蒙藥漏蘆花總木脂素的含量測(cè)定

蘇日塔拉圖 王曉琴 韓國(guó)慶 劉麗穎

(1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院臨床蒙藥劑部，內(nèi)蒙古 通遼 028007；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

蒙藥漏蘆藥材來源于菊科植物祁州漏蘆Rhaponticum unifLorum (L.)DC.的干燥花序，又名野蘭、鬼油麻、狼頭花等，廣泛分布在中國(guó)東北、西北、華中等地區(qū)，生于山坡丘陵地、松林下或樺木林下、海拔390 ～ 2700米，頭狀花序單生莖頂，花序梗粗壯[1]。主治黏疫，腸刺痛，炭疽，白喉，麻疹，毒熱，心熱，訌熱，熾熱，血熱，傷熱[2-3]?！睹舍t(yī)藥選編》記載：“漏蘆花清疫熱，毒熱，心熱”。

課題組前期的研究表明漏蘆花主要的次生代謝產(chǎn)物為黃酮類和木脂素類化合物，其中，以泥胡木脂素B為代表的木脂素類化合物含量很高[4]。目前對(duì)蒙藥漏蘆花的研究主要集中在黃酮含量的測(cè)定等方面，對(duì)其總木脂素含量測(cè)定未見報(bào)道，本文建立了漏蘆花序的總木脂素含量測(cè)定方法，以期為蒙藥漏蘆花的進(jìn)一步研究和開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料與儀器

9批漏蘆花藥材分別采集于內(nèi)蒙古地區(qū)和購買于藥材公司和醫(yī)院；泥胡木脂素B對(duì)照品為實(shí)驗(yàn)室自制，經(jīng)1H-NMR和13C-NMR鑒定結(jié)構(gòu)，HPLC面積歸一化法純度≥98%。所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。

AL204電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；UV1000雙光束紫外可見分光光度計(jì)(上海天美科學(xué)儀器有限公司)；超聲波提取器(昆山市超聲儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取干燥至恒重的泥胡木脂素B對(duì)照品5.1 mg，用60%乙醇溶解，定容于25 mL容量瓶，得濃度為0.204 mg·mL-1泥胡木脂素B對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備: 取漏蘆花粉末約0.1g，精密稱定，置于150 mL具塞錐形瓶中，精密加入60 %乙醇溶液20 mL，稱重，用超聲(功率100W)提取30 min，再次稱重，用60%乙醇補(bǔ)足失重，過濾。精密吸取續(xù)濾液1 mL至25 mL容量瓶中，定容，搖勻待用。

2.3 最大吸收波長(zhǎng)確定:分別精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液1mL，置于25 mL容量瓶中，定容至刻度，充分搖勻，以隨行試劑做空白對(duì)照，在200 ～ 400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果二者均在340 nm波長(zhǎng)處呈現(xiàn)最大吸收，且空白對(duì)照無干擾，結(jié)果見圖1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制: 分別精密量取對(duì)照品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL置于25mL容量瓶，定容搖勻。分別得泥胡木脂素B濃度為11.6、17.4、23.2、29、34.8、40.6 μg·mL-1的對(duì)照品溶液，于340 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各吸光度，得線性回歸方程：Y = 0.02307X+0.00007(r = 0.9993)。表明泥胡木脂素B在11.6 ～ 40.6 μg·mL-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) : 按2.2項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，在340 nm處測(cè)定吸光度。結(jié)果表明總木脂素含量的RSD為0.62%，表明方法重復(fù)性良好。

2.6 精密度試驗(yàn): 按2.2項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，在340 nm處連續(xù)測(cè)定吸光度6次，結(jié)果總木脂素含量的RSD為0.41%，表明儀器的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn): 按2.2項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，在340 nm處于0、1、2、4、6、8 h測(cè)定吸光度，結(jié)果總木脂素含量的RSD為0.48%，結(jié)果表明樣品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)：取已知含量的同一藥材粉末6份，各約0.05 g，精密稱定。分別按藥材粉末已知總木脂素含量的80%、100%、120%3個(gè)水平精密加入泥胡木脂素B對(duì)照品，按2.2項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按2.3項(xiàng)下的方法在340 nm處測(cè)吸光度，計(jì)算含量及回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 含量測(cè)定

取9批漏蘆花藥材粉末，按2.2項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，在340 nm處測(cè)定吸光度，平行測(cè)定3次，取平均值。結(jié)果見表2。

表2 含量測(cè)定結(jié)果

4 討論

4.1 對(duì)最佳提取溶劑進(jìn)行考察，取漏蘆花粉末0.1g，精密稱定5份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入20 mL 50%、60%、70%、80%、90%乙醇，按2.2項(xiàng)下的供試品溶液制備方法，在340 nm處測(cè)定吸光度,結(jié)果60%乙醇對(duì)總木脂素的提取率最大，確定最佳提取溶劑為60%乙醇溶液。

4.2 本研究建立了紫外分光光度法測(cè)定蒙藥漏蘆花中總木脂素含量的方法，并對(duì)野外采集實(shí)驗(yàn)室陰干的藥材樣品以及收集于藥材市場(chǎng)和蒙中醫(yī)院的藥材樣品進(jìn)行了檢測(cè)。9批漏蘆花樣品中總木脂素含量在83.75 ～103.36 mg/g。本方法快捷、準(zhǔn)確，可望為漏蘆花藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)和有效控制提供科學(xué)依據(jù)。

[1]中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志[M]. 北京:科學(xué)出版社,1990,78(1):184.

[2]中國(guó)醫(yī)學(xué)百科全書編輯委員會(huì),中國(guó)醫(yī)學(xué)百科全書.蒙醫(yī)學(xué)[M]. 上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,1992:211.

[3]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·蒙藥分冊(cè) [S].1998:54.

[4]杜月,王曉琴,包保全,等. 祁州漏蘆花化學(xué)成分研究[J]. 中草藥, 2016,47(16):2817-2821.