發(fā)情前期和發(fā)情期格力犬的血清孕酮水平及其適配期的凍精人工授精

郝志明,雷 磊

(天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)系,天津 西青 300384)

母犬的配種失敗的原因有很多,其中配種時(shí)間把握不準(zhǔn)是最重要的原因。母犬的發(fā)情排卵表現(xiàn)差異很大,有的母犬在發(fā)情前期僅有少量血性分泌物排出,甚至不排出,這種情況下很難準(zhǔn)確估計(jì)排卵時(shí)間;有的母犬在整個(gè)發(fā)情前期都表現(xiàn)出“偏尾”并接受公犬交配;有的則直至排卵后都不愿意接受交配;有的母犬在發(fā)情前期開始后的第12天排卵,有的可早至第5天排卵,有的則可晚至第25天排卵。所有這些原因常常使母犬錯(cuò)失最佳的配種時(shí)間,導(dǎo)致懷孕失敗。

近些年的研究表明,犬的卵泡在發(fā)育期間就能產(chǎn)生孕酮,且其水平與LH峰和排卵緊密相關(guān),可以準(zhǔn)確判斷排卵時(shí)間,能確定最佳配種時(shí)間[1-5]。一般認(rèn)為,排卵前LH峰時(shí)血清孕酮濃度為1～2.5 ng/mL[2]或2～4 ng/mL[1],排卵時(shí)血清孕酮濃度則為4～10 ng/mL[3]或4 ～7.5 ng/mL[5];也即孕酮水平達(dá)到1～2.5 ng/mL或 2～4 ng/mL時(shí),母犬處在排卵前LH峰期,孕酮濃度為4～10 ng/mL或4～7.5 ng/mL時(shí),母犬處在排卵期。因此可以通過測(cè)定孕酮水平來(lái)確定母犬的生殖狀態(tài)所處的時(shí)期,是LH峰期、LH峰后期、排卵前半期、排卵后半期、排卵后期還是適配期。為了更好地指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐,本文就天津帝豪犬業(yè)利用血清孕酮水平測(cè)定進(jìn)行輸精指導(dǎo)的工作進(jìn)行了總結(jié),以期更準(zhǔn)確地了解處于發(fā)情前期和發(fā)情期母犬的血清孕酮水平及各期間的間隔時(shí)間的變化規(guī)律,更好地指導(dǎo)排卵鑒定和配種工作。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物 來(lái)天津帝豪犬業(yè)進(jìn)行人工授精的格力犬,年齡1～10歲,共61只。

1.2孕酮測(cè)定儀 法國(guó)梅里埃公司生產(chǎn)的mini-VIDAS全自動(dòng)熒光免疫分析儀。

1.3測(cè)定方法

1.3.1打開mini-VIDAS全自動(dòng)熒光免疫分析儀電源開關(guān),預(yù)熱;冰箱冷藏室取出梅里埃專用孕酮測(cè)定試劑條和SPR放室溫0.5 h以上。

1.3.2犬只前肢正中靜脈采血,放入離心機(jī)3 000 r/min離心10 min。

1.3.3將梅里埃專用孕酮測(cè)定試劑條和SPR放入儀器,吸取200 μL血清加入孕酮測(cè)定試劑條的加樣孔中。

1.3.4按壓運(yùn)行和倉(cāng)位即開始測(cè)定 約50 min后,自動(dòng)打印測(cè)定結(jié)果。

1.4生殖狀態(tài)分期 按照孕酮水平,將發(fā)情前期和發(fā)情期分為L(zhǎng)H峰前期、LH峰期、LH峰后期、排卵前半期、排卵后半期、排卵后期和適配期,其孕酮水平分別為 ＜1.0 ng/mL、1.0 ～2.5 ng/mL、2.5 ～4.0 ng/mL、4.0 ～7.0 ng/mL、7.0 ～10.0 ng/mL、10.0 ～20.0 ng/mL 和20.0 ～30 ng/mL。

1.5凍精人工授精 凍精解凍后,用可視化過子宮頸人工授精技術(shù)將其注入子宮腔內(nèi),所用輸精設(shè)備為森達(dá)牌過子宮頸人工授精系統(tǒng),具體方法見犬可視化過0子宮頸人工授精技術(shù)[6]。

1.6結(jié)果統(tǒng)計(jì) 測(cè)定結(jié)果除按發(fā)情天數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)外,為了確定孕酮測(cè)定的間隔時(shí)間,本文還對(duì)各個(gè)時(shí)期的平均間隔時(shí)間和間隔時(shí)間的范圍進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)。

