貴州省規(guī)模豬場(chǎng)偽狂犬病免疫和感染情況調(diào)查

劉 霞，李照偉，王 慧，崔 燕，張 霞，熊 力

（1. 貴州省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州貴陽 550008；2. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州 730070）

豬偽狂犬?。≒seudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起豬和其他動(dòng)物共患的一種急性傳染病，以發(fā)熱、腦脊髓炎等為主要臨床特征，可導(dǎo)致種豬繁殖障礙、新生仔豬神經(jīng)癥狀及高死亡率，是豬呼吸系統(tǒng)疾病綜合征（PRDC）的重要原發(fā)性病原[1-2]。PR同豬繁殖與呼吸綜合征和豬瘟等病原的混合感染是導(dǎo)致豬場(chǎng)疫病復(fù)雜的重要原因之一，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失[3]。1813年P(guān)R首次在美國發(fā)生，20世紀(jì)50年代，在我國首次暴發(fā)，2011年底疫情復(fù)發(fā)并造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[4]。為摸清貴州省規(guī)模豬場(chǎng)PR免疫及感染情況，對(duì)全省飼養(yǎng)量在50頭以上的規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行了全面調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 樣品

1.1.1 血清樣品 在全省9個(gè)市州布點(diǎn)采樣，考慮到地理位置和交通要素，每個(gè)采樣點(diǎn)隨機(jī)采集5～20份血清樣本。本次調(diào)查共對(duì)全省67個(gè)縣181個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)（飼養(yǎng)量50頭以上，47個(gè)豬場(chǎng)免疫過PRV疫苗）的臨床健康豬群，采集血清3 192份。

1.1.2 組織樣品 隨機(jī)抽取2個(gè)規(guī)模場(chǎng)、3個(gè)市場(chǎng)和11個(gè)屠宰場(chǎng)，采集豬扁桃體179份。

1.2 檢測(cè)試劑

偽狂犬病毒gI（gE）-ELISA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)107HS827）：武漢科前生物股份有限公司；偽狂犬病毒gB-ELISA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)107HS806）：武漢科前生物股份有限公司；偽狂犬病熒光PCR試劑盒（批號(hào)PR20170906P）：北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫有限公司。

1.3 檢測(cè)方法與結(jié)果判定

按照試劑盒操作步驟及判定方法進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 gE-ELISA檢測(cè)

共對(duì)181個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)采集的3 192份血清樣品進(jìn)行PRV野毒感染抗體檢測(cè)。結(jié)果顯示，場(chǎng)點(diǎn)總陽性率為71.27%，樣品總陽性率為16.85%。其中，種豬場(chǎng)場(chǎng)點(diǎn)陽性率為64.29%，樣品陽性率為30.81%；其它規(guī)模豬場(chǎng)場(chǎng)點(diǎn)陽性率為81.13%，樣品陽性率為20.34%；免疫豬場(chǎng)場(chǎng)點(diǎn)陽性率為53.19%，樣品陽性率為9.20%（表1）。

表1 規(guī)模豬場(chǎng)PRV gE-ELISA檢測(cè)結(jié)果

2.2 gB-ELISA檢測(cè)

隨機(jī)抽取47個(gè)免疫規(guī)模豬場(chǎng)中的26個(gè)，采集1 061份血清樣品進(jìn)行g(shù)B-ELISA檢測(cè)（因檢測(cè)試劑不足，未對(duì)全部免疫豬場(chǎng)進(jìn)行檢測(cè)）。結(jié)果顯示，場(chǎng)點(diǎn)陽性率為100%，樣品陽性率為60.79%（表2）。

表2 免疫豬場(chǎng)偽狂犬病gB-ELISA檢測(cè)結(jié)果

2.3 組織樣品檢測(cè)

共在2個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)、3個(gè)市場(chǎng)和11個(gè)屠宰場(chǎng)采集179份扁桃體，采用熒光PCR方法進(jìn)行PRV核酸檢測(cè)，檢出1份陽性（圖1）。

