微顆粒紫菜粉投喂量對(duì)隆線溞(Daphnia carinata)種群增長(zhǎng)的影響

符芳菲，徐善良，袁 舟，王 莉，王丹麗

(1. 寧波大學(xué) 海洋學(xué)院； 2. 寧波大學(xué) 應(yīng)用海洋生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 寧波 315211)

動(dòng)物性活餌料培養(yǎng)是當(dāng)今水產(chǎn)育苗中必不可少的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，對(duì)于魚(yú)類、蝦類、蟹類的苗種培育尤其重要。枝角類因其大小適口、營(yíng)養(yǎng)豐富、易消化，是水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物苗種生產(chǎn)中理想的活餌料。天然水域的枝角類由于豐欠不定，且常帶來(lái)病原體，故人工培養(yǎng)枝角類技術(shù)越來(lái)越受到重視[1,2]。但是，傳統(tǒng)的方法多用稻草水、草漿、單胞藻或酵母等培養(yǎng)枝角類[3,4]，由于其操作繁雜，成本高，且培養(yǎng)不穩(wěn)定，不能滿足生產(chǎn)的需要。所以，尋找一種新的培養(yǎng)枝角類餌料的方法十分必要。迄今，已有關(guān)于大型藻粉及其酶解液用于貝類等餌料的研究報(bào)道[5-8]，紫菜作為一種常見(jiàn)的大型海藻，經(jīng)超細(xì)粉碎或進(jìn)一步酶解后的顆粒能被枝角類利用[6]。

隆線溞(Daphniacarinata)是分布較廣、易在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的一種大型溞類。其身體透明，易于觀察，能行孤雌和兩性生殖，個(gè)體發(fā)育迅速,發(fā)育階段明顯，種群增長(zhǎng)快[9]。本實(shí)驗(yàn)選擇微顆粒紫菜粉及其酶解液投喂隆線溞，觀察隆線溞在不同投喂量下的種群增長(zhǎng)速度，并與傳統(tǒng)Banta液培養(yǎng)方法進(jìn)行比較，旨在獲得微顆粒紫菜粉投喂方式下的最佳投喂量，為微顆粒紫菜粉規(guī)?；囵B(yǎng)枝角類提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 溞種采集與預(yù)培養(yǎng)

隆線溞于2012年5月采自寧波大學(xué)校內(nèi)水塘，在實(shí)驗(yàn)室鑒定分離多代后，取同一母溞生產(chǎn)的同一批同等大小個(gè)體的幼溞作為實(shí)驗(yàn)材料。實(shí)驗(yàn)于(25±1)℃恒溫箱中培養(yǎng)，人工光照1000 lx，并經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的預(yù)培養(yǎng)，得到適合溞群生長(zhǎng)的食物投喂量范圍。

1.2 餌料制備

Banta液配制：兔糞1.5 g+干稻草2 g+沃土20 g+水1000 mL；微顆粒紫菜粉用紫菜干品經(jīng)超微食品粉碎機(jī)粉碎后，300目分樣篩過(guò)篩得到；紫菜粉酶解液采用3 g微顆粒紫菜粉加750 mL瓊膠酶液，在28℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)15 h，獲得紫菜粉酶解后的懸濁液，4℃冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法

以容積250 mL燒杯為實(shí)驗(yàn)容器。實(shí)驗(yàn)共設(shè)3組，A組用Banta液培養(yǎng)，作為對(duì)照組；B組投喂微顆粒紫菜干粉，設(shè)置0.12 mg/mL、0.16 mg/mL和0.20 mg/mL 3個(gè)投喂量，記為B1，B2，B3；C組投喂微顆粒紫菜粉酶解液，設(shè)置1.2%、1.6%和2.0% 3個(gè)酶解液添加濃度，記為C1，C2，C3。每個(gè)餌料濃度實(shí)驗(yàn)安排5個(gè)平行，共35個(gè)燒杯。

