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    蒙藥牛膽粉與蓽茇提取物滴丸制備方法及藥效學(xué)研究△

    2018-06-01 07:06:03畢力格李漢青范曉紅斯慶格
    中國民族醫(yī)藥雜志 2018年1期
    關(guān)鍵詞:凍干粉滴丸胡椒

    金 亮 畢力格 李漢青 范曉紅 斯慶格

    (內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010065)

    牛膽汁是??苿游稂S?;蛩5哪懼?。牛膽汁的藥用,始載于漢代的《神農(nóng)本草經(jīng)》一書,列為中品。本品味苦性寒,具有清肝明目,利膽通腸,解毒消腫之功效,廣泛用于治療肝熱目赤腫痛,小兒驚風(fēng),癰腫瘡毒及便秘及消渴等疾病。牛膽粉(干燥膽汁)也為蒙藥藥材,具有平息協(xié)日、愈傷、解毒、明目之功效。蒙醫(yī)臨床用于協(xié)日病、配毒癥療效顯著[1]。牛膽汁中含有多種膽酸類化學(xué)成分,其中包括鵝去氧膽酸、熊去氧膽酸及豬去氧膽酸。

    蓽茇來源為胡椒科植物蓽茇Piper Longum L.的干燥近成熟或成熟果穗,味辛,性溫。蒙醫(yī)用來調(diào)理胃火,祛巴達(dá)干、赫依,調(diào)理體素、滋補(bǔ)強(qiáng)壯、止痛。蓽茇含有酰胺類生物堿、揮發(fā)油、脂類等成分,蓽茇生物堿類分別為胡椒堿、幾內(nèi)亞胡椒堿、胡椒次堿、胡椒新堿、墻草堿、胡椒環(huán)堿等。蓽茇主要具有調(diào)血脂、解熱抗炎、鎮(zhèn)痛、抗血小板聚集、改善動脈粥樣硬化、降血壓、抗菌、鎮(zhèn)靜、抗氧化、降血脂等作用[2]。

    蓽茇與牛膽粉配伍是經(jīng)處方優(yōu)化形成。本文對此制成滴丸,以便適應(yīng)醫(yī)藥市場需求。

    1 儀器與材料

    聚乙二醇4000、聚乙二醇6000(PEG4000、PEG 6000,天津市大茂化學(xué)試劑廠)DY-201-100硅油、DY-201-350硅油(山東大易化工有限公司),液體石蠟(上海大場化工廠)。

    TDSJ-A型臺式多功能實(shí)驗(yàn)滴丸劑(北京正大綠洲制藥有限公司),Sartorius BT25S電子天平,d=0.01mg,(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)

    2 方法

    稱取600g牛膽粉,放入三角瓶中,加入1.2L的95%乙醇,封蓋,放入超聲波中提取,超聲波溫度30℃,時(shí)間30min,功率70%,每次提取1h,提取3次,每次超聲提取結(jié)束后,提取液上加適量乙酸乙酯放置30min沉淀,等提取液沉淀后過濾,最后合并過濾液,回收濃縮,冷凍干燥得496g牛膽粉備用。

    496g牛膽粉凍干粉加適量40%乙醇超聲溶解,將層析柱里處理好的樹脂1kg,緩慢加入40%乙醇牛膽粉溶液,吸附解析洗脫,收集60%和80%乙醇洗脫液,過濾,濃縮,冷凍干燥得產(chǎn)品。60%乙醇洗脫液凍干粉29.897g,80%乙醇洗脫液凍干粉21.182g。

    蓽茇有效部位的提取受乙醇濃度、溶劑用量、提取次數(shù)、提取時(shí)間等因素影響,本實(shí)驗(yàn)采用水-乙醇為提取溶劑,選用乙醇濃度(為體積百分比)為因素A(35~95%),提取時(shí)間為因素B(1~3h),提取次數(shù)為因素C(1~3次),溶劑用量為因素D(6~10倍)。提取方法用L9(34)正交表安排實(shí)驗(yàn)方案,平行2次實(shí)驗(yàn)。計(jì)算100g藥材提取胡椒堿量為評價(jià)指標(biāo),最佳提取工藝:65%乙醇,提取2h,提取次數(shù)為3次,溶劑用量為6倍。提取液50~65℃下減壓濃縮,至無醇味,濃縮物冷凍干燥,-40℃或-86℃超低溫預(yù)凍,冷凍干燥時(shí)間為24~30h,得到蓽茇提取物。

    選擇幾種合適的樹脂進(jìn)行動態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)研究。分別稱取處理好的、HPD-100、HPD-750、HPD-722、SIP1300、X-5型號的大孔吸附樹脂各100g,分別裝柱,精密量取蓽茇提取物20%~40%乙醇溶液,上樣,控制流速3~8mL/min,預(yù)吸附10~40min,然后3~5BV純凈水洗去顏色,再用20~95%乙醇梯度洗脫,收集各部位洗脫液,50~65℃下減壓濃縮,至無醇味,濃縮物冷凍干燥,-40℃或-86℃超低溫預(yù)凍,冷凍干燥時(shí)間為24~30h,得到各洗脫部位。紫外分光光度法測樹脂中各洗脫部位蓽茇總生物堿含量,HPLC法檢測各洗脫部位胡椒堿含量。

