最大值14.35 mg·kg-1,在海拔3479 m處含量僅次于海拔3204 m為13.22 mg·kg-1,而土壤銨態(tài)氮含量最低點位于海拔3516 m,含量僅為0.02 mg·kg-1。
不同海拔土壤全磷含量差異不顯著,變化范圍為0.44~1.62 g·kg-1,其中全磷含量在3250 m處最高達到1.62 g·kg-1,3071 m處含量最低為0.44 g·kg-1;各海拔土壤速效磷含量差異顯著,變化范圍為0.66~4.48 mg·kg-1,在3479 m處速效磷含量最高達到4.48 mg·kg-1,在3172 m處速效磷含量最低為0.66 mg·kg-1。土壤速效磷含量與全磷含量并未呈現(xiàn)完全相對應的相關(guān)性。
不同海拔土壤全鉀含量變化范圍在13.59~28.89 g·kg-1之間,其中全鉀含量在3172 m處最高為28.89 g·kg-1,2905 m處最低為13.59 g·kg-1,不同海拔土壤速效鉀含量差異顯著(P<0.05),變化范圍為25.2~320.6 mg·kg-1,土壤速效鉀含量在2911 m處最高達到320.6 mg·kg-1,3172 m處最低為25.2 mg·kg-1,在土壤速效鉀含量達到最大320.6 mg·kg-1時,土壤pH(水∶土=2.5∶1)為最大的8.37,在土壤速效鉀含量最低為25.2 mg·kg-1時,土壤pH為最小的6.27。
由表3所示,真菌、解磷菌、解鉀菌、硅酸鹽細菌、芽孢桿菌隨海拔梯度變化無統(tǒng)一規(guī)律但差異顯著(P<0.05),總體變化趨勢大體相同;在海拔2814~4130 m范圍內(nèi)微生物群落數(shù)量呈現(xiàn)3個波峰,分別在海拔2911、3250、3516 m處解磷菌、解鉀菌、硅酸鹽細菌出現(xiàn)峰值。3250 m處解磷菌和真菌數(shù)量最多,硅酸鹽細菌數(shù)量在2911 m處最高,而芽孢桿菌在3071 m處最高,在高海拔4130 m處微生物的數(shù)量相對減少,其中硅酸鹽細菌和芽孢桿菌減少程度最大,微生物總數(shù)表現(xiàn)為3250 m>2911 m>2814 m,即中高海拔>中低海拔>低海拔。
表3 海拔對微生物菌落數(shù)量的影響Table 3 The effect of elevation on the number of microbial colonies
對10個海拔樣地的植被蓋度、土壤有機碳、全N、全P、全K、硝態(tài)氮、銨態(tài)氮、速效磷、速效鉀、pH與真菌、解磷菌、解鉀菌、硅酸鹽細菌、芽孢桿菌菌落數(shù)量進行相關(guān)性分析,其相關(guān)系數(shù)如表4所示。從表4可看出,植被蓋度對微生物影響比較大,植被蓋度與解鉀菌、硅酸鹽細菌呈極顯著相關(guān)(P<0.01), 而與解磷菌、真菌呈顯著相關(guān)(P<0.05);全N、全P與真菌之間存在極顯著相關(guān)(P<0.01),而與解磷菌之間呈顯著相關(guān)(P<0.05);pH值與各測試菌之間呈正相關(guān),但僅與芽孢桿菌顯著相關(guān)(P<0.05)。
表4 不同海拔土壤可培養(yǎng)微生物數(shù)量與環(huán)境因子的相關(guān)性Table 4 The correlation of different altitude microbial quantity and environmental factors
注:*表示顯著相關(guān)(P<0.05),**表示極顯著相關(guān)(P<0.01)。下同。
Note: * indicates significant relevance atP<0.05 level, ** indicates extremely significant relevance atP<0.01 level. The same below.