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，向每個(gè)燒杯中加入設(shè)定的餌料，1 d后每個(gè)燒杯中放入30只新生幼溞，初始溞密度為0.12 ind/mL，置恒溫箱中培養(yǎng)，每天上午9:00及下午18:00定期觀察，從杯中開(kāi)始產(chǎn)幼溞起，每天計(jì)數(shù)燒杯中溞的個(gè)數(shù)，種群密度高時(shí)用5 mL注射器隨機(jī)抽樣計(jì)數(shù)，重復(fù)3次，求平均值。隔天向各燒杯中添加一次設(shè)定的餌料量，以維持食物密度的相對(duì)穩(wěn)定，隔天測(cè)pH值，監(jiān)測(cè)培養(yǎng)過(guò)程中的水質(zhì)變化，并及時(shí)吸除死溞，實(shí)驗(yàn)過(guò)程始終維持各杯水體積為250 mL。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及處理

所得數(shù)據(jù)利用SPSS13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析及Duncan多重比較檢驗(yàn)顯著性水平。

2 結(jié)果

2.1 3種方式培養(yǎng)下隆線溞的種群生長(zhǎng)

2.1.1 Banta液培養(yǎng)下隆線溞的種群密度變化

隆線溞在Banta液培養(yǎng)下的種群生長(zhǎng)見(jiàn)圖1。由圖可知，A組接種后的第6 d開(kāi)始產(chǎn)仔溞，種群密度由初始的0.12 ind/mL迅速增加至1.27 ind/mL，隔天產(chǎn)仔量又翻了一番達(dá)到2.6 ind/mL，在第7 d達(dá)到峰值，為3.33 ind/mL。此后，杯中的種群密度不斷下跌，第12 d種群密度僅為高峰時(shí)的55%，第15 d密度已降至0.5 ind/mL以下。溞體顏色表現(xiàn)為較透明、個(gè)體小，發(fā)白(見(jiàn)圖4-A)。

圖1 Banta液喂養(yǎng)下的種群密度變化

2.1.2 微顆粒紫菜粉投喂下隆線溞的種群密度變化

隆線溞在3個(gè)微顆粒紫菜粉投喂量下的種群生長(zhǎng)見(jiàn)圖2，經(jīng)F-雙樣本方差分析檢驗(yàn)，3個(gè)不同投喂量下，隆線溞的種群生長(zhǎng)存在顯著差異(P<0.05)。以B2組種群密度上升最快，產(chǎn)仔后3 d內(nèi)種群密度急劇增大，第7 d即達(dá)到高峰，為2.87 ind/mL，是初始值的24倍，此后種群密度呈波動(dòng)下降，第10天再次出現(xiàn)第二高峰，密度為2.47 ind/mL，兩高峰間的平均密度維持在2.67 ind/mL，第13 d后開(kāi)始大幅下降； B1組種群生長(zhǎng)呈單峰型，增長(zhǎng)明顯不如B2組，在第11 d達(dá)到種群密度高峰，為2.20 ind/mL，此后，種群密度開(kāi)始緩慢下降，并出現(xiàn)帶休眠卵的個(gè)體；B3組藻粉投喂量最多，但種群生長(zhǎng)極差，培養(yǎng)密度沒(méi)有明顯的高峰，顯著低于B1和B2兩組，平均密度僅為0.53 ind/mL，是B1和B2平均密度的42%和30%。

圖2 紫菜粉喂養(yǎng)下的種群密度變化

2.1.3 不同紫菜粉酶解液濃度下隆線溞的種群密度變化

圖3 紫菜粉酶解液喂養(yǎng)下的種群密度變化

圖4 Banta液(A)和紫菜粉(B)培養(yǎng)下的隆線溞溞體比較

圖3為隆線溞在紫菜粉酶解液投喂下的種群生長(zhǎng)曲線。經(jīng)F-雙樣本方差分析檢驗(yàn)，C2和C3的種群生長(zhǎng)差異不顯著(P>0.05)，但C2和C3的種群密度顯著高于C1組(P<0.05)；在酶解液投喂下，隆線溞的種群生長(zhǎng)起勢(shì)較慢，但高峰維持時(shí)間較長(zhǎng)，且種群密度峰值較大，C2和C3的高峰分別在10 d和14 d，峰值為5.73 ind/mL和5.2 ind/mL。C1組種群一直維持在1～2 ind/mL間，最高值才2.4 ind/mL,3組均在第14 d后種群密度出現(xiàn)下降。酶解液喂養(yǎng)下的溞體透紅，活力強(qiáng)，水質(zhì)較清，無(wú)異味。