    稱取D001大孔吸附樹脂2kg,濕法裝柱,加95%乙醇浸泡24h以上,95%乙醇洗至出口洗滌液在試管中加3倍量水不顯渾濁為止,后用清水充分淋洗至無明顯乙醇?xì)馕?。使其液面高于樹脂層約10cm處,用3BV的3%~5%HCl以4~6BV/h的流速通過樹脂柱,并浸泡2~4h,而后用水以同樣流速洗至流出液呈中性。用相同體積的3%~5%的NaOH以4~6BV/h的流速通過樹脂柱,并浸泡2~4h,而后用水以同樣流速洗至流出液呈中性,備用。柱高43cm,直徑9cm,柱體積2734mL。稱取蓽茇提取物1365g,20%~40%乙醇溶解,紫外分光光度法測定蓽茇總生物堿含量3.1mg/mL,上樣流速50mL/min。預(yù)吸附30min,然后5BV40%乙醇洗去顏色,再用80%乙醇洗脫10BV,收集洗脫液, 50~65℃下減壓濃縮,至無醇味,冷凍干燥,-40℃或-86℃超低溫預(yù)凍,冷凍干燥時(shí)間為24~30h,得到蓽茇有效部位42.2g。

    樣品測定:取樹脂60%、70%和80%洗脫部位凍干粉,平行3份,精密稱定,流動相溶解,注入色譜儀,測定,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出胡椒堿含量,計(jì)算蓽茇生物堿有效部位中蓽茇總生物堿和胡椒堿百分含量,各樹脂洗脫部位蓽茇總生物堿含量為蓽茇總生物堿百分含量為50%~95%,胡椒堿百分含量為50%~90%。

    按照牛膽粉和蓽茇復(fù)方提取物凍干粉(50:1~1:50)與聚乙二醇質(zhì)量比1:2~8,將復(fù)方提取物凍干粉加入熔融的聚乙二醇(PEG6000)中,攪拌至混合均勻,得混合物。放置80℃水浴鍋上溶解,以滴速25~50滴/min、滴距8~12cm,將熔融的混合物滴入冷凝液中,所述冷凝液為二甲基硅油運(yùn)動粘度為100~350mm2/s,4~15℃冷凝成丸,收集滴丸,干燥,既得牛膽粉和蓽茇蒙藥組方配伍的滴丸。

    3 牛膽粉和蓽茇蒙藥組方配伍藥效實(shí)驗(yàn)

    3.1 對大鼠膽汁分泌的影響:采用膽道插管法,取體重為180~200g雄性大鼠16只,隨機(jī)分為兩組,即空白對照組和給藥組,每組8只雄性大鼠,空白組灌胃給予生理鹽水羧甲基纖維素鈉混懸液,給藥組灌胃給予100mg/kg的牛膽粉和蓽茇凍干粉,給藥后30min,用20%烏拉坦麻醉,手術(shù),插膽管,收集2h的膽汁分泌量。

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明,牛膽粉和蓽茇凍干粉能明顯增加大鼠膽汁的分泌量,見表1。

    表1 牛膽粉和蓽茇凍干粉對大鼠膽汁分泌的影響

    3.2 對小鼠血清膽固醇的影響:采用高鐵一硫酸顯色法,取體重18~22g小鼠16只,隨機(jī)分為兩組,即空白對照組和給藥組,各組8只小鼠,空白組灌胃給予生理鹽水羧甲基纖維素鈉混懸液,給藥組灌胃給予300mg/kg的牛膽粉和蓽凍干粉,連續(xù)給藥4d。于最后一次給藥后5h,摘除眼球取血,制備血清后,測定其膽固醇濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,給藥組與空白對照組之間有顯著差異,說明牛膽粉和蓽茇配伍凍干粉對血清膽固醇有明顯降低作用,見表2。

    4 結(jié)論

    牛膽粉(干燥膽汁)具有平息協(xié)日、愈傷、解毒、明目之功效。蒙醫(yī)臨床用于協(xié)日病、配毒癥療效顯著。蒙醫(yī)把蓽茇定位為醫(yī)治巴達(dá)干病類藥物,認(rèn)為其能祛巴達(dá)干、赫依、調(diào)理胃火、滋補(bǔ)強(qiáng)壯、祛寒溫胃、利肺下氣、祛痰、平喘?!稛o誤蒙藥志》中記載漢蓽茇最大最好,鮮時(shí)味甘,性寒、重、柔,干品柔辣,消化后味甘,治龍病、培根病,哮喘,咳嗽。蓽茇不僅有多種功效,也被作為香料或食品添加劑使用,主要因?yàn)槠浜卸喾N化學(xué)成分,至今報(bào)道有324個(gè)化合物。文獻(xiàn)報(bào)道,蓽茇酰胺類生物堿化合物是其主要藥效成分,胡椒堿為蓽茇生物堿含量較高的成分之一,是蓽茇生物堿中具有代表性的活性成分,目前含有蓽茇的蒙藥制劑多以胡椒堿為指控評價(jià)指標(biāo)。

    本文牛膽粉和蓽茇提取純化工藝合理簡單易操作,準(zhǔn)確可行、分離度好、重現(xiàn)性好,適合于牛膽粉和蓽茇及其制劑的質(zhì)量控制。

    牛膽粉和蓽茇凍干粉滴丸制備工藝簡單,滴丸的成型性和質(zhì)量受滴速、滴距、藥液及冷凝液溫度等多種因素的影響,因此,優(yōu)選滴丸制備工藝時(shí),難于用某一個(gè)指標(biāo)來衡量。

    藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,牛膽粉和蓽茇滴丸對大鼠有顯著地利膽作用,能明顯增加膽汁的分泌量;牛膽粉和蓽茇滴丸對小鼠血清膽固醇濃度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,給藥組與空白對照組之間有顯著差異,說明牛膽粉和蓽茇配伍滴丸對小鼠血清膽固醇有明顯降低作用。

    [1]白萬富,鞠愛華,楊乾,等.牛膽汁的化學(xué)成分及臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥雜志,2008,23(2):149.

    [2]包雪梅,那生桑,陸景坤.蓽茇有效部位群調(diào)血脂作用研究[J].中國中藥雜志,2013,38(6):909-913.

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