不同植被類型對微生物數(shù)量的影響如表5,由表中可知,灌木林微生物總數(shù)與草地和喬木林之間差異顯著(P<0.05),在選取的10個樣地中,植被類型為喬木的樣地分別地處海拔2814、2905、3204和3479 m處,灌木的樣地分別地處海拔2911、3250和3516 m處,均屬于中間海拔樣地,在海拔3516 m處微生物總數(shù)最少;草地樣地均處于中高海拔樣地,分別為地處海拔3071、3172、4130 m處的樣地,不同植被類型,其不同微生物數(shù)量隨海拔升高均呈現(xiàn)下降趨勢,微生物總數(shù)的變化趨勢是:灌木>草地>喬木。
表5 不同植被類型對微生物群落的影響Table 5 The effect of vegetation type on the number of microbial colonies
2.5.1土壤養(yǎng)分、微生物數(shù)量的主成分分析的方差貢獻率 在主成分分析當中,方差代表著土壤養(yǎng)分、微生物數(shù)量在主成分方向上的分散程度,方差越大,主成分在樣本數(shù)據(jù)分析中的作用越大[23]。根據(jù)主成分分析法中主成分個數(shù)選取原則,從表6可見土壤養(yǎng)分特征值λ>1時土壤養(yǎng)分有3個主成分,λ分別為3.3186、2.3277、2.3277,其方差累計貢獻率80.141%,表明前3個主成分已經(jīng)代表了全部土壤養(yǎng)分80.141%的綜合信息。而微生物數(shù)量特征值λ′>1時只有2個主成分,λ′分別為3.170、1.212,其方差累計貢獻率87.634%。因此,土壤養(yǎng)分選取前3個主成分,微生物數(shù)量選取前2個主成分作為綜合指標。
表 6 土壤養(yǎng)分、微生物數(shù)量的主成分分析的方差貢獻率Table 6 Variance contribution rates of principal components
2.5.2不同海拔土壤養(yǎng)分和微生物數(shù)量的規(guī)格化特征向量 土壤養(yǎng)分和微生物數(shù)量的主成分載荷矩陣見表7,從表中可以看出,主成分1中有機碳、速效磷、全氮、全磷是影響土壤養(yǎng)分的主要因素,速效鉀和pH值反映土壤養(yǎng)分及堿度等綜合信息,而主成分3中銨態(tài)氮和硝態(tài)氮的系數(shù)較大,主成分3主要說明的是土壤速效氮的綜合信息。微生物數(shù)量的主成分1中,解磷菌、硅酸鹽細菌、真菌和解鉀菌具有較高載荷量,反映了土壤中這些菌的綜合信息,而主成分2中,僅芽孢桿菌具有較高的載荷量,表明主成分2主要反映土壤中芽孢桿菌的綜合信息。
表7 不同海拔土壤養(yǎng)分和微生物數(shù)量的主成分載荷矩陣Table 7 The principal components load matrix of soil nutrients and microbial number at different elevations
2.5.3不同海拔土壤養(yǎng)分和微生物數(shù)量的主成分綜合得分 根據(jù)各向量相關(guān)矩陣的特征向量(表7),土壤養(yǎng)分的前3個主成分及微生物數(shù)量的前2個主成分的函數(shù)表達式分別為:
F1=0.476x1+0.371x2+0.370x3-0.147x4+0.335x5+0.291x6+0.491x7+0.181x8-0.084x9
F2=-0.133x1-0.285x2-0.274x3-0.522x4+0.070x5+0.091x6+0.191x7+0.509x8+0.496x9
F3=0.161x1-0.421x2-0.441x3+0.291x4+0.246x5+0.563x6-0.017x7+0.093x8-0.363x9
土壤養(yǎng)分與微生物數(shù)量主成分的生物學內(nèi)涵表明,上述3個土壤養(yǎng)分的主成分和微生物數(shù)量的2個主成分已較好地綜合了土壤養(yǎng)分與微生物隨海拔變化的主要特征。由于主成分較多,單一主成分難以對各海拔的信息綜合做出客觀判斷。因此,以表6中土壤養(yǎng)分3個主成分的方差貢獻率和微生物的2個主成分的方差貢獻率作為權(quán)重進行加權(quán)求和,建立海拔與土壤養(yǎng)分及微生物數(shù)量綜合評價數(shù)學模型(1)和(2):
土壤養(yǎng)分綜合得分,F(xiàn)=0.460*F1+0.323*F2+0.217*F3
(1)
(2)
表8 冰溝流域各海拔土壤養(yǎng)分、微生物綜合評價結(jié)果Table 8 Principal component values of soil nutrients and microbial numbers at different altitudes
冰溝流域各海拔土壤養(yǎng)分、微生物綜合評價結(jié)果見表8,從表中可以看出,10個海拔樣地在海拔3479 m處土壤養(yǎng)分綜合評價最好,排序第一,其次為3204、2911 m處的土壤養(yǎng)分,在海拔3172 m處的排名最差,說明在中高海拔處的土壤肥力最好。因此通過土壤主成分綜合得分可較好表征森林土壤的肥力水平的高低。 從表8還可以看出,土壤微生物數(shù)量在海拔3250 m處排序第一,2911 m處排序第二,3516 m處排序第三,3479 m處的微生物數(shù)量排序最低,這個結(jié)論與表3結(jié)果相一致。