2.2 不同食物投喂下培養(yǎng)液的pH值變化

不同食物投喂下培養(yǎng)液pH值與隆線溞種群密度變化見(jiàn)表1。經(jīng)SPSS13.0軟件進(jìn)行相關(guān)性檢驗(yàn)，3種食物培養(yǎng)下，培養(yǎng)液的pH值變化與隆線溞種群密度間的相關(guān)性顯著。表1的各項(xiàng)指標(biāo)表明，實(shí)驗(yàn)期間各組的平均pH值變化為7.85～8.30，呈弱堿性，且各組種群密度達(dá)到高峰時(shí)的平均pH值大于7.91，各組種群密度低谷時(shí)的平均pH值則低于7.84，可見(jiàn)種群生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液的平均pH值有著密切的關(guān)系。雖然pH值7.8以下隆線溞也能正常存活、產(chǎn)仔，但pH值8.0以上更容易培養(yǎng)，種群密度更高。

表1 不同食物投喂下pH值的變化與隆線溞種群密度的關(guān)系

3 討論

3.1 食物種類與投喂量對(duì)隆線溞培養(yǎng)效果的影響

從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，A組用傳統(tǒng)的Banta液培養(yǎng)，隆線溞的種群生長(zhǎng)特征比較符合一般的枝角類生長(zhǎng)特征[10]。由于剛開(kāi)始食物較豐富，隆線溞生長(zhǎng)良好，接種后第7 d很快達(dá)到種群高峰，但是在有限空間里，種群數(shù)量的增加導(dǎo)致食物不足、水質(zhì)逐漸變差，種群數(shù)量開(kāi)始下降，出現(xiàn)先增后減的現(xiàn)象，符合簡(jiǎn)單的不完全邏輯斯諦增長(zhǎng)[11]。投喂微顆粒紫菜粉的B組，設(shè)置的3個(gè)投喂量中，以投喂0.16 mg/mL的B2組的種群生長(zhǎng)最快，產(chǎn)仔最早，最高密度達(dá)2.87 ind/mL，與A組相近，并且在一周時(shí)間內(nèi)保持較高的種群密度狀態(tài)，而投喂0.12 mg/mL的B1組種群生長(zhǎng)不及B2組，投喂0.20 mg/mL的B3組則更差，一直處于低種群密度狀態(tài)。投喂紫菜粉酶解液的C組培養(yǎng)效果明顯優(yōu)于直接投喂微顆粒紫菜粉的B組，尤其是投喂1.6%的C2組的培養(yǎng)效果最為理想，種群生長(zhǎng)速度最快，溞體透紅，活力強(qiáng)(圖4-B)，最高密度達(dá)到5.8 ind/mL，是B2組的2倍。投喂2.0%的C3組效果次之，投喂1.2%的C1組最差。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Banta液培養(yǎng)隆線溞可以獲得比較穩(wěn)定的培養(yǎng)效果，但種群高峰的維持時(shí)間和最高種群密度不及微顆粒紫菜粉酶解液培養(yǎng)的C2和C3組。而用微顆粒紫菜粉直接投喂的方法不能達(dá)到理想的效果，原因是紫菜經(jīng)過(guò)超細(xì)粉碎，許多顆粒吸水后的大小在200 μm以上，顆粒仍然偏大，隆線溞很難直接攝食，必須依靠水中的微生物逐漸分解后才能利用。采用微顆粒紫菜粉酶解液投喂的C組，由于事先將微顆粒紫菜粉用瓊膠酶進(jìn)行酶解處理，隆線溞很容易利用紫菜的酶解產(chǎn)物，使得培養(yǎng)的溞獲得充足的營(yíng)養(yǎng)，個(gè)體健壯，體色透紅，繁殖能力增強(qiáng)，因此獲得了比Banta液培養(yǎng)更好的效果。

