flotillin—1蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義

楊秦 蔣傳命 周雨

摘 要：目的：初步探討flotillin-1蛋白的表達(dá)和臨床意義，為深入研究其分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法： 首先通過定時(shí)定量PCR、分析flotillin-1蛋白表達(dá)量，然后分析在醫(yī)院調(diào)閱的120名非小細(xì)胞肺癌病人的各臨床指標(biāo)與其癌組織中flotillin-1蛋白的表達(dá)之間的關(guān)系。結(jié)果：非小細(xì)胞肺癌病人的癌組織中有更高的flotillin-1蛋白表達(dá)，并且flotillin-1蛋白的表達(dá)與腫瘤尺寸、腫瘤分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著關(guān)聯(lián)（P<0.05），而與年齡、性別、吸煙史及組織學(xué)分型沒有顯著性關(guān)聯(lián)（P>0.05）。

關(guān)鍵詞：flotillin-1蛋白；臨床意義；非小細(xì)胞肺癌；

肺癌是世界上致死率最高的癌癥，每年全世界有約140000人被診斷為肺癌[1，2]。這其中85%都是屬于非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）。超過50%非小細(xì)胞肺癌患者都有侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。盡管現(xiàn)在三種最常見的方法：手術(shù)切除、化療和放療已經(jīng)廣泛用于非小細(xì)胞肺癌的治療，但是5年生存率任然非常的低[3]。復(fù)雜的遺傳因素、后天因素、微環(huán)境因素在腫瘤的生存和侵襲中發(fā)揮了重要的作用。更好的對(duì)腫瘤發(fā)生過程中的分子機(jī)制的了解產(chǎn)生了新的治療方法和技術(shù)。

fotillin蛋白家族也被稱作Reggie蛋白家族是細(xì)胞膜脂閥結(jié)構(gòu)的標(biāo)記蛋白。flotillin蛋白家族包含兩個(gè)同源蛋白flotillin-1和flotillin-2[4，5]。flotillin-1在很多的上皮起源組織中都和腫瘤的發(fā)生有重要的關(guān)系。比如過去的研究中發(fā)現(xiàn)Flotillin-1蛋白在非小細(xì)胞肺癌中特異的過度表達(dá)[6]，并且過表達(dá)Flotillin-1會(huì)激活A(yù)urora-B激酶活性。Aurora-B激酶活性增強(qiáng)后進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞微管和著絲粒的不正確聯(lián)結(jié)，導(dǎo)致基因組的不穩(wěn)定。種種跡象都表明flotillin-1在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生過程中扮演了重要的作用。本次研究從flotillin-1在非小細(xì)胞肺癌中在表達(dá)出發(fā)，探討fotillin-1蛋白在非小細(xì)胞肺癌分子機(jī)制和臨床意義。

1 材料和方法

1.1 實(shí)時(shí)定量PCR

1.1.1引物

fotillin-1正向引物序列：CCCATCTCAGTCACTGGCATT

fotillin-1反向引物序列：CCGC CAACATCTCCTTGTTC

β-actin正向引物序列：TGGCACCCAGCACAATGAA

β-actin反向引物序列：CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA

1.1.2 擴(kuò)增方法

在醫(yī)院收集病人手術(shù)切除的組織物，用液氮冰凍保存。將一定量的癌組織和癌旁組織碾磨后按常規(guī)方法提取DNA，然后反轉(zhuǎn)錄。具體反轉(zhuǎn)錄的條件為：95℃解鏈10分鐘，然后95℃每次10秒，連續(xù)40個(gè)循環(huán)。59℃退火20秒，最后72℃延長(zhǎng)10秒。

1.2病人和標(biāo)本。

病人的檔案和石蠟包被的組織標(biāo)本來自120個(gè)被診斷為非小細(xì)胞肺癌的病人。這些病人在2015-2016年間接受肺癌切除手術(shù)。臨床信息都在表1里。這些病人在接受手術(shù)之前從沒有接受過化療和放療。所有的信息來自于電話訪問和辦公室訪問。病人沒3個(gè)月接受一次胸片檢查，每6個(gè)月一次CT檢查。其它病人的記錄包括臨床資料、術(shù)前檢查結(jié)果、手術(shù)記錄、病理組織資料和TNM分期等。

2 結(jié)果

表1：非小細(xì)胞肺癌病人肺癌組織fotillin-1蛋白表達(dá)與臨床特點(diǎn)的關(guān)聯(lián)性分析。從表中可以看出flotillin-1蛋白的表達(dá)與腫瘤尺寸、腫瘤分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著關(guān)聯(lián)（P<0.05），而與年齡、性別、吸煙史及組織學(xué)分型沒有顯著性關(guān)聯(lián)（P>0.05）。

3 討論

本次研究發(fā)現(xiàn)flotillin-1蛋白在癌組織中有更高的表達(dá)量，。并且與癌旁組織的表達(dá)存在顯著差異。這在某種程度上說明flotillin-1蛋白可能與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生有著密切的聯(lián)系。而flotillin-1蛋白的表達(dá)水平與腫瘤尺寸、腫瘤分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著關(guān)聯(lián)進(jìn)一步證明其重要作用。根據(jù)其它的報(bào)道證明：在結(jié)腸癌、乳腺癌中都發(fā)現(xiàn)了類似于非小細(xì)胞肺癌中的類似情況。這是很有意思的現(xiàn)象。

flotillin-1蛋白的研究還處于初步階段。其參與癌癥發(fā)生和發(fā)展的機(jī)制不甚清楚。這次的工作在一定程度上初步揭示flotillin-1蛋白機(jī)制和對(duì)非小細(xì)胞肺癌研究的價(jià)值。因?yàn)槲覀冋J(rèn)為它很可能是一種新的非小細(xì)胞肺癌標(biāo)志物并最終用于臨床的診斷和治療，所以接下來的工作將深入探討其所參加的信號(hào)通路以揭示其具體作用機(jī)制。

參考文獻(xiàn)：

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[4]Bickel PE， Scherer PE， Schnitzer JE， Oh P， Lisanti MP， Lodish HF. Flotillin and epidermal surface antigen define a new family of caveolae-associated integral membrane proteins. J Biol Chem. 1997；272：13793–802. doi：10.1074/jbc.272.21.13793.

[5]Babuke T， Tikkanen R. Dissecting the molecular function of reggie/flotillin proteins. Eur J Cell Biol. 2007；86：525–32.

[6]Santamaría A， Castellanos E， Gómez V， Benedit P， Renau-Piqueras J， Morote J， et al. PTOV1 enables the nuclear translocation and mitogenic activity of flotillin-1， a major protein of lipid rafts. Mol Cell Biol. 2005；25：1900–11. doi：10.1128/MCB.25.5.1900-1911.2005.

作者簡(jiǎn)介：

楊秦（1981-），男，副教授，博士生，主要從事生物化學(xué)和分子生物學(xué)教學(xué)和科研。

基金項(xiàng)目：本文系2016年邵陽市科技局資助科研項(xiàng)目“Flotillin-1在非小細(xì)胞肺癌中的分子機(jī)制和臨床意義”，編號(hào)2016ZD20。