土壤養(yǎng)分是森林生態(tài)系統(tǒng)中植物營養(yǎng)的主要來源,森林物種組成、群落結(jié)構(gòu)及生產(chǎn)力均受土壤養(yǎng)分的影響,土壤養(yǎng)分的空間分布呈現(xiàn)一定的海拔梯度特征[24]。本研究結(jié)果表明,土壤養(yǎng)分隨海拔變化差異明顯,其中有機碳、全氮、全磷、硝態(tài)氮、銨態(tài)氮、速效磷在3204~3479 m處含量較高,而土壤全鉀、速效鉀在各海拔含量無顯著規(guī)律??傮w來看,垂直帶土壤全氮分布與有機碳分布在海拔3204~3479 m區(qū)間顯著高于在海拔3172 m以下和海拔3516 m以上,這與胡啟武等[25]對祁連山北坡垂直帶山地草原、森林、高山灌叢土壤有機碳和全氮的分布特征的研究結(jié)果一致。且有機碳和氮素含量均在海拔3250 m處達到最大值。在海拔3250 m處,灌叢植被覆蓋率為83%,較高的植被覆蓋率導致該處有機碳和氮素的含量較其他海拔處要高,而胡啟武等[25]在對祁連山北坡垂直帶山地草原、森林、高山灌叢土壤有機碳和全氮分布特征的研究結(jié)果也表明,土壤有機碳和全氮含量總趨勢為山地草原<青海云杉林<高山灌叢,而位于該海拔處的植被類型為小葉金露梅-苔草灌叢,屬于高山灌叢,是解釋該海拔采樣地有機碳和氮素含量高的又一有力證據(jù)。黑河流域不同海拔土壤養(yǎng)分變化的格局與植被類型,溫、濕度,林地郁閉度和枯落物積累量有關(guān)。
土壤是一個多相、多界面的復雜系統(tǒng),土壤微生物群落數(shù)的變化涉及植被類型、氣候變化、土壤理化性狀、凋落物分解和土壤呼吸等眾多相互關(guān)聯(lián)又相互影響的生物化學過程[26]。本研究結(jié)果顯示,不同海拔所檢測的幾種微生物隨海拔梯度變化而各不相同,在3250 m處解磷菌和真菌數(shù)量最多,硅酸鹽細菌數(shù)量在2911 m處最高,而芽孢桿菌在3071 m處最高,在高海拔4130 m處微生物的數(shù)量相對減少,而硅酸鹽細菌和芽孢桿菌減少程度最大,微生物總數(shù)為3250 m>2911 m>2814 m,即中高海拔>中低海拔>低海拔。
在不同的植被類型下微生物隨海拔變化存在由高到低的變化規(guī)律,但微生物總數(shù)的變化趨勢是:灌木>草地>喬木,并且均在高海拔處最低。這是因為林地土壤微生物的營養(yǎng)物質(zhì)主要來源于地上植物的凋落物,植物根系分泌物,根的殘體等。林地植被覆蓋較高,從枯枝落葉分解可形成的腐殖質(zhì)較多,因而有機質(zhì)豐富,有充分的營養(yǎng)源支持微生物的生長[26]。喬木群落下土壤微生物群落最低,這與喬木植被較低的土壤有機質(zhì)輸入密切相關(guān)[27]。同時植被蓋度對微生物群落數(shù)量也有較大的影響,不同海拔下黑河冰溝采樣地微生物數(shù)量隨植被蓋度發(fā)生規(guī)律性變化,表現(xiàn)為隨植被蓋度的降低,微生物數(shù)量在減少,相關(guān)性分析表明,解鉀菌、硅酸鹽細菌、解磷菌和真菌的數(shù)量均與植被蓋度正相關(guān),作為陸地生態(tài)系統(tǒng)有機質(zhì)的主要輸入者,植被的組成往往決定了土壤微生物的群落結(jié)構(gòu)特征[28]。研究表明,較適的土壤全氮、磷和土壤有機質(zhì)可以促進土壤微生物的生長[29],本研究結(jié)果表明,土壤全N、全P與真菌之間相關(guān)性極顯著,而與解磷菌之間顯著相關(guān),土壤pH值與芽孢桿菌呈正相關(guān),土壤pH值影響土壤微生物的數(shù)量和分布。
研究發(fā)現(xiàn)不同海拔中有機碳、速效磷、全氮、全磷是構(gòu)成土壤養(yǎng)分的主要要素,其次為速效鉀、銨態(tài)氮和硝態(tài)氮,與有機碳、速效磷、全氮、全磷相關(guān)的PC1和PC2分別能解釋變量方差的36.87%和25.86%,在主成分分析中起主要貢獻的是有機碳、速效磷、全氮、全磷。在主成分綜合評分中,土壤養(yǎng)分和微生物總數(shù)隨海拔變化有明顯的差異,在海拔3479 m處土壤的肥力最高,其次為3204和2911 m海拔處,3172 m處最低,這主要是在3479和3204 m海拔處以青海云杉、小葉金露梅和鬼箭錦雞兒為優(yōu)勢種,其中青海云杉林較之其他植被帶樣地枯落物層較厚,枯落物可為土壤提供營養(yǎng)[30]。此外土壤微生物研究中,解磷菌、硅酸鹽細菌、真菌和解鉀菌在不同海拔的土壤中占主要優(yōu)勢,其次為芽孢桿菌。而微生物分值最高在3250 m處,其次為2911 m處,均為小葉金露梅灌叢植被,地形為下坡谷地和中坡,微生物數(shù)量高可能與下坡谷地部相對于中坡和坡頂?shù)浠蛳禄目萋湮锖椭参餁報w相對比較豐富有關(guān),且土壤微生物在中高海拔處出現(xiàn)峰值,其研究結(jié)果與臺喜生等[16]研究結(jié)果一致。因此,植被和微生物的活動可以在小尺度上影響土壤的理化性質(zhì),土壤理化性質(zhì)又會影響土壤微生物群落組成和結(jié)構(gòu)。
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