圖1 豬偽狂犬病熒光PCR檢測(cè)圖譜

3 分析與討論

3.1 豬場(chǎng)PRV隱性帶毒情況較為嚴(yán)重

據(jù)報(bào)道，2011—2013年我國華北、華中、華東和東北等地部分養(yǎng)豬場(chǎng)（包括免疫豬群）先后暴發(fā)PR疫情，PRV野毒感染率呈上升趨勢(shì)[5]。本次調(diào)查涉及貴州省67個(gè)縣（市、區(qū)）存欄50頭以上的臨床健康豬場(chǎng)181個(gè)，包括免疫和非免疫豬場(chǎng)，覆蓋面較廣，發(fā)現(xiàn)PRV野毒感染抗體（gE抗體）場(chǎng)點(diǎn)總陽性率為71.27%，個(gè)體總陽性率為16.85%，其中非免疫豬場(chǎng)陽性率更高，個(gè)體陽性率在20%以上，尤其是種豬場(chǎng)，高達(dá)30.81%。因此，貴州省規(guī)模豬場(chǎng)，尤其是種豬場(chǎng)應(yīng)加快開展PR凈化工作。

3.2 豬場(chǎng)PR免疫效果不佳

對(duì)26個(gè)免疫豬場(chǎng)1 061份血清樣品進(jìn)行g(shù)BELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，雖然gB抗體場(chǎng)點(diǎn)陽性率為100%，但個(gè)體陽性率僅為60.79%。這說明疫苗免疫雖有一定的效果，但個(gè)體陽性率不高，達(dá)不到理想的免疫保護(hù)效果。分析原因：一方面可能是隱性帶毒影響了免疫效果，另一方面也可能是病毒變異導(dǎo)致的。華利忠等[6]從2012—2014年豬群中分離鑒定出8株強(qiáng)毒力PRV野毒，發(fā)現(xiàn)其基因片段序列均發(fā)生了不同程度的變異。因此，研制針對(duì)PRV變異株的疫苗和診斷試劑，加強(qiáng)抗體監(jiān)測(cè)及免疫程序調(diào)整尤為重要。

3.3 豬場(chǎng)PRV病原學(xué)陽性檢出率不高

對(duì)2個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)、3個(gè)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和11個(gè)屠宰場(chǎng)179份扁桃體進(jìn)行熒光PCR檢測(cè)，檢出1份PRV核酸陽性，證實(shí)豬群中確實(shí)存在PR野毒感染。核酸陽性檢出率不高的原因：一方面可能是豬群中PRV帶毒量較低，另一方面也可能是樣品存放時(shí)間較長，或者是組織勻漿機(jī)研磨不到位導(dǎo)致病毒含量較低。下一步需重點(diǎn)對(duì)gE-ELISA檢測(cè)陽性率較高的場(chǎng)點(diǎn)開展病原學(xué)專項(xiàng)調(diào)查，進(jìn)一步提高采樣數(shù)量，以弄清楚豬群帶毒的真實(shí)情況及流行毒株。

4 結(jié)論

本次調(diào)查覆蓋范圍廣，涉及貴州省67個(gè)縣（市、區(qū)）所有存欄50頭以上的規(guī)模豬場(chǎng)。檢出的PRV gE抗體場(chǎng)點(diǎn)總陽性率和個(gè)體總陽性率較高，表明貴州省PRV感染范圍廣，感染程度較嚴(yán)重，尤其是種豬場(chǎng)，應(yīng)加快PR凈化工作的開展；檢出的PRV gB 抗體陽性率偏低，不足70%，說明貴州省的PRV疫苗免疫效果不佳。因此，貴州省應(yīng)加強(qiáng)PRV基因變異監(jiān)測(cè)，科學(xué)調(diào)整PR免疫程序，為規(guī)模豬場(chǎng)的PR凈化奠定基礎(chǔ)。

[1] 趙青，焦連國，王冬梅，等. 2013—2016年中國部分地區(qū)豬偽狂犬病野毒株感染血清學(xué)調(diào)查[J]. 豬業(yè)科學(xué).2017，34（3）：102-103.

[2] 殷震，劉景華. 動(dòng)物病毒學(xué)[M]. 北京：科技出版社，1997：998-1009.

[3] 陶順梅. 豬偽狂犬病的研究進(jìn)展[J]. 畜牧獸醫(yī)科技信息，2011，15（3）：15-16.

[4] 楊珊珊，徐璇，孫濤，等. 2016 年江蘇省部分豬場(chǎng)豬偽狂犬病血清流行病學(xué)調(diào)查[J]. 中國動(dòng)物檢疫，2017，34（8）：17-19.

[5] 戴愛玲，李曉華，黃思瓊，等. 福建省龍巖市規(guī)?；i場(chǎng)豬偽狂犬野毒感染的血清學(xué)調(diào)查[J]. 龍巖學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，29（2）：80-83.

[6] 華利忠，劉劍鋒，馮志新，等. 豬偽狂犬病病毒新流行變異毒株的研究進(jìn)展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2017，33（2）：476-480.