2　試驗(yàn)結(jié)果

2.1發(fā)情前期和發(fā)情期格力犬血清孕酮水平變化規(guī)律 從圖1可以看出,隨著發(fā)情天數(shù)的增加,格力犬血清孕酮水平在逐漸增加,且增加的速度越來(lái)越快,總的來(lái)說(shuō),在前14 d孕酮水平的增加較為緩慢,但在第15天和第16天,孕酮水平的升高顯著加快,第16天時(shí)血清孕酮水平平均達(dá)到24 ng/mL以上。

圖1　發(fā)情前期和發(fā)情期格力犬血清孕酮水平變化

2.2至適配期所需要的平均時(shí)間和范圍 從表1可以看出,在正常情況下,處在LH峰前期、LH峰期、LH峰后期、排卵前半期、排卵后半期的格力犬距離適配期的平均時(shí)間分別為 2.08、3.26、4.88、7.16 h和 10.00 h,其時(shí)間范圍分別是 1 ～3 d、2 ～5 d、3～7 d、4～13 d和7～14 d。 LH 峰期距離排卵前半期的平均時(shí)間為 3.90 d(7.16 ～3.26=3.90),距離排卵后半期的平均時(shí)間則為5.08 d(7.16～2.08=5.08)。

表1　至適配期(20～30 ng/mL)所需的平均時(shí)間和范圍

2.3凍精過子宮頸人工授精的產(chǎn)仔率 見表2。

表2　適配期格力犬凍精過子宮頸人工授精的產(chǎn)仔率

本試驗(yàn)對(duì)64只處在適配期的母格力犬進(jìn)行了凍精的過子宮頸人工授精,結(jié)果有56只犬懷孕產(chǎn)仔,產(chǎn)仔率達(dá)87.5%。血清孕酮水平20～25 ng/mL和26～30 ng/mL相比,孕酮水平為26～30 ng/mL時(shí)產(chǎn)仔率更高,達(dá)90.0%,見表2。

3　討論

3.1犬卵泡的孕酮產(chǎn)生 在家畜,排卵后的卵泡組織黃體化后轉(zhuǎn)變成為黃體組織,并形成黃體,才開始產(chǎn)生孕酮。但犬則不同,犬的卵泡在雌激素分泌達(dá)到最大前的發(fā)情前期,就開始了緩慢的黃體化,之后在LH峰期的作用下,才開始廣泛而快速的黃體化[1-2],因此,犬在發(fā)情前期,血清孕酮水平就開始增加,LH峰后期孕酮水平則開始較快的增加,排卵完成后,血清孕酮水平則以更快的速度增加。與此相似,從本研究的血清孕酮水平來(lái)看,格力犬孕酮的產(chǎn)生也是在LH峰后期加快,排卵后更快的方式進(jìn)行的。綜上所述,LH峰期和排卵與孕酮水平是緊密相關(guān)的,這也正是孕酮水平測(cè)定能夠準(zhǔn)確預(yù)測(cè)發(fā)情母犬排卵的科學(xué)依據(jù)。

3.2犬血清孕酮水平和配種時(shí)間的關(guān)系 大多數(shù)人認(rèn)為,在犬LH峰后期48小時(shí)出現(xiàn)排卵,排出的卵子在輸卵管繼續(xù)發(fā)育48～72 h才能夠成熟[1、3],另外成熟的卵子維持受精能力的時(shí)間可達(dá)2～3 d[1],因此配種的時(shí)間應(yīng)該是LH峰后期的4～6 d,或排卵后的2～4 d。至于孕酮與LH峰期和排卵的關(guān)系,不同的報(bào)道有一些差異。LH峰期時(shí),Concannon P W等的報(bào)道認(rèn)為血清孕酮水平為1～2.5 ng/mL[2],趙興緒認(rèn)為血清孕酮水平為2～4 ng/mL[1],Hase M則認(rèn)為血清孕酮濃度大于2 ng/mL[4];而排卵時(shí),Janice L C認(rèn)為血清孕酮濃度為4～10 ng/mL[3],Lee B C等則認(rèn)為為4 ～7.5 ng/mL[5]。

3.3犬凍精過子宮頸人工授精的產(chǎn)仔率 許多研究顯示,無(wú)論是新鮮精液還是低溫保存精液,子宮內(nèi)輸精明顯優(yōu)于陰道內(nèi)輸精[7-11]。在冷凍精液,子宮內(nèi)人工授精的產(chǎn)仔率明顯優(yōu)于陰道內(nèi)輸精。Thomassen R等和Linde-Forsberg C的試驗(yàn)表明,冷凍精液人工授精的產(chǎn)子率可達(dá)80% ～85%[7-8]。Wilson M S的結(jié)果則顯示,在發(fā)情母犬來(lái)源不詳?shù)那闆r下,非手術(shù)法宮內(nèi)人工授精的受胎率可達(dá)83.3%和平均7.5只的產(chǎn)仔數(shù)[12]。本試驗(yàn)的產(chǎn)仔率則略高,平均達(dá)87.5%。