3.2 培養(yǎng)液pH值變化與隆線溞種群密度的關(guān)系

在枝角類培養(yǎng)中，除了食物、溫度、鹽度、密度等因子外，pH值也是影響溞類生長(zhǎng)的一個(gè)不可忽略的重要因素[12,14,15]。通過(guò)各實(shí)驗(yàn)組的pH值監(jiān)測(cè)結(jié)果分析(表1)，我們可以發(fā)現(xiàn)，隆線溞在弱堿性的環(huán)境中可以生長(zhǎng)繁殖，與以往報(bào)道的一致[13]。同時(shí)，溞群的數(shù)量增加在一定程度上也會(huì)使水體的pH值上升，兩者相互影響，相互制約。實(shí)驗(yàn)中用Banta液培養(yǎng)的水體pH值較為穩(wěn)定，種群密度數(shù)量波動(dòng)不大，而用微顆粒紫菜粉和酶解液培養(yǎng)時(shí)，由于微生物對(duì)紫菜粉的分解作用，使培養(yǎng)液的pH值波動(dòng)較大，并且伴隨著pH值的波動(dòng)，隆線溞的種群密度也隨之發(fā)生顯著的增減。由表1我們不難看出用紫菜粉培養(yǎng)隆線溞時(shí)，適宜的pH值應(yīng)控制在8.0～8.2，這時(shí)的隆線溞生長(zhǎng)狀態(tài)最好，種群密度最高，溞體最健壯，這3種不同餌料的培養(yǎng)也恰恰說(shuō)明了枝角類對(duì)環(huán)境pH的敏感性。所以在用微顆粒紫菜粉培養(yǎng)枝角類過(guò)程中，應(yīng)用酸堿調(diào)節(jié)pH值，控制在最適范圍內(nèi)，才能更好地促進(jìn)溞的生長(zhǎng)。

3.3 用微顆粒紫菜粉培養(yǎng)枝角類的前景與工藝探討

培養(yǎng)枝角類的餌料種類及其投喂量是枝角類人工培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵因素[16]。傳統(tǒng)的稻草水或單胞藻培養(yǎng)枝角類，存在費(fèi)時(shí)費(fèi)力，培養(yǎng)產(chǎn)量不穩(wěn)定的問(wèn)題，能否找到合理可行的培養(yǎng)枝角類的替代餌料源，是枝角類生產(chǎn)性培養(yǎng)中普遍關(guān)心的問(wèn)題。紫菜是最為常見(jiàn)的食用紅藻，在紫菜養(yǎng)殖后期，筏架上大量老紫菜因利用價(jià)值低而被丟棄，我們嘗試將這些紫菜干燥粉碎成微顆粒后進(jìn)行開(kāi)發(fā)利用。紫菜干物質(zhì)中含粗蛋白34.88%～37.21%、碳水化合物46.86%～49.27%、粗脂肪1.68%～2.09%、灰分8.75%～9.92%[17，18]，說(shuō)明紫菜粉是一種典型的高蛋白、低脂肪、富含礦物元素的食物，其營(yíng)養(yǎng)成分非常符合枝角類對(duì)食物的需求。實(shí)驗(yàn)也證明，用微顆粒紫菜粉培養(yǎng)的隆線溞個(gè)大健壯，溞體呈紅色，活力好，發(fā)育快，產(chǎn)仔量多。尤其是經(jīng)瓊膠酶酶解后的藻粉更易被枝角類吸收利用，是一種十分適合培養(yǎng)枝角類的餌料源。但是，在培養(yǎng)時(shí)如果直接投喂微顆粒紫菜粉，由于紫菜粉粒徑大，適口性差，經(jīng)腐化一段時(shí)間后，才會(huì)逐漸被隆線溞攝食，不能充分利用，而紫菜粉酶解液很好地解決了這一問(wèn)題。紫菜粉酶解液是指通過(guò)產(chǎn)瓊膠酶的菌株進(jìn)一步酶解微顆粒紫菜粉得到的懸濁液[19]。在紫菜粉酶解液實(shí)驗(yàn)組中，不僅餌料的利用率高，而且其水質(zhì)也不易惡化，隆線溞種群生長(zhǎng)快速，種群密度顯著高于另外兩組。

已有眾多研究證實(shí)同種餌料不同的投喂量對(duì)溞類種群增長(zhǎng)有直接的影響[3,20，21]，因此，在枝角類大量培養(yǎng)中，要選擇合適的餌料密度，即可克服餌料密度低時(shí)溞類攝食不足，又可避免餌料過(guò)剩造成的浪費(fèi)和對(duì)溞類生長(zhǎng)環(huán)境的不良影響，用微顆粒紫菜粉培養(yǎng)枝角類時(shí)同樣存在這樣的問(wèn)題，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果認(rèn)為采用紫菜酶解液為1.6%和微顆粒紫菜粉為0.16 mg/mL培養(yǎng)隆線溞是比較合理的投喂量，這對(duì)今后推廣用微顆粒紫菜粉大量培養(yǎng)枝角類具有重要的參考價(jià